基于內質網應激信號通路探討熄風解痙湯對蛛網膜下腔出血大鼠早期腦損傷保護作用的機制研究

〔摘要〕 目的 觀察熄風解痙湯對早期蛛網膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage， SAH）大鼠腦組織中內質網應激（endoplasmic reticulum stress，ERS）信號通路相關因子表達的影響，探討熄風解痙湯對SAH大鼠早期腦損傷（early brain injury， EBI）的保護作用機制。方法 選取成年健康雄性SD大鼠168只，采用血管內穿刺法建立SAH模型，造模成功后按照隨機數字表法分為對照組（等體積蒸餾水）、假手術組（等體積蒸餾水）、模型組（等體積蒸餾水）、尼莫地平組[10 mg/（kg·d）]、熄風解痙湯低劑量組[10.8 g/（kg·d）、熄風解痙湯高劑量組[43.2 g/（kg·d）]、尼莫地平[10 mg/（kg·d）]+熄風解痙湯[21.6 g/（kg·d）]組，每組24只，每12 h給藥1次，連續用藥72 h。采用Garcia神經功能評分評估神經功能受損程度；HE染色觀察海馬區神經細胞形態；TUNEL染色檢測大鼠海馬組織細胞凋亡情況；Western blot檢測內質網應激相關標志物葡萄糖調節蛋白78（glucose regulatory protein 78， GRP78）、C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein， CHOP）、胱天蛋白酶-12（cysteine aspartic acid specific protease-12， Caspase-12）蛋白的表達水平；計算腦組織含水量；EB染色檢測血腦屏障通透性。結果 與對照組、假手術組比較，模型組海馬區組織層次結構不清，各層細胞排列疏松，可見大量凋亡細胞；各時間點的海馬區組織神經細胞凋亡比例、腦組織EB含量、腦組織含水量及 GRP78、CHOP、Caspase-12蛋白表達水平升高（Plt;0.05），Garcia神經功能評分減低（P＜0.05）。與模型組比較，熄風解痙湯低、高劑量組大鼠海馬區組織結構較模型組清晰，細胞凋亡數量減少；各時間點的海馬區組織神經細胞凋亡比例、腦組織含水量及 GRP78、CHOP、Caspase-12蛋白表達水平降低（Plt;0.05），Garcia神經功能評分、腦組織EB含量升高（P＜0.05）。結論 SAH后EBI過程中存在內質網應激反應，熄風解痙湯可降低內質網應激相關蛋白GRP78、CHOP、Caspase-12表達水平，提高EBI過程中大鼠的神經行為學評分，降低腦組織含水量，降低血腦屏障通透性。

〔關鍵詞〕 熄風解痙湯；蛛網膜下腔出血；早期腦損傷；內質網應激信號通路；內質網應激相關蛋白

〔中圖分類號〕R256" " " " "〔文獻標志碼〕A" " " " " 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.06.001

Mechanism of protective effects of Xifeng Jiejing Decoction on early brain injury in rats with subarachnoid hemorrhage based on endoplasmic reticulum stress signaling pathway

XIANG Xinggang， ZHOU Yifan， YIMAMU Yidayitula， ZHAO Yong， MAIMAIJIANG Abulizi， LIN Lin*

Traditional Chinese Medical Hospital of" Xinjiang Uygur Autonomous Region， Urumqi， Xinjiang 830000， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To observe the effects of Xifeng Jiejing Decoction （XFJJD） on the expression of endoplasmic reticulum stress （ER stress） signaling pathway-related factors in the brain tissue of rats with early subarachnoid hemorrhage （SAH）， and to explore the protective mechanism of XFJJD on early brain injury （EBI） in SAH rats. Methods A total of 168 healthy adult male SD rats were selected to establish the SAH model by intravascular puncture. After successful modeling， the rats were divided into control group （an equal volume of distilled water）， sham-operated group （an equal volume of distilled water）， model group （an equal volume of distilled water）， nimodipine group [10 mg/（kg·d）]， and low-dose XFJJD [10.8 g/（kg·d）]， high-dose XFJJD group [43.2 g/（kg·d）]， and nimodipine [10 mg/（kg·d）]+XFJJD group [21.6 g/（kg·d）] by random number table method， with 24 rats in each group. Each group was administered once every 12 h for 72 h continuously. The degree of neurological impairment was assessed by Garcia score; the morphology of hippocampal nerve cells was observed by HE staining; TUNEL staining was performed to determine the apoptosis of hippocampal cells in rats; Western blot was used to check the expression levels of endoplasmic reticulum stress-related markers， including glucose regulatory protein 78 （GRP78）， C/EBP homologous protein （CHOP）， and cysteine aspartic acid specific protease-12 （cysteine-12）; the water content of brain tissue was calculated; EB staining was used to examine the permeability of the blood-brain barrier. Results Compared with the control group and the sham-operated group， the model group exhibited unclear hierarchical structure of the hippocampus， loose arrangement of cells in each layer， and a large number of apoptotic cells; the proportion of apoptosis of hippocampal nerve cells， the EB content and water content of the brain tissue， as well as the protein expression levels of GRP78， CHOP， and Caspase-12 in the hippocampus increased at various time points （Plt;0.05）， while the Garcia score decreased （Plt;0.05）. Compared with the model group， the low- and high-dose XFJJD groups showed clearer hippocampal tissue structure and reduced number of apoptotic cells; the proportion of apoptosis of hippocampal nerve cells， water content of brain tissue， and the protein expression levels of GRP78， CHOP， and Caspase-12 decreased at various time points （Plt;0.05）， while the Garcia score and EB content of brain tissue increased （Plt;0.05）. Conclusion Endoplasmic reticulum stress reaction occurs during the EBI process after SAH. XFJJD can reduce the expression levels of endoplasmic reticulum stress-related proteins including GRP78， CHOP， and Caspase-12， improve neurobehavioral scores of rats during EBI process， lower the water content of brain tissue， and reduce the permeability of blood-brain barrier.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 Xifeng Jiejing Decoction; subarachnoid hemorrhage; early brain injury; endoplasmic reticulum stress signaling pathway; endoplasmic reticulum stress-related proteins

蛛網膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage， SAH）是指腦底部或腦表面血管破裂后，血液流入蛛網膜下腔引起相應臨床癥狀的一種腦卒中，占所有腦卒中發病的5%～10%，嚴重危及人類的生命健康[1]。早期腦損傷（early brain injury， EBI）是SAH發病后72 h內大腦發生的一系列變化，包括腦水腫、血腦屏障損傷、炎癥反應、氧化應激、神經細胞凋亡等[2-3]。內質網影響細胞內合成和修飾蛋白質，內質網應激（endoplasmic reticulum stress， ERS）在神經退行性疾病、神經炎性疾病的發生和發展過程中起決定性的作用[4]。ERS可造成細胞凋亡[5-6]，但其機制尚不明確。葡萄糖調節蛋白78（glucose regulatory protein 78，GRP78）、C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein，CHOP）、胱天蛋白酶-12（cysteine aspartic acid specific protease-12，Caspase-12）是被公認為內質網應激的標志蛋白，在細胞發生內質網應激時，其表達升高，從而誘導細胞凋亡[7]。

SAH屬于中醫學“中風”范疇，源于《靈樞·邪氣藏府病形》，其病機復雜，以“風、火、痰、瘀、氣、虛”為主因，其中以肝腎陰虛為根本，病變涉及心、肝、脾、腎等臟。國醫大師沈寶藩教授認為，中風病為肝腎陰虧、肝陽偏亢、氣血逆亂所致，治以鎮肝息風為主，佐以滋養肝腎為法，在鎮肝熄風湯的基礎上創制了熄風解痙湯[8]。熄風解痙湯方中懷牛膝引血下行、補益肝腎，為君藥；赭石鎮肝降逆，龍骨、牡蠣、龜甲、白芍、天麻益陰潛陽、鎮肝息風，共為臣藥；玄參、天門冬滋陰清熱，壯水涵木，肝喜條達而惡抑郁，純用重鎮之品以強制之，影響其條達之性，故用茵陳、川楝子、生麥芽清泄肝熱、疏肝理氣，川芎行氣活血，以利于肝陽的平降鎮潛，均為佐藥；炙甘草調和諸藥，與生麥芽相配，并能和胃調中，防止金石類藥物礙胃之弊，為使藥。諸藥成方，共奏鎮肝熄風之效。在前期研究中本課題組發現，熄風解痙湯聯合尼莫地平能夠有效改善早期SAH患者的腦血流，平衡腦灌注，改善腦血管內皮細胞功能，抑制機體炎癥反應，提高患者生活質量，改善預后[9]。

因此，本研究在前期研究的基礎上，進一步以內質網應激信號通路及其下游凋亡蛋白為切入點，探討熄風解痙湯治療SAH的保護作用機制，為SAH后EBI的治療提供新思路和靶點。

1 材料與方法

1.1" 實驗動物

SPF級成年雄性SD大鼠168只，體質量250～300 g，實驗動物生產許可證號：SCXK（新）2018-0002，在新疆醫科大學動物實驗中心飼養2周，嚴格控制飼養環境，溫度（25±1） ℃，濕度保持50%±10%，12 h/12 h循環光照。嚴格遵守實驗室動物保護指導原則進行動物研究，實驗設計及流程均經過新疆醫科大學實驗動物倫理委員會批準，倫理審批號：IACUC-20210725-18。

1.2" 主要藥物與試劑

熄風解痙湯配伍：懷牛膝30 g、龍骨（先煎）30 g、牡蠣（先煎）30 g、赭石（先煎）20 g、龜甲（先煎） 15 g、白芍15 g、天麻10 g、玄參15 g、天門冬15 g、川楝子9 g、茵陳9 g、生麥芽13 g、川芎10 g、炙甘草9 g。藥物均由新疆醫科大學附屬中醫醫院制劑室提供，上述藥物浸泡1 h，采用自動煎藥機煎藥，每劑煎煮兩次，第一次煎煮30 min，第二次煎煮20 min，濾出合并藥液約400 mL，經物理的方法將水煎劑濃縮至含原生藥量0.575 g/mL，經120 ℃、400 kPa下消毒25 min，冷卻后密封包裝，4 ℃保存備用。尼莫地平片（拜耳醫藥保健有限公司，國藥準字H20003010，批號：2109007，規格：30 mg/片）。

TUNEL檢測試劑盒（武漢伊萊瑞特生物科技有限公司，批號：E-CK-A331）；兔源性Caspase-12抗體、GRP78抗體、CHOP抗體（江蘇親科生物研究中心有限公司，批號：AF51250、AF5366、AF5280）；BCA蛋白濃度測定試劑盒（北京索萊寶科技有限公司，批號：PC0020）；HE染色液（湖南艾佳生物科技股份有限公司，批號：P041IR）。

1.3" 主要儀器

光學顯微鏡（德國徠卡儀器有限公司，型號：DM4000）；高速冷凍離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司，型號：H2050R）；全自動多功能分析儀[賽默飛世爾科技（中國）有限公司，型號：Triiogy]；電泳儀、轉膜槽[伯樂生命醫學產品（上海）有限公司，型號：1645050、Mini-Trans Blot]；PCR儀（杭州朗基科學儀器有限公司，型號：Q2000B）；電子天平（上海全福實業有限公司，型號：MS205DU）；光凝膠成像分析系統（北京六一生物科技有限公司，型號：WD-9413B）。

1.4" 分組、造模及給藥

SPF級成年健康雄性SD大鼠168只，適應性飼養2周后按照隨機數字表法分為對照組、假手術組、模型組、尼莫地平組、熄風解痙湯低劑量組、熄風解痙湯高劑量組、尼莫地平+熄風解痙湯組，每組24只，并進行編號。除對照組、假手術組外，其余各組進行SAH模型造模。

采用血管內穿刺法建立SAH模型[10]：除對照組外，其余各組通過腹腔注射2.5%戊巴比妥鈉溶液麻醉，麻醉成功后仰臥固定至手術板上，75%乙醇消毒頸部皮膚，作頸部正中切口，分離暴露右側頸部動脈、頸內動脈和頸外動脈，將4-0尼龍線頭從頸外動脈殘端插入右頸內動脈，直至刺破頸內動脈末端分叉處。假手術組大鼠僅在手術操作過程中將尼龍線頭端送至右頸內動脈，但不刺破頸內動脈分叉處[11]。SAH模型肉眼觀可見大鼠大腦表面彌散分布積血，其中在腦底動脈環、小腦延髓池及腦干腹側有大量積血存在；HE染色在蛛網膜下腔見到大量紅細胞，以此判定為造模成功[12]。

熄風解痙湯低、高劑量組，尼莫地平+熄風解痙湯組予以不同濃度的熄風解痙湯連續干預3 d，每12 h灌胃1次，給藥劑量計算方式參照《中醫科研設計與統計學》[13]中實驗動物給藥方法部分。低劑量組、高劑量組以中劑量組的1/2倍、2倍劑量給藥，分別為10.8、43.2 g/（kg·d）[14]。空白組、假手術組、模型組給予等體積蒸餾水灌胃，尼莫地平組予尼莫地平10 mg/（kg·d）灌胃治療[15]，尼莫地平+熄風解痙湯組予尼莫地平10 mg/（kg·d）及熄風解痙湯21.6 g/（kg·d）灌胃治療實驗過程中出現死亡的大鼠予以剔除并根據要求進行補充。

1.5" 觀察指標

1.5.1" 神經功能評分" 根據參考文獻[6]，在造模成功后6、12、24、48、72 h記錄各組大鼠Garcia神經功能評分包括自主活動、對稱性的四肢活動、前肢伸展活動、攀爬能力、本體感覺、胡須觸碰反射。最高18分，最低5分，得分越高，表明大鼠神經功能受損程度越輕。

1.5.2" HE染色觀察海馬組織形態結構" 在造模后72 h，7組大鼠中隨機各取1只，麻醉生效后斷頭、完整取下腦組織。對照組和模型組在10%甲醛溶液中固定至少24 h，組織包埋在石蠟中，切成4 μm的切片，經蘇木精初染5 min和伊紅復染4 min后，中性樹膠封片，行HE染色并在光學顯微鏡下觀察海馬組織形態結構。

1.5.3" GRP78、CHOP和Caspase-12蛋白表達水平檢測" 提取總蛋白，BCA法測定蛋白含量。將裂解物在4 ℃下以12 000 r/min，離心20 min（離心半徑8.5 cm），收集上清液，電泳分離蛋白，轉膜，按照嚴格的抗原抗體反應條件，分別添加GRP78、CHOP和Caspase-12一抗，稀釋比例分別為1∶1 000、1∶300和1∶300，在4 ℃下孵育過夜。次日，用PBST對PVDF轉膜3次、洗滌，孵育，以便在后續的ECL顯色反應中能夠檢測到目標蛋白。

1.5.4" 血腦屏障通透性檢測" 采用EB染色評估血腦屏障在SAH后的通透性變化[14]。將2% Evans染料（4 mL/kg）經右側股靜脈緩慢注射，持續約2 min以上。1 h后用5%水合氯醛（7 mL/kg）將大鼠麻醉，經心臟持續灌注0.9%氯化鈉溶液以去除血液中的Evans染料，灌注完成后斷頭取腦，在PBS緩沖液（pH 7.4）中放入腦組織，制備成勻漿，冷卻后以12 000 r/min離心20 min（離心半徑8.5 cm）。使用分光光度計測量上清液在620 nm處Evans染料的吸光度值。EB含量越高提示血腦屏障破壞、其通透性增加。

1.5.5" 腦組織含水量檢測" 造模成功后3、6、12、24、48、72 h檢測大鼠腦組織含水量。水合氯醛麻醉大鼠，頭部切斷，取出腦組織，并進行稱量以獲取濕重數據。每個腦組織樣本放置在100 ℃的烘箱中烘干7 h后，再次進行稱量，可以得到腦組織樣本的干重。最后，計算腦組織的含水量=（濕重-干重）/濕重×100%。

1.5.6" 大鼠海馬組織細胞凋亡檢測" 剝離各組大鼠海馬組織，生理鹽水沖洗，4%多聚甲醛固定，石蠟包埋，切片（厚度5 μm），嚴格按照TUNEL凋亡試劑盒說明書標記海馬組織中的凋亡細胞，在顯微鏡下觀察和收集圖像，并為每個切片隨機選擇5個視野計算神經細胞的凋亡率[16]。

1.6" 統計學分析

采用SPSS 26.0統計軟件進行統計學分析。符合正態分布的計量資料以“ｘ±s”表示，采用t檢驗；非正態分布的計量數據，采用Wilcoxon秩和檢驗；計數資料采用χ2檢驗，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1" 各組大鼠Garcia神經功能評分比較

與對照組、假手術組比較，其余各組各時間點的Garcia神經功能評分均降低（P＜0.05）；與模型組比較，用藥組各時間點的Garcia神經功能評分均升高（P＜0.05）；與尼莫地平組比較，熄風解痙湯低、高劑量組在24、48、72 h的Garcia神經功能評分均降低（P＜0.05），尼莫地平+熄風解痙湯組在12、24、48、72 h的Garcia神經功能評分均升高（Plt;0.05）；與熄風解痙湯低、高劑量組比較，尼莫地平+熄風解痙湯組12、24、48、72 h的Garcia神經功能評分均升高（P＜0.05）。詳見表1。

2.2" 各組大鼠海馬區組織結構比較

對照組、假手術組大鼠海馬區組織各層結構清晰，細胞連續，細胞核數量正常；模型組海馬區組織各層紊亂變性；尼莫地平組大鼠海馬區組織各層結構紊亂，細胞連續性、細胞核數量優于模型組；熄風解痙湯低、高劑量組大鼠海馬區組織結構較模型組清晰；尼莫地平+熄風解痙湯組大鼠海馬區組織結構較清晰，明顯優于模型組、尼莫地平組及熄風解痙湯低、高劑量組。詳見圖1。

2.3" 各組大鼠腦組織細胞中GRP78、CHOP和Caspase-12表達水平比較

與對照組、假手術組比較，模型組、尼莫地平+熄風解痙湯組和熄風解痙湯低、高劑量組在各時間點的GRP78、CHOP蛋白表達水平升高（P＜0.05）；與對照組、假手術組比較，尼莫地平組在3、6、12、24、48 h時GRP78、CHOP蛋白表達水平升高（P＜0.05）；72 h時，尼莫地平組GRP78蛋白表達水平高于對照組（P＜0.05），低于假手術組（P＜0.05），CHOP蛋白表達水平低于對照組（P＜0.05），高于假手術組（P＜0.05）。與對照組、假手術組比較，模型組、尼莫地平組和熄風解痙湯低、高劑量組在各時間點的Caspase-12蛋白表達水平升高（P＜0.05）；尼莫地平+熄風解痙湯組在3、6、12 h時Caspase-12蛋白表達水平升高（P＜0.05），在24、48、72 h時Caspase-12蛋白表達水平降低（P＜0.05）。與模型組比較，用藥組各時間點的GRP78、CHOP、Caspase-12蛋白表達水平降低（P＜0.05）。與尼莫地平組比較，熄風解痙湯低、高劑量組在6、12、24、48、72 h時GRP78、CHOP、Caspase-12蛋白表達升高（P＜0.05）；尼莫地平+熄風解痙湯組GRP78、CHOP蛋白在6、12、24、48 h的表達水平降低（P＜0.05），72 h時升高（P＜0.05），Caspase-12在6、12、24、48、72 h的表達水平降低（P＜0.05）。與熄風解痙湯低劑量組比較，熄風解痙湯高劑量組在6、12、24、48 h時Caspase-12蛋白表達水平降低（P＜0.05）。與熄風解痙湯低、高劑量組比較，尼莫地平+熄風解痙湯組在6、12、24、48、72 h時GRP78、CHOP、Caspase-12蛋白表達水平降低（P＜0.05）。詳見表2—4，圖4。

2.4" 各組大鼠腦組織血腦屏障通透性比較

與對照組比較，其余各組各時間點腦組織EB含量均升高（Plt;0.05）；與假手術組比較，模型組和用藥組各時間點腦組織EB含量均升高（Plt;0.05）；與模型組比較，用藥組各時間點腦組織EB含量均升高（Plt;0.05）；與尼莫地平組比較，在6、12、24、48、72 h，熄風解痙湯低、高劑量組腦組織EB含量均降低（Plt;0.05），尼莫地平+熄風解痙湯組腦組織EB含量均升高（Plt;0.05）；與熄風解痙湯低、高劑量組比較，在6、12、24、48、72 h，尼莫地平+熄風解痙湯組腦組織EB含量均升高（Plt;0.05）。詳見表5。

2.5" 各組大鼠腦組織含水量比較

與對照組、假手術組比較，模型組、尼莫地平組和熄風解痙湯低、高劑量組在各時間點腦組織含水量均升高（P＜0.05）；尼莫地平+熄風解痙湯組在3、6 h腦組織含水量升高（P＜0.05），24 h腦組織含水量降低（P＜0.05）。與對照組比較，尼莫地平+熄風解痙湯組在48、72 h腦組織含水量升高（P＜0.05）。與假手術組比較，尼莫地平+熄風解痙湯組在12、48、72 h腦組織含水量降低（P＜0.05）。與模型組比較，用藥組各時間點腦組織含水量均降低（P＜0.05）。與尼莫地平組比較，熄風解痙湯低、高劑量組各時間點腦組織含水量均升高（P＜0.05），尼莫地平+熄風解痙湯組在6、12、24、48、72 h時腦組織含水量均降低（P＜0.05）。與熄風解痙湯低、高劑量組比較，尼莫地平+熄風解痙湯組各時間點腦組織含水量均降低（P＜0.05）。詳見表6。

2.6" 各組大鼠海馬組織細胞凋亡情況比較

對照組、假手術組大鼠海馬組織細胞未見凋亡，模型組大鼠海馬區組織細胞可見大量細胞凋亡，呈棕褐色；尼莫地平組及熄風解痙湯低、高劑量組大鼠海馬區組織細胞凋亡數高于對照組，較模型組有所減少；尼莫地平+熄風解痙湯組大鼠海馬區神經細胞凋亡數較模型組明顯減少。詳見圖3。

與對照組比較，其余各組各時間點海馬組織細胞凋亡率均升高（P＜0.05）；與假手術組比較，模型組與用藥組各時間點海馬組織細胞凋亡率均升高（P＜0.05）；與模型組比較，用藥組各時間點海馬組織細胞凋亡率均降低（P＜0.05）；與尼莫地平組比較，熄風解痙湯低、高劑量組各時間點海馬組織細胞凋亡率均升高（P＜0.05），尼莫地平+熄風解痙湯組各時間點海馬組織細胞凋亡率均降低（P＜0.05）；與熄風解痙湯低、高劑量組比較，尼莫地平+熄風解痙湯組各時間點海馬組織細胞凋亡率均降低（P＜0.05）。詳見表7。

3 討論

SAH是神經外科常見病、多發病，具有致死率高、致殘率高、患者預后差等特點，影響SAH預后的主要原因是腦血管痙攣和EBI。臨床研究表明，EBI是影響SAH患者預后的主要原因，臨床特點是缺氧缺血性腦損傷，病理生理學過程包括炎癥、線粒體功能障礙、細胞調亡等[17]，而細胞主要啟動ERS。研究發現，ERS涉及多個信號通路的激活，包括未折疊蛋白反應、內質網反應超負荷以及Caspase-12和CHOP介導的細胞凋亡通路[18]。ERS誘導GRP78、GRP94等內質網因子表達上調，增強內質網的蛋白折疊能力，產生保護細胞的能力[19]。當應激持續存在或過于強烈時，ERS也能觸發內源性細胞凋亡機制，通過激活特定的凋亡通路，如Caspase-12和CHOP通路，來誘導細胞凋亡[20]。研究發現，當ERS發生時，GRP78、CHOP、Caspase-12作為ERS的標志蛋白，均有明顯增加的趨勢[21]。

本研究結果顯示，與模型組比較，尼莫地平組、熄風解痙湯低劑量組、熄風解痙湯高劑量組、尼莫地平+熄風解痙湯組各組腦組織含水量下降，EB含量均升高。Evans藍進入血管后與蛋白結合，正常狀態下不透過血腦屏障，當血腦屏障通透性升高時EB含量升高[22]。腦水腫發生的主要原因是血腦屏障破壞。本研究結果顯示，模型組血腦屏障破壞，通透性增加，造成腦水腫，提示尼莫地平和熄風解痙湯可以保護血腦屏障的完整，可減輕腦損傷，這可能為SAH的治療提供方向。血腦屏障主要由內皮細胞、星形膠質細胞、基底膜等組成，是腦內毛細血管內皮細胞彼此緊密連接，同時與周圍的周細胞、星形膠質細胞等相互作用而形成的屏障系統，其中內皮細胞及其緊密連接是決定血腦屏障通透性的關鍵屏障，當內皮細胞緊密連接遭到破壞后會導致血腦屏障破壞，進而損傷中樞神經系統[23]。以往相關研究證實，SAH后會引起腦細胞凋亡，造成血腦屏障破壞[24]。本研究TUNEL染色結果顯示，模型組海馬組織細胞大量凋亡，而經尼莫地平+熄風解痙湯組干預后海馬組織細胞凋亡率降低，表明尼莫地平+熄風解痙湯組可降低海馬組織細胞凋亡率，進而保護腦組織。根據本次研究結果，模型組大鼠海馬組織內質網應激相關蛋白CHOP、GRP78、Caspase-12表達升高，而熄風解痙湯低、高劑量組以及尼莫地平+熄風解痙湯組大鼠海馬組織內質網應激相關蛋白表達降低，說明熄風解痙湯可通過抑制內質網應激誘導的神經元凋亡，從而改善EBI。

綜上所述，SAH后大鼠存在ER介導的細胞凋亡，熄風解痙湯能顯著減少ERS的發生，從而減少ER介導的細胞凋亡，降低SAH后大鼠血腦屏障通透性，降低腦組織含水量和海馬組織細胞凋亡，改善SAH后大鼠的神經功能評分和預后。為SAH后EBI的治療提供新思路和靶點，有利于開展臨床轉化研究。

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