背俞功能帶推法對慢性疲勞綜合征大鼠腸道菌群及色氨酸代謝的影響

〔摘要〕 目的 探究背俞功能帶推法改善慢性疲勞綜合征（chronic fatigue syndrome， CFS）大鼠的癥狀，以及對其腸道菌群和色氨酸代謝的影響。方法 選取SPF級SD大鼠24只，隨機分為空白組8只、造模組16只，造模組制備CFS模型21 d，模型制備成功后隨機分為模型組和推法組，每組8只。推法干預14 d，做曠場實驗及力竭游泳實驗等行為學實驗后，取大鼠血清、結腸進行酶聯免疫吸附法檢測血清色氨酸（tryptophan， TRP）、犬尿氨酸（kynurenine， KYN）及結腸吲哚胺2，3-雙加氧酶（indoleamine 2，3-dioxygenase， IDO），取腸道糞便進行16 s rRNA測序分析腸道菌群結構及多樣性。結果 與空白組大鼠相比，模型組大鼠總路程、跨格數、中心區時間和路程、進入中心區次數力竭游泳時間均顯著減少（Plt;0.01）；與模型組相比，推法組大鼠上述各項指標均增加（Plt;0.05）。在門水平，與空白組相比，模型組厚壁菌門、擬桿菌門和疣微菌門比例下降，變形菌門和酸桿菌門比例明顯上升；與模型組相比，推法組厚壁菌門和酸桿菌門比例下降，而擬桿菌門和變形菌門比例升高。在屬水平上，與空白組相比，模型組中羅姆布茨菌屬（Romboutsia）和疣微菌科UCG-005菌屬（Ruminococcaceae_UCG-005，簡稱UCG-005）的比例明顯降低，而乳桿菌屬（Lactobacillus）和雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）比例明顯增加；與模型組相比，推法組Lactobacillus和杜氏桿菌屬（Dubosiella）比例下降，而Romboutsia和UCG-005比例上升。Alpha和Beta多樣性分析，與空白組相比，模型組的菌群豐富度和多樣性均降低；與模型組相比，推法組大鼠菌群豐富度和多樣性有明顯上升；但組間差異均無統計學意義（P＞0.05）。LEfSe分析中，與空白組相比，模型組的優勢物種主要聚集在目、科、屬，推法組的優勢物種主要聚集在科、屬。與空白組大鼠相比，模型組大鼠血清TRP含量顯著降低（Plt;0.01），血清KYN和結腸IDO含量明顯升高（Plt;0.01）；與模型組相比，推法組大鼠血清TRP含量明顯升高（Plt;0.01），血清KYN和結腸IDO含量降低（Plt;0.05）。相關性分析發現，與TRP相關性較大的菌屬包括Lachnospiraceae_NK4A136_group、Lactobacillus、Romboutsia等（Plt;0.05），與KYN相關性較大的菌屬包括Bifidobacterium05、Lachnospiraceae_NK4A136_group、UCG-005（Plt;0.05或Plt;0.01），與IDO相關性較大的菌屬包括Allobaculum、Lachnospiraceae_NK4A136_group、Romboutsia（Plt;0.05或Plt;0.01）。結論 背俞功能帶推法能明顯改善CFS大鼠的疲勞以及焦慮癥狀，調節菌群代謝物TRP、KYN及結腸IDO含量，對腸道菌群結構及其多樣性有一定的調節作用，且部分菌屬與TRP、KYN、IDO具有相關性。

〔關鍵詞〕 慢性疲勞綜合征；推法；背俞功能帶；腸道菌群；色氨酸；犬尿氨酸；相關性分析

〔中圖分類號〕R245" " " " "〔文獻標志碼〕A" " " " " 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.06.015

Effects of Back-Shu functional area pushing manipulation on gut microbiota and tryptophan metabolism in rats with chronic fatigue syndrome

ZHONG Yebei， LIN Qiaoting， YANG Shanglin， PEI Xin， YANG Xiaohui， FU Qing， LI Tielang*

School of Acupuncture-moxibustion， Tuina and Rehabilitation， Hunan University of Chinese Medicine，

Changsha， Hunan 410208， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To explore the relief of symptoms in rats with chronic fatigue syndrome （CFS） through the Back-Shu functional area pushing manipulation， and its effects on their gut microbiota and tryptophan metabolism. Methods Twenty-four SPF-grade SD rats were selected and randomized into blank group （n=8） and modeling group （n=16）. The modeling group was used to prepare the CFS model for 21 d， which， after the successful modeling， was randomly subdivided into model group and pushing manipulation （PM） group， with eight rats in each group. The intervention of pushing manipulation lasted for 14 d. After conducting the open-field test and exhaustive swimming experiment， the rat serum and colon were collected. Enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） was used to examine serum tryptophan （TRP） and kynurenine （KYN）， and colonic indoleamine 2， 3-dioxygenase （IDO）. Fecal samples from the intestines were collected and subjected to 16s rRNA sequencing for the analysis of gut microbiota structure and diversity. Results Compared with the blank group， the model group showed significant reductions in the total distance travelled， the number of grid crossing， the time and distance travelled in the central area， the number of entries into the central area， and the swimming time to exhaustion （Plt;0.01）; the PM group showed increases in all the aforementioned parameters compared with the model group （Plt;0.05）. At the phylum level， compared with the blank group， the model group showed a decrease in the proportions of Firmicutes， Bacteroidetes and Verrucomicrobia， while a significant increase in those of Proteobacteria and Acidobacteria; compared with the model group， the PM group showed a decrease in the proportions of Firmicutes and Acidobacteria， while an increase in those of Bacteroidetes and Proteobacteria. At the genus level， compared with the blank group， the model group showed a significant decrease in the proportions of Romboutsia and Ruminococcaceae UCG-005 （UCG-005）， while a significant increase in those of Lactobacillus and Bifidobacterium; compared with the model group， the PM group showed a decrease in the proportions of Lactobacillus and Dubosiella， while an increase in those of Romboutsia and UCG-005. Alpha and Beta diversity analysis showed that， compared with the blank group， the model group's microbial richness and diversity were decreased; compared with the model group， the PM group showed a significant increase in microbial richness and diversity; however， the differences between the groups were not statistically significant （Pgt;0.05）. LEfSe analysis showed that compared with the blank group， the dominant species in the model group were mainly clustered in the order， family， and genus levels， while the dominant species in the PM group were mainly clustered in the family and genus levels. Compared with the blank group， the model group had a significant decrease in serum TRP content （Plt;0.01） and a significant increase in serum KYN and colonic IDO content （Plt;0.01）; compared with the model group， the PM group had a significant increase in serum TRP content （Plt;0.01） and a decrease in serum KYN and colonic IDO content （Plt;0.05）. Correlation analysis revealed that the bacterial genera with greater correlation with TRP included Lachnospiraceae_NK4A136_group， Lactobacillus， and Romboutsia （Plt;0.05）， those with greater correlation with KYN included Bifidobacterium05， Lachnospiraceae_

NK4A136_group， and UCG-005 （Plt;0.05 or Plt;0.01）， and those with greater correlation with IDO included Allobaculum， Lachnospiraceae_

NK4A136_group， and Romboutsia （Plt;0.05 or Plt;0.01）. Conclusion The Back-Shu functional area pushing manipulation can significantly relieve fatigue and anxiety symptoms in CFS rats， regulate the content of microbial metabolites TRP， KYN， and colonic IDO， and has a certain regulating effect on the structure and diversity of the gut microbiota. Moreover， some bacterial genera have a correlation with TRP， KYN， and IDO content.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 chronic fatigue syndrome; pushing manipulation; Back-Shu functional area; gut microbiota; tryptophan; kynurenine; correlation analysis

慢性疲勞綜合征（chronic fatigue syndrome， CFS）是一種影響中樞神經和免疫系統功能的慢性綜合征，主要癥狀為持續6個月以上的慢性疲勞，患者患病后往往伴有多種癥狀，如肢體酸痛、失眠、抑郁、便秘及腹瀉等，嚴重者甚至長期臥床不起[1]。隨著生活節奏日益加快、壓力日益嚴重，CFS發病率逐年升高，有研究指出，中國總患病率為12.54%且呈上升趨勢[2-3]。近期有學者發現，CFS患者存在腸道菌群失調、菌群多樣性降低、色氨酸（tryptophan， TRP）代謝異常和犬尿氨酸（kynurenine， KYN）途徑活性降低[4]。腸道菌群可通過直接或間接調節代謝物的方式，在腸道疾病、自身免疫性疾病與神經系統疾病等許多疾病中發揮重要作用。在人體背部第1胸椎棘突到第4骶椎棘突下緣，背部正中線旁開3寸的帶狀區域被稱為背俞功能帶[5]。課題組前期研究表明，干預背俞功能帶可有效緩解CFS患者的疲勞癥狀[6]。推法作為傳統推拿手法之一，近年來在治療CFS上療效顯著[7-8]，且背俞功能帶推法可使背部陽氣得到激發，五臟六腑功能得以調節。本研究將從腸道菌群及其代謝物角度入手，探討背俞功能帶推法對緩解CFS癥狀的作用機制。

1 材料與儀器

1.1" 動物

選取24只健康成年SD大鼠（SPF級），雌雄各半。由湖南中醫藥大學動物實驗中心提供，體質量180～200 g，分籠飼養于湖南中醫藥大學動物中心實驗室，飼養溫度24～26 ℃，濕度50%～70%。本研究符合湖南中醫藥大學倫理委員會要求（倫理編號：LLBH-202209170001）。

1.2" 主要試劑及儀器

TRP、KYN、吲哚胺2，3-雙加氧酶（indoleamine 2，3-dioxygenase， IDO）酶聯免疫吸附測定試劑盒（廈門侖昌碩生物科技有限公司，貨號分別為YD34609、YD36947、YD34620）。

酶標分析儀、通用冷凍離心機（型號：RT-6100、ST8R，深圳雷杜生命科學股份有限公司）；大鼠曠場視頻分析系統（型號：Labmaze 3.0，北京眾實科技有限公司）；小動物吸入麻醉機（型號：VMR，美國Matrx公司）；推法刺激儀（專利號：ZL202121852010.X，湖南中醫藥大學針灸推拿與康復學院自制）。

2 方法

2.1" 分組及造模方法

24只大鼠隨機分為空白組8只、造模組16只，空白組不予造模、正常飼養，對造模組采用多因素復合應激刺激法建立CFS 模型[9-11]。模型制備成功后隨機分為模型組和推法組，保證造模成功后兩組均有8只大鼠入組。造模周期為21 d，具體方法如下。

2.1.1" 強迫負重游泳" 模型組大鼠采取力竭性訓練，尾部增加自身體質量3％的焊錫絲，于水溫（25±2） ℃、水深超過40 cm的水桶內（確保大鼠完全進入水中而不觸碰水桶底部）強迫游泳至力竭。每日1次，持續21 d。力竭標準：大鼠四肢失調，無法繼續游泳，身體完全沉入水下超過10 s，無法浮起。

2.1.2" 慢性應激刺激" 造模期間，每日隨機采用兩種應激刺激，刺激強度控制在大鼠可承受范圍內。應激刺激方式包括12 h禁食、12 h禁水、通宵照明、夾尾1 min、噪聲干擾（分貝量110 dB 持續1 h）、足底電擊（強度控制在1 mA，30 V，每次持續30 s，刺激后間隔1 min進行下次刺激，共計進行5次）。每日1次，持續21 d。

2.1.3" 造模成功標準" 根據文獻[11-12]中實驗大鼠一般情況半定量評分觀察表（表1），對大鼠精神狀態、糞便性狀、皮毛色澤及耳尾顏色進行評價，總評分≥4分則表明造模成功。

2.2" 干預措施

造模成功后，空白組及模型組予以正常飼養。推法組使用團隊自制的推法刺激儀在大鼠背部背俞功能帶（背部第1胸椎棘突到第4骶椎棘突下緣，背部正中線旁開3寸的帶狀區域[5]）操作推法。在團隊前期研究成果基礎上，將推法參數設定為操作時間20 min、頻率15次/min、力度500 g。大鼠麻醉后，固定在操作臺上，用氣麻機維持麻醉，從大鼠頸部往尾部單方向操作，推動距離以大鼠實際的背部長度為準。每日1次，連續14 d。

2.3" 行為學檢測

2.3.1" 曠場實驗" 將大鼠放置于曠場箱（100 cm×100 cm×40 cm）的中央，讓其自由探索6 min，大鼠在箱子內的活動情況由自動視頻信息采集系統記錄，大鼠運動總距離代表大鼠活動度及運動能力，大鼠進入中央格次數越少、時間越短、距離越短，提示焦慮程度越高[13]。在每只大鼠結束運動后的間隙，用75%乙醇擦拭箱底和側壁，清除遺留的氣味信息。

2.3.2" 力竭游泳" 將大鼠放置于水溫（25±2） ℃、水深超過40 cm的水桶內（確保大鼠完全進入水中而不觸碰水桶底部），以鼻尖沉入水中10 s不能浮出水面為標準，記錄力竭游泳時間[14]。

2.4" 標本采集與處理

2.4.1" 血清TRP、KYN、腸IDO含量檢測" 行為學檢測結束后，各組大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，剖開腹腔進行腹主動脈采血，室溫靜置30 min后，4 ℃ 1 000×g離心15 min，分離血清，4 ℃保存，剪下大鼠結腸立即放置液氮中后轉入-80 ℃冰箱保存。酶聯免疫吸附法檢測各組大鼠血清中TRP、KYN及腸IDO含量，嚴格按照酶聯免疫吸附法測定試劑盒說明書進行。

2.4.2" 腸道菌群高通量測序" 采血后，剪開大鼠結腸，取結腸內糞便1～2顆，裝入無菌凍存管內，立刻放入液氮并轉移至-80 ℃冰箱保存。將該大鼠糞便采用16 s rRNA擴增子測序進行腸道菌群檢測。樣品16 s rRNA檢測由武漢金開瑞生物工程有限公司完成，對細菌16 s V3-V4區進行PCR擴增，擴增引物為341F（5'-CCTACGGGNGGCWGCAG-3）、806R（5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3'），PCR反應條件：95 ℃預變性3 min；95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 15 s，72 ℃延伸5 min。共擴增25個循環，擴增完成后進行電泳檢驗，最后檢測合格的文庫使用Illumina MiSeq平臺進行高通量測序。

2.4.3" 腸道菌群數據分析" 將原始數據進行篩選后得到有效數據，然后通過Overlap將Reads拼接成Tags，并在特定的相似度下將Tags聚類成操作分類單元（operational taxonomic units， OTU）或擴增序列變體（amplicon sequence variants， ASV）。基于聚類結果進行多種多樣性分析及測序深度檢驗。通過與數據庫比對，進行分類注釋。使用Rstats包Kruskal方法比較樣本間或組間門、綱、目、科、屬各分類水平的差異。

2.5" 統計學方法

所有研究結果均采用SPSS 26.0軟件進行統計。計量資料用“ｘ±s”表示，采用單因素方差分析，方差不齊時，組間兩兩比較采用鄧尼特T3檢驗，方差齊時，組間兩兩比較則采用LSD檢驗；菌群相對豐度采用Kruskal Wallis秩和檢驗和Wilcoxon秩和檢驗；相關性分析采用Pearson法。均以Plt;0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1" 背俞功能帶推法對曠場實驗及力竭游泳時間的影響

與空白組相比，模型組大鼠總路程、跨格數、中心區時間和路程、進入中心區次數、力竭游泳時間均顯著減少（Plt;0.01）；與模型組相比，推法組大鼠上述各項指標均明顯增加（Plt;0.05）。詳見表2。

3.2" 背俞功能帶推法對腸道菌群結構的影響

3.2.1" 3組大鼠腸道菌群物種組成" 在門水平，各組大鼠厚壁菌門（Firmicutes）、擬桿菌門（Bacteroidota）、酸桿菌門（Actinobacteriota）和變形菌門（Proteobacteria）占比最多。與空白組相比，模型組厚壁菌門、擬桿菌門和疣微菌門（Verrucomicrobiota）比例下降，變形菌門和酸桿菌門比例明顯上升；與模型組相比，推法組厚壁菌門和酸桿菌門比例下降，而擬桿菌門和變形菌門比例升高。在屬水平上，各組大鼠占較大比重的菌屬大致相同。與空白組相比，模型組中羅姆布茨菌屬（Romboutsia）和疣微菌科UCG-005菌屬（Ruminococcaceae_UCG-005，簡稱UCG-005）的比例明顯降低，而乳桿菌屬（Lactobacillus）和雙歧桿菌屬（Bifidobacterium）比例明顯增加；與模型組相比，推法組Lactobacillus和Dubosiella比例下降，而Romboutsia和UCG-005比例上升。詳見圖1。

3.2.2" 3組大鼠腸道菌群Alpha多樣性" Chao1和Ace是評估群落豐富度的指數，指數越大對應的群落豐富度越高；Shannon和Simpson均為評估群落多樣性的指數，Shannon指數越高表明多樣性越高，Simpson指數越低表明群落多樣性越高[15]。與空白組相比，模型組的菌群豐富度和多樣性均降低；與模型組相比，推法組大鼠菌群豐富度和多樣性有明顯上升。但組間差異均無統計學意義（P＞0.05）。詳見圖2。

3.2.3" 3組大鼠腸道菌群Beta多樣性" 模型組樣本可與空白組和推法組明顯分開，聚集在右側，且模型組樣本之間距離較近，表明相似度較高，組間樣本差異較小。而空白組和推法組樣本主要集中在左側，并不能明顯分開，表明兩者腸道菌群結構差異較小，而模型組與空白組和推法組菌群結構差異較大。詳見圖3。

3.2.4" 3組大鼠腸道菌群LEfSe分析" LEfSe分析以線性判別分析（linear discriminant alalysis， LDA）閾值大于3代表腸道菌群具有顯著差異，結果顯示，和空白組相比，模型組的優勢物種主要聚集在目、科、屬，推法組的優勢物種主要聚集在科、屬。詳見圖4。

3.3" 背俞功能帶推法對血清TRP、KYN和結腸IDO的影響

與空白組大鼠相比，模型組大鼠血清TRP含量顯著降低（Plt;0.01），血清KYN和結腸IDO含量明顯升高（Plt;0.01）；與模型組相比，推法組大鼠血清TRP含量明顯升高（Plt;0.01），血清KYN和結腸IDO含量降低（Plt;0.05）。詳見表3。

3.4" 腸道菌群與行為學指標、血清TRP、KYN及結腸IDO的相關性分析

在屬水平上，篩選出占比較大的10個代表性菌屬：阿克曼菌屬（Akkermansia）、異桿菌屬（Allobaculum）、Bifidobacterium、Dubosiella、埃氏菌屬-志賀氏菌屬（Escherichia-Shigella）、毛螺菌屬 NK4A136組（Lachn？鄄ospiraceae_NK4A136_group）、Lactobacillus、Rombout？鄄sia、蘇黎世桿菌屬（Turicibacter）、UCG-005。進行相關性分析發現，與血清TRP相關性較大的菌屬有Lach？鄄nospiraceae_NK4A136_group、Lactobacillus、Romboutsia等（Plt;0.05）；與血清KYN相關性較大的菌屬包括Bifidobacterium、Lachnospiraceae_NK4A136_group、

UCG-005（Plt;0.05或Plt;0.01）；與結腸IDO相關性較大的菌屬包括Allobaculum、Lachnospiraceae_NK4A

136_group、Romboutsia（Plt;0.05或Plt;0.01）；與行為學指標相關性較大的菌屬主要有Lachnospiraceae_

NK4A136_group、Romboutsia、Turicibacter等（Plt;0.05或Plt;0.01）。詳見圖5。

4 討論

CFS在中醫學中沒有對應病名，根據臨床表現，可歸為“虛勞”范疇。虛勞是由于素體正氣不足和外在致病因素所致，如中醫所說的“五勞七傷”，即過度的勞累和損傷，會反復作用在人體之上，逐漸消耗和削弱人體的正氣。當這種勞累和損傷超出了人體的承受限度時，就會導致疾病的發生[16]。氣血耗傷則中焦運化失職，五臟六腑功能失司，痰濕、瘀血等病理產物阻滯肢節、腦竅等部位。肢節氣血受阻則出現身體酸重、肢軟疲乏等軀體疲勞癥狀，腦部氣血阻滯則出現精神倦怠、失眠、健忘、遲鈍等腦部疲勞癥狀[17]。致病因素雖復雜，但總體治則應立足于調陰陽、補氣血，使人體恢復到陰平陽秘、氣血充盈、情志舒暢、精神內守的狀態。

《素問·生氣通天論篇》言：“陽氣者，精則養神，柔則養筋?！碧柦洖榫揸?，太陽經脈不暢，思維神志活動異常，出現注意力難以集中、記憶力下降、睡眠障礙等腦力疲勞癥狀[17]。背俞功能帶是督脈、膀胱經通行區域，背俞穴及夾脊穴也位于此區域，該區域布達的陽氣，推動人體進行正常的生理活動?！鹅`樞·衛氣》中指出，胸腹之氣輸注于背俞穴[18]。督脈和膀胱經上的背俞穴通過腹背陰陽與臟腑相連，加強了督脈與胸腹部的聯系，胸腹部臟腑則能進一步借道背俞穴與督脈進行溝通。夾脊穴為督脈和背俞穴經氣重疊處，是協助督脈陽氣輸注于膀胱經并將臟腑經絡信息傳遞向督脈的重要樞紐[19]。陽明經為多氣多血之經，若全身氣血運行不暢則脾胃運化失責，故百病所生與陽明胃腸關系密切。背俞功能帶推法是用手掌著力于背俞功能帶區域，向一定方向推動，可振奮陽氣、通調元神、豁達情志，同時行氣止痛、溫經活絡，刺激內臟疾病的體表反應區。研究發現，在CFS患者背部區域進行推法操作既能疏通經絡、調整臟腑功能，也能行氣散瘀、通調全身陽氣，從而促進疾病的恢復[20]。

本研究采用多因素復合應激刺激法建立CFS模型，包括強迫負重游泳和慢性應激刺激。CFS是身心皆疲勞的綜合性疾病，通過強迫負重游泳造成身體的疲勞狀態，同時伴隨著焦慮情緒，這也是疲勞發展的最終階段[21]。慢性應激刺激包括多種方法，通過給大鼠不可預知的刺激，建立心理上恐懼、焦慮及抑郁的狀態。通過多重因素復合應激，可與人體疾病狀態相接近，制備出較合適的模型。曠場實驗和力竭游泳實驗是常用的評估疲勞和抑郁焦慮狀態的指標[22]。在本研究中，與空白組相比，模型組各項行為學指標降低，明顯出現了疲勞狀態，經過背俞功能帶推法治療后，推法組與模型組相比行為學各項指標顯著好轉，疲勞和焦慮狀態顯著恢復。

CFS發病原因十分復雜，然而具體機制尚未明確。近期研究顯示，腸道菌群的改變與CFS的發生密切相關[4]。腸道菌群通過神經、免疫以及代謝物等途徑將大腦情感認知和腸道功能緊密聯系在一起，對腸道神經系統和中樞神經系統進行雙向調節[23]。TRP是一種必需氨基酸，TRP代謝是一種重要的信號通路，在胃腸道上皮和腸道菌群之間的相互作用，有助于調節激素和免疫反應，向下可改變微生物多樣性，向上則對行為、運動等產生影響[23]。超過90%的TRP在IDO和色氨酸-2，3-雙加氧酶的作用下代謝產生KYN，且有證據表明，KYN代謝途徑會影響神經系統疾病的情緒認知障礙[24]。有研究發現，在炎癥狀態下IDO的活性被激活，會加快TRP代謝為KYN，從而降低TRP含量，增加KYN含量[25-26]。本研究發現，模型組的結腸IDO含量明顯高于空白組，而血清TRP含量顯著低于空白組，說明大量的TRP被代謝生成KYN，背俞功能帶推法治療后TRP含量顯著提高。KYN繼續代謝可產生神經毒性的代謝物喹啉酸（quinolinic acid， QUIN）和具有神經保護性的代謝物犬尿酸（kynurenine acid， KYNA），而在CFS體內似乎存在著較高水平的QUIN和較低水平的KYNA，導致存在過多的神經毒性代謝物，從而出現神經退行性變化[27]。本研究結果顯示，與空白組相比，模型組的血清KYN明顯升高，經過推法治療后，推法組大鼠血清KYN含量顯著低于模型組，表明背俞功能帶推法能有效降低的CFS大鼠血清中的KYN含量。

腸道菌群可能通過KYN代謝途徑，影響宿主TRP降解和循環TRP濃度。在無菌動物中，由于腸道菌群缺乏，KYN代謝途徑中的KYN/TRP比率降低，在無菌動物中定植正常菌群則發現KYN/TRP比率增加和血漿TRP降低[28]。腸道菌群主要涉及厚壁菌門、擬桿菌門、變形菌門、放線菌門、疣微菌門和梭桿菌門等[23]，在CFS患者中發現厚壁菌門水平下降，糞桿菌屬的水平顯著降低，雙歧桿菌科含量較低[4]，細菌多樣性和豐富度降低。本研究結果顯示，模型組厚壁菌門、擬桿菌門和疣微菌門明顯下降，推法組擬桿菌門和變形菌門升高；Alpha多樣性提示，在腸道菌群多樣性和豐富度方面，模型組明顯降低，推法組則明顯升高；Beta多樣性的結果表明，空白組和推法組之間的腸道菌群結構差異較小，模型組與空白組和推法組菌群結構差異較大。結合相關分析發現：Lachnospiraceae_NK4A136_group和Lactobacillus與血清TRP呈負相關，Romboutsia與血清TRP呈正相關；Bifidobacterium和Lachnospiraceae_NK4A136_group與血清KYN呈正相關，與UCG-005呈負相關；Allobaculum和Romboutsia與結腸IDO呈負相關，Lachnospiraceae_NK4A136_group與結腸IDO呈正相關。這表明腸道菌群與TRP代謝物和行為學指標存在相關性，隨著菌屬水平上Lachnospiraceae_NK4A136_

group的增加，觀察到血清TRP含量下降，而血清中KYN和結腸IDO的含量上升。此外，行為學各項指標也出現了下降。綜上所述，背俞功能帶推法對CFS大鼠有一定的改善疲勞、緩解焦慮的作用，可能是通過調節腸道菌群結構，恢復菌群多樣性和豐富度，調節菌群代謝產物從而改善疲勞焦慮癥狀。

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