基于α7nAChR/NF-κB通路研究點按脾俞、胃俞穴對緩解慢性疲勞綜合征大鼠外周炎癥的效應機制

〔摘要〕 目的 觀察點按脾俞、胃俞穴對慢性疲勞綜合征（chronic fatigue syndrome， CFS）模型大鼠疲勞狀態、運動行為、外周炎癥及α7煙堿型乙酰膽堿受體（α7 nicotinic acetylcholine receptor， α7nAChR）/核因子κB（nuclear factor-κB， NF-κB）信號表達的影響，探討點按脾俞、胃俞穴對緩解CFS大鼠外周炎癥的效應機制。方法 先將32只SD大鼠隨機分為空白組（8只）和造模組（24只）。造模組采用強迫負重游泳聯合慢性應激刺激的方法建立CFS大鼠模型。造模成功后，將造模組大鼠隨機分為模型組、點按組、α7nAChR激動劑組，每組8只。空白組、模型組予腹腔注射等體積生理鹽水；點按組以自制按法刺激儀點按雙側脾俞、胃俞穴，20 min/次，并予腹腔注射等體積生理鹽水；α7nAChR激動劑組予腹腔注射α7nAChR激動劑PNU-282987（每次2.4 mg/kg）。每組每日干預1次，連續14 d。記錄各組大鼠一般情況半定量評分、力竭游泳時間和曠場實驗運動距離；計算大鼠脾臟指數和胸腺指數；采用ELISA法檢測大鼠血清中腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）、白細胞介素-1β（interleukin-1β， IL-1β）、白細胞介素-6（interleukin-6， IL-6）的含量；Western blot檢測大鼠脾臟組織α7nAChR、NF-κB p65、NF-κB p-p65、TNF-α的蛋白表達水平；采用qPCR法檢測α7nAChR、NF-κB p65、TNF-α的mRNA表達水平。結果 與空白組比較，模型組一般情況半定量評分，血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量，脾臟組織中NF-κB p-p65、NF-κB p65、TNF-α蛋白表達水平及NF-κB p65、TNF-α mRNA表達量均升高（Plt;0.01）；力竭游泳時間、曠場實驗運動距離、脾臟指數、胸腺指數、脾臟組織中α7nAChR蛋白表達水平及mRNA表達量均降低（Plt;0.05，Plt;0.01）。與模型組比較，點按組與α7nAChR激動劑組一般情況半定量評分，血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量，脾臟組織中NF-κB p-p65、NF-κB p65、TNF-α蛋白表達水平及NF-κB p65、TNF-α mRNA表達量均降低（Plt;0.05，Plt;0.01）；力竭游泳時間、曠場實驗運動距離、脾臟指數、胸腺指數、脾臟組織中α7nAChR蛋白表達水平及mRNA表達量均升高（Plt;0.05，Plt;0.01）。與點按組比較，α7nAChR激動劑組血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量，脾臟組織中NF-κB p-p65、NF-κB p65、TNF-α蛋白表達水平及NF-κB p65、TNF-α mRNA表達量均降低（Plt;0.01），脾臟組織中α7nAChR蛋白表達水平及mRNA表達量均升高（Plt;0.05，Plt;0.01）。結論 點按脾俞、胃俞穴可有效改善CFS大鼠的疲勞狀態和運動行為，提高免疫水平并緩解外周炎癥，這可能與激活α7nAChR的表達，從而抑制NF-κB下游炎性通路的活性相關。

〔關鍵詞〕 慢性疲勞綜合征；點按法；脾俞；胃俞；α7煙堿型乙酰膽堿受體/核轉錄因子κB通路；外周炎癥

〔中圖分類號〕R245" " " " "〔文獻標志碼〕A" " " " " 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.06.013

Mechanism of effects of pressing Pishu （BL20） and Weishu （BL21） on alleviating peripheral inflammation in rats with chronic fatigue syndrome based on the α7nAChR/NF-κB pathway

LIN Qiaoting， ZHONG Yebei， YANG Shanglin， PEI Xin， YANG Xiaohui， LI Tielang*， LI Wu*

School of Acupuncture-moxibustion， Tuina and Rehabilitation， Hunan University of Chinese Medicine，

Changsha， Hunan 410208， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To observe the effects of pressing Pishu （BL20） and Weishu （BL21） on the fatigue state， locomotor behaviors， peripheral inflammation， and α7 nicotinic acetylcholine receptor （α7nAChR）/nuclear factor-κB （NF-κB） signaling expression of chronic fatigue syndrome （CFS） model rats， and to explore the mechanism of effect of this therapy on the alleviation of peripheral inflammation in CFS rats. Methods A total of 32 SD rats were randomized into blank group （n=8） and modeling group （n=24）. In the modeling group， a CFS model was established by forced weight-bearing swimming combined with chronic stress stimulation. After successful modeling， the rats in the modeling group were randomly subdivided into model， acupoint-pressing， and α7nAChR agonist groups， with eight rats in each group. The blank and model groups were injected intraperitoneally with an equal volume of saline; the acupoint-pressing group was subjected to the bilateral press on Pishu （BL20） and Weishu （BL21） using a homemade pressing stimulator for 20 min each time as well as intraperitoneal injection of an equal volume of saline; the α7nAChR agonist group was injected intraperitoneally with the α7nAChR agonist PNU-282987 （2.4 mg/kg per time）. Each group was intervened once daily for continuous 14 days. The semi-quantitative score of the general condition， swimming time to exhaustion， and exercise distance in the open-field test were recorded in each group; the spleen index and thymus index were calculated; the content of tumor necrosis factor-α （TNF-α）， interleukin-1β （IL-1β）， and interleukin-6 （IL-6） in rat serum were checked using ELISA; the protein expression levels of α7nAChR， NF-κB p65， NF-κB p-p65， and TNF-α in the rat spleen tissue were examined by Western blot; the mRNA expression levels of α7nAChR， NF-κB p65， and TNF-α were determined by qPCR. Results Compared with the blank group， the semi-quantitative score of the general condition， serum content of TNF-α， IL-1β， and IL-6， as well as the protein expression levels of NF-κB p-p65， NF-κB p65， and TNF-α and the mRNA expression levels of NF-κB p65 and TNF-α in the spleen tissue increased in the model group （Plt;0.01）; the swimming time to exhaustion and exercise distance in the open-field test were shortened， and the spleen index， thymus index， and the α7nAChR protein and mRNA expression levels in the spleen tissue decreased （Plt;0.05， Plt;0.01）. Compared with the model group， the semi-quantitative scores of the general condition， serum content of TNF-α， IL-1β， and IL-6， as well as the protein expression levels of NF-κB p-p65， NF-κB p65， and TNF-α and the mRNA expression levels of NF-κB p65 and TNF-α in the spleen tissue were reduced in both acupoint-pressing and α7nAChR agonist groups （Plt;0.05， Plt;0.01）; the swimming time to exhaustion and exercise distance in the open-field test were longer， and the spleen index， thymus index， and the α7nAChR protein and mRNA expression levels in the spleen tissue were higher （Plt;0.05， Plt;0.01）. Compared with the acupoint-pressing group， the serum content of TNF-α， IL-1β， and IL-6， as well as the protein expression levels of NF-κB p-p65， NF-κB p65， and TNF-α and the mRNA expression levels of NF-κB p65 and TNF-α in the spleen tissue were lower in the α7nAChR agonist group （Plt;0.01）， while the α7nAChR protein and mRNA expression levels in the spleen tissue were elevated （Plt;0.05， Plt;0.01）. Conclusion Pressing Pishu （BL20） and Weishu （BL21） can effectively relieve fatigue， improve locomotor behaviors， enhance immune level， and alleviate peripheral inflammation in CFS rats， which may be related to the activation of the expression of α7nAChR， thereby inhibiting the activity of the downstream inflammatory pathway of NF-κB.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 chronic fatigue syndrome; pressing; Pishu （BL20）; Weishu （BL21）; α7 nicotinic acetylcholine receptor/nuclear factor-κB pathway; peripheral inflammation

慢性疲勞綜合征（chronic fatigue syndrome， CFS）是一種復雜性多系統慢性疾病，其主要癥狀包括勞累后不適、因活動而加重的虛弱性疲勞、認知困難以及睡眠不解乏或睡眠障礙等[1]。研究認為，神經免疫系統反應失調可能是CFS發病的重要機制之一[2-3]。正常生理狀態下，脾臟受迷走神經支配并依靠膽堿能抗炎通路發揮抗炎作用[4]。然而，受復雜應激因素長期刺激的CFS患者自主神經功能紊亂，表現為迷走神經活性減弱[5]。脾臟作為機體最大的免疫器官，抗炎作用受抑制時，導致過度產生的促炎因子在循環系統中堆積，在臨床上表現為無法緩解的身體疲勞與精神疲勞[6]。

CFS屬于中醫學“虛勞”范疇，病機關鍵為中焦脾胃升降失司，臟腑氣血陰陽虛衰。從脾胃論治該病，固護脾胃后天之本，振奮中焦而充化氣血，可達到平衡陰陽并治療疾病的目的。本課題組及其他學者研究均證實，采用不同推拿手法刺激背俞穴，對CFS治療有明顯臨床療效[7-10]。脾俞、胃俞穴均為背俞穴，兩者共奏健脾和胃降逆之功，體現從脾胃論治CFS的思想。此外，研究發現，刺激脾俞、胃俞穴能夠改善機體免疫功能，調節炎癥因子水平[11-13]。因此，本研究擬采用點按脾俞、胃俞穴干預CFS模型大鼠，探討點按脾俞、胃俞穴對緩解CFS大鼠外周炎癥的效應機制。

目前研究證實，α7煙堿型乙酰膽堿受體（α7 nicotinic acetylcholine receptor，α7nAChR）/核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）通路在脾臟膽堿能抗炎通路中發揮重要作用[14-15]。大量臨床及基礎研究表明，CFS患者或大鼠血清中腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）、白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）含量及組織NF-κB表達水平均升高[16-18]。同時根據文獻報道，研究者在CFS患者的B細胞和NK細胞中發現煙堿型乙酰膽堿受體（nicotinic acetylcholine receptor，nAChR）基因存在改變并影響相關免疫細胞功能[19-20]。綜合以上研究結果，課題組通過建立CFS模型大鼠，以點按脾俞、胃俞穴為干預手段，從運動行為能力、脾臟和胸腺指數、外周促炎因子（TNF-α、IL-1β、IL-6）和α7nAChR/NF-κB信號通路等方面，進一步探討其可能的作用機制，為臨床應用推拿治療CFS提供新的思路。

1 材料與方法

1.1" 實驗動物

健康成年SD大鼠32只，SPF級，雌雄各半，體質量200～250 g，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，實驗動物許可證：SCXK（湘）2019-0004。本實驗在湖南中醫藥大學動物實驗中心進行，實驗開始前，所有大鼠先進行7 d的適應性飼養，提供足量無菌飼料及蒸餾水，飼養溫度24～26 ℃，濕度50%～70%，換氣次數為15～20次/h，壓強梯度20～50 Pa，實驗室定期消毒。實驗方案與倫理由湖南中醫藥大學實驗動物倫理委員會批準，審批號：LLBH-202211060005。

1.2" 主要試劑與儀器

α7nAChR激動劑（美國Glpbio公司，規格100 mg/瓶，批號：GC12952）；TNF-α、IL-1β、IL-6 ELISA試劑盒（廈門侖昌碩生物科技有限公司，批號：YD-31063、YD-30206、YD-30219）；α7nAChR、NF-κB p-p65、NF-κB p65、TNF-α抗體（江蘇親科生物研究中心有限公司，批號：DF13247、AF2006、AF5006、AF7014）；異氟烷（深圳瑞沃德生命科技有限公司，批號：R510-22）；RNA提取試劑盒、逆轉錄試劑盒、qPCR專用預混液（美國Thermo公司，批號：10296028CN、11752050、4472920）。

大鼠曠場視頻分析系統[博睿唯思（香港）科技有限公司，型號：Tracking Master V3.0]；呼吸麻醉機（深圳瑞沃德生命科技有限公司，型號：R500）；酶標分析儀（瑞士TECAN公司，型號：Infinite F50）；電泳儀（北京百晶生物技術有限公司，型號：BG-subMIDI）；熒光定量PCR儀（美國Applied biosystems公司，型號：StepOne Software）；凝膠成像儀（美國Biorad公司，型號：2500R）；按法刺激儀（自制）。

1.3" CFS模型建立與評價

以強迫負重游泳聯合慢性應激刺激的方法建立CFS大鼠模型[18]。強迫負重游泳：在大鼠尾部增加自身體質量3%的焊錫絲，于水溫（25±2） ℃、水深超過40 cm（確保大鼠完全進入水中而不觸碰水桶底部）的水桶內強迫游泳至力竭，力竭標準為大鼠游泳動作失調，口鼻部沉入水下不上浮超過10 s。力竭游泳結束后，迅速將大鼠撈起擦干毛發，并置于飼養籠中休息，每日1次，共21 d。慢性應激刺激：游泳結束后根據隨機數字表法每天隨機給予大鼠兩種不可預知的應激刺激，刺激強度控制在大鼠可承受范圍內，每日1次，共21 d。應激刺激方式包括：（1）12 h禁食；（2）12 h禁水；（3）通宵照明；（4）夾尾1 min；（5）110 dB噪聲持續干擾1 h；（6）足底電擊（強度為1 mA，30 V），30 s/次，每次間隔1 min，共5次。

根據一般情況半定量評分觀察表[21]，對大鼠精神狀態、糞便性狀、皮毛色澤及耳尾顏色進行評價，總評分≥4分表明造模成功[21]。具體評分細則如下。（1）精神狀態：神態安靜，活潑好動，眼睛有神（0分）；易激怒好爭斗，自主活動減少（1分）；懶動倦怠，眼神黯淡無光，反應能力降低（2分）；精神萎靡，縮肩拱背，攻擊性、對抗性行為減少（3分）。（2）糞便形狀：糞便干，成形（0分）；糞便黏軟有形（1分）；糞便不成形，但不稀薄（2分）；糞便溏狀，黏膩惡臭（3分）。（3）皮毛色澤：皮膚與脂肪連接緊密，皮毛光潔整齊（0分）；皮膚略松弛，毛發枯，黃無光澤（1分）；皮膚松弛易抓取，毛發干枯或結穗打卷，無光澤（2分）；皮膚松弛，皮膚無脂肪，抓之觸骨，全身毛發枯槁，稀疏脫落（3分）。（4）耳尾顏色：紅潤光澤（0分）；淡紅少澤（1分）；淡白少澤（2分）；蒼白或透青色（3分）。

1.4" 分組及干預方法

將32只SD大鼠按隨機數字表法分為空白組（8只）和造模組（24只），造模組參照“1.3”建立CFS大鼠模型。造模成功后，將造模組大鼠隨機分為模型組、點按組、α7nAChR激動劑組，每組8只。空白組、模型組予以等體積生理鹽水腹腔注射。點按組點按雙側脾俞、胃俞穴后，予腹腔注射等體積生理鹽水。穴位定位依據《實驗動物常用穴位名稱與定位第2部分：大鼠》[22]、《大鼠穴位圖譜》及體表的骨性標志[23]，在大鼠清醒狀態下，以兩側髂嵴最高點連線為標志，配合反復上下提放鼠尾可精確定位第6腰椎棘突，向上順摸至第12胸椎棘突下左右旁開6 mm處為脾俞穴；第13胸椎棘突下左右旁開約5 mm為胃俞穴。選用自制的中醫按法刺激儀器進行點按法操作[24-25]。將實驗大鼠用異氟烷吸入麻醉后，俯臥位放置，穴位局部備皮，將中醫按法刺激儀器的按摩頭對準脾俞、胃俞穴，垂直于皮膚按壓，點按法刺激參數調節為：力量0.5 kg，頻率8次/min。干預過程中由實驗人員監督，防止出現意外事件，點按治療20 min/次。α7nAChR激動劑組予腹腔注射PNU-282987，每次2.4 mg/kg。以上干預每日1次，連續14 d。

1.5" 標本采集及處理

用水合氯醛麻醉大鼠后，將大鼠仰臥位固定，打開腹腔及胸腔，暴露腹主動脈取血2 mL，靜置1 h后，4 ℃以3 000 r/min離心15 min，取血清并保存在-80 ℃冰箱。摘取胸腺、脾臟，用生理鹽水洗滌，濾紙吸干后稱重。稱重后，將脾臟組織冷藏于-80 ℃冰箱。

1.6" 檢測指標

1.6.1" 一般情況半定量評分" 干預結束后，參照“1.3”一般情況半定量評分觀察表對各組大鼠進行評價并記錄總分。

1.6.2" 力竭游泳時間" 具體操作參照“1.3”強迫負重游泳實驗。干預結束后，記錄各組大鼠力竭游泳時間。

1.6.3" 曠場實驗運動距離" 干預結束后，將大鼠放置于規格為100 cm×100 cm×50 cm的曠場箱中央格，記錄大鼠6 min內的運動距離。

1.6.4" 脾臟指數與胸腺指數" 稱取大鼠脾臟與胸腺質量并按照下列公式計算胸腺與脾臟指數[26]：臟器指數（mg/g）=器官重量（mg）/體質量（g）。

1.6.5" 血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量" 采用ELISA法檢測血清中的TNF-α、IL-1β、IL-6含量，嚴格按照ELISA試劑盒說明書操作。

1.6.6" 脾臟組織α7nAChR、NF-κB p-p65、NF-κB p65、TNF-α蛋白表達水平" 將脾臟組織進行蛋白提取與蛋白濃度測定，經SDS-PAGE電泳后，進行轉膜、封閉。加入一抗α7nAChR（1∶1 000）、NF-κB p-p65（1∶1 000）、NF-κB p65（1∶1 000）、TNF-α（1∶1 000），4 ℃反應過夜。TBST漂洗3次，洗凈未結合的一抗。加入二抗（1∶5 000）溶液，室溫孵育1 h。TBST漂洗3次。化學發光成像系統成像，以β-actin為內參計算各目的蛋白的相對表達量。

1.6.7" 脾臟組織α7nAChR、NF-κB p65、TNF-α mRNA表達" 運用Trizol法對樣本總RNA進行提取與質量檢測，使用逆轉錄試劑盒逆轉錄合成cDNA。選擇α7nAChR、NF-κB p65、TNF-α對應的引物，以β-actin為內參，PCR反應條件：95 ℃預變性5 min；以95 ℃變性10 s，58 ℃退火20 s，72 ℃延伸20 s為1循環，進行40次循環。引物序列見表1。

1.7" 統計學分析

采用SPSS 26.0軟件進行統計分析。計量資料服從正態分布，則用“ｘ±s”表示。若數據滿足正態分布且方差齊，采用單因素方差分析并用LSD檢驗多重比較；若數據滿足正態分布但方差不齊，則采用Welch's ANOVA法分析并用Dunnett T3法多重比較。Plt;0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1" 各組大鼠一般情況半定量評分、力竭游泳時間及曠場實驗運動距離比較

與空白組比較，模型組、點按組、α7nAChR激動劑組一般情況半定量評分明顯增加（Plt;0.01），力竭游泳時間縮短（Plt;0.05，Plt;0.01）；模型組曠場實驗運動距離縮短（Plt;0.05）。與模型組比較，點按組、α7nAChR激動劑組一般情況半定量評分明顯降低（Plt;0.01），力竭游泳時間和曠場實驗運動距離增加（Plt;0.05，Plt;0.01）。詳見表2。

2.2" 各組大鼠脾臟指數與胸腺指數比較

與空白組比較，模型組脾臟指數、胸腺指數均明顯降低（Plt;0.01）；與模型組比較，點按組、α7nAChR激動劑組脾臟指數、胸腺指數明顯升高（Plt;0.01）。詳見表3。

2.3" 各組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量比較

與空白組比較，其余各組血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量明顯升高（Plt;0.01）；與模型組比較，點按組和α7nAChR激動劑組TNF-α、IL-1β、IL-6含量均明顯降低（Plt;0.01）；與點按組比較，α7nAChR激動劑組TNF-α、IL-1β、IL-6含量均明顯降低（Plt;0.01）。詳見表4。

2.4" 各組大鼠脾臟組織α7nAChR、NF-κB p-p65、NF-κB p65、TNF-α蛋白表達水平比較

與空白組比較，其余各組α7nAChR蛋白表達水平明顯降低（Plt;0.01），NF-κB p-p65、NF-κB p65、TNF-α蛋白表達水平明顯升高（Plt;0.01）；與模型組比較，點按組和α7nAChR激動劑組α7nAChR蛋白表達水平明顯升高（Plt;0.01），NF-κB p-p65、NF-κB p65、TNF-α蛋白表達水平降低（Plt;0.05，Plt;0.01）；與點按組比較，α7nAChR激動劑組α7nAChR蛋白表達水平升高（Plt;0.05），NF-κB p-p65、NF-κB p65、TNF-α蛋白表達水平明顯降低（Plt;0.01）。詳見表5、圖1。

2.5" 各組大鼠脾臟組織α7nAChR、NF-κB p65、TNF-α mRNA表達量比較

與空白組比較，模型組、點按組脾臟組織α7nAChR mRNA表達量明顯降低（P＜0.01），NF-κB p65、TNF-α mRNA表達量明顯升高（P＜0.01）；α7nAChR激動劑組脾臟組織NF-κB p65 mRNA表達量明顯升高（P＜0.01）。與模型組比較，點按組和α7nAChR激動劑組脾臟組織α7nAChR mRNA表達量明顯升高（P＜0.01），NF-κB p65、TNF-α mRNA表達量明顯降低（P＜0.01）。與點按組比較，α7nAChR激動劑組脾臟組織α7nAChR mRNA表達量明顯升高（P＜0.01），NF-κB p65、TNF-α mRNA表達量明顯降低（P＜0.01）。詳見表6。

3 討論

CFS屬于中醫學“虛勞”范疇，脾虛為基本病機[27-28]。《脾胃論·脾胃盛衰論》中提出“百病皆由脾胃衰而生”，脾胃之氣的強弱是正氣盛衰的關鍵，脾胃之氣弱而正氣衰，一則無法抵御邪氣入體，二則無法將內邪驅逐，邪氣留滯體內，故使CFS成為慢性發展性的長期疾病。推拿緩解CFS患者疲勞狀態療效顯著，常選用脾俞、胃俞等穴位[7-10]。脾俞、胃俞穴均屬于背俞穴，是調理脾胃的要穴。同時，兩穴位具有臟腑互為表里的協同關系，對調理脾胃能產生疊加效應[29]。故而本研究選擇脾俞與胃俞聯用，共奏固護脾胃后天、振奮中焦氣血化源、調和陰陽之功。

頭暈、心悸、直立性低血壓等自主神經系統功能紊亂癥狀在CFS患者中普遍多發，研究認為CFS患者自主神經功能障礙的主要原因為交感神經活動增加，迷走神經活動減少[30]。正常狀態下，迷走神經對炎癥反應有緊張性抑制作用，故在CFS患者迷走神經活動性減少的情況下，迷走神經的抗炎作用會受到影響[31]。脾臟是人體最大的免疫器官，受迷走神經的調節并依靠膽堿能抗炎通路發揮抗炎作用[4]。膽堿能抗炎通路經迷走神經發出神經信號后，脾臟T細胞在信號轉導的過程中釋放乙酰膽堿（acetylcho？鄄line，Ach），Ach與脾臟巨噬細胞上α7nAChR結合后，下調細胞內NF-κB信號通路的活性，抑制巨噬細胞釋放TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎細胞因子[6]。NF-κB p65作為關鍵轉錄調節因子，在NF-κB信號通路中發揮重要作用，其在蛋白磷酸化后可迅速入細胞核，促進下游細胞因子的表達[32]。因此，NF-κB p-p65水平也是衡量NF-κB信號通路活性的重要標志[32-33]。CFS患者迷走神經活性減弱[5，34-35]，可能會導致脾臟內膽堿能抗炎通路受抑制、α7nAChR表達下降，NF-κB信號通路被激活，NF-κB p65和NF-κB p-p65水平升高，產生大量的促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6，最終引起外周炎癥的發生，增加患者疲勞感。

本研究通過一般情況半定量評分量表客觀評估CFS大鼠疲勞程度，并采用力竭游泳實驗與曠場實驗分別測試CFS大鼠的被迫運動與主動運動能力[36]。結果發現，點按脾俞、胃俞穴能夠改善CFS大鼠一般情況并提高運動行為能力，提示點按脾俞、胃俞穴位對CFS大鼠疲勞狀態具有改善作用。此外，本研究發現，模型組大鼠脾臟指數與胸腺指數顯著降低，血清中促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量顯著升高，脾臟組織α7nAChR蛋白及mRNA表達量降低，而NF-κB p-p65、NF-κB p65、TNF-α蛋白表達量與NF-κB p65、TNF-α mRNA表達水平均升高，提示大鼠免疫水平降低，脾臟膽堿能抗炎通路受抑制，外周炎癥反應增強。點按脾俞、胃俞穴干預后，大鼠的脾臟指數與胸腺指數升高，血清中TNF-α、IL-1β、IL-6促炎因子的含量降低，脾臟組織α7nAChR的蛋白表達量及mRNA表達水平均升高，NF-κB p-p65、NF-κB p65、TNF-α蛋白表達量與NF-κB p65、TNF-α mRNA表達水平均降低，提示點按脾俞、胃俞穴提高了大鼠免疫水平，并可能通過激活脾臟組織中α7nAChR的表達，抑制NF-κB信號通路，減少促炎因子的釋放，以此緩解CFS大鼠的外周炎癥。

綜上所述，點按脾俞、胃俞穴可有效改善CFS大鼠疲勞狀態、運動行為能力，提高免疫水平，緩解外周炎癥，其機制可能是通過激活脾臟組織中α7nAChR的表達，抑制NF-κB信號通路活性，減少下游促炎因子釋放到外周循環中而發揮治療作用。

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