不同黃芪甲苷含量測定法對玉屏風顆粒質量控制的影響

【摘 要】 目的：研究參考2020版《中國藥典》黃芪項下的加氨提取法測定玉屏風顆粒中黃芪甲苷含量對其質量控制的影響。方法：分別通過加氨提取法和氨洗法對玉屏風顆粒中黃芪甲苷進行含量測定，考察不同測定方法下黃芪甲苷的轉移率，并優化加氨提取黃芪甲苷含量測定方法。結果：玉屏風顆粒以加氨提取法測得的黃芪甲苷含量高于氨洗法所測含量，兩種方法測得的轉移率存在明顯差異，優化的黃芪甲苷測定法各方法學考察試驗RSD＜4%。結論：參考2020版藥典的黃芪甲苷測定法適用于玉屏風顆粒，該法具有操作簡便、黃芪甲苷轉化率高的特點，優于氨洗法，作為玉屏風顆粒的質量控制方法可廣泛推廣。

【關鍵詞】 玉屏風顆粒；黃芪甲苷；含量測定；加氨提取法；氨洗法

【中圖分類號】R284.2

【文獻標志碼】A 【文章編號】1007-8517（2024）12-0047-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.12.zgmzmjyyzz202412010

Influence of Different Astragali Radix Assay Method on Quality Control of Yupingfeng Granule

LIU Lu FU Chuhan MEI Yan

Guangdong Food And Drug Vocational-technical School，Guangzhou 510663， China

Abstract：Objective To studythe influence of 2020 Chinese pharmacopoeia astragaloside Ⅳassay methodunder Astragali radixitem on quality control of Yupingfeng Granule.Methods The content of astragaloside Ⅳ in Yupingfeng Granule was determined by ammonia-added extraction method and ammonia-washed method. Transfer rate of astragaloside Ⅳ measured by different methods was investigated. The ammonia-added extraction astragaloside Ⅳ assay method of Yupingfeng Granule was optimized.Results Astragaloside IV content of the ammonia-added extraction samples from Yupingfeng Granule was higher than the ammonia-washedsamples. The transfer rate measured by the two methods was significantly different. RSD of the optimized method for the determination of astragaloside IV was less than 4%.Conclusion With easy operation and high conversion rate， the astragaloside IV assay methodmodified from 2020 Chinese pharmacopoeia is applicable to Yupingfeng Granule， which is superior to ammonia-washed method and could be widely applied to quality control method for Yupingfeng Granule.

Key words：Yupingfeng Granule;Astragaloside Ⅳ;Determination;Ammonia-added Extraction Method; Ammonia-washed Method

2020年版中國藥典于2020年12月實施，與2015版藥典一部比較，中藥修訂了452個品種，其中包括了黃芪的黃芪甲苷含量測定方法的改變，由氨洗法改進為加氨提取法［1-2］。在按藥典方法檢測黃芪藥材的日常藥品檢驗工作中發現，2015版藥典方法以甲醇浸泡過夜后索氏提取，再以水飽和正丁醇萃取，最后氨洗并過D101型大孔樹脂柱純化，2020版藥典方法僅以含氨甲醇加熱回流即可，操作簡便，樣品制備時間短，測得黃芪甲苷含量高，總體優于2015版藥典方法。然而，以黃芪甲苷作含量測定指標的大多數成方制劑，如玉屏風顆粒，于2020版藥典中方法未作變更，仍采用氨洗法，樣品溶液制備耗時費力，方法有待優化［3-15］。同時，黃芪甲苷測定需加堿轉化，具有一定特殊性，制劑方法與藥材標準方法不一致，可能會影響制劑從投料生產、制備到成品檢測的質量控制。作者對玉屏風顆粒采用加氨提取法檢測黃芪甲苷的可行性進行研究，通過比較加氨提取法和氨洗法黃芪甲苷測定結果，探討參考新版藥典的黃芪甲苷測定法對玉屏風顆粒質量控制的影響，并在此基礎上提出建立相關質量控制方法的建議。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200，1260高效液相色譜儀- Alltech 3300蒸發光散射檢測器。

1.2 試劑 提取樣品用甲醇、氨水為分析純（廣州化學試劑廠），乙腈為色譜純（Thermo Fisher），水為超純水（Millipore Adavantage A10制備）。

1.3 對照品、對照藥材及樣品 黃芪甲苷對照品（批號：110781-201616；含量以93.0%計）購自中國食品藥品檢定研究院；玉屏風顆粒（批號：180203、180905、181001）購自廣東環球制藥有限公司；陰性對照為依玉屏風顆粒處方工藝制成的缺黃芪樣品。

2 方法與結果

2.1 不同方法測定黃芪甲苷含量比較

2.1.1 玉屏風顆粒不同制備方法樣品黃芪甲苷含量測定 2020版藥典玉屏風顆粒黃芪甲苷含量測定方法即氨洗法，與加氨提取優化法對比見2.2。

2.2 玉屏風顆粒黃芪甲苷含量測定方法優化

[JP2]2.2.1 液相條件 色譜柱：Waters Xbridge C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱溫：30 ℃；流動相：乙腈-水（32∶68）；進樣量：10 μL；檢測器：ELSD，漂移管溫度45 ℃，載氣流速1.5 L·min-1。[JP］2.2.2 樣品溶液制備 取玉屏風顆粒樣品，研細，取約2.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入含4%濃氨試液的80%甲醇溶液100 mL，密塞，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用溶劑補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液50 mL，蒸干，殘渣加水15 mL，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取6次，每次15 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣用80%甲醇溶解，轉移至5 mL量瓶中，加80%甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.2.3 專屬性考察 按玉屏風顆粒工藝制備缺黃芪的陰性對照，取黃芪陰性對照，制成陰性對照溶液。取對照品溶液、樣品溶液、黃芪陰性對照溶液進行測定，結果樣品黃芪甲苷色譜峰位置上無陰性干擾。如圖1所示。

2.2.4 線性范圍考察 取黃芪甲苷對照品加80%甲醇配制系列濃度的對照品溶液，以峰面積的對數（Y）對黃芪甲苷濃度的對數（X）進行回歸，作標準曲線。結果在59.14～236.57 μg·mL-1范圍內呈線性關系，標準曲線為Y=1.668 6X+7.947 4（r2=0.999 8）。

2.2.5 精密度試驗 同一樣品溶液（180905）重復進樣6次， RSD為0.57%。

2.2.6 穩定性試驗 同一樣品溶液（180905）分別在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h進行測定，RSD為0.79%。

2.2.7 重復性試驗 取同一批樣品（180905）制備6份樣品溶液，測定含量，RSD為2.41%。

2.2.8 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品（180905），精密加入一定量黃芪甲苷對照品溶液，測定含量，計得平均回收率為101.03%，RSD為3.84%。見表1。

2.2.9 樣品測定 分別以藥典法和優化方法測定多批樣品黃芪甲苷含量。見表2。

3 討論

3.1 2020版藥典黃芪甲苷含量測定法的特點和對成藥質量檢測的影響 加氨提取法具有以下優點：①無需提取后氨洗，減少操作步驟，誤差降低；②樣品制備時間短；③溶劑對黃芪甲苷的溶解度增加，提取的同時堿化，使得黃芪甲苷提取、轉化效率更高。玉屏風顆粒益氣固表止汗，由黃芪、白術、防風三味組成，依藥典，每100 g本品含黃芪120 g，主要工藝為防風提取揮發油，藥渣及余二味加水煎煮，煎液醇沉，回收乙醇后濃縮，制粒后噴揮發油。本研究選取的制劑為含黃芪處方加水提取的顆粒劑，是中藥制劑中常用工藝和劑型，經試驗，樣品制劑直接套用2020版藥典方法，會出現以下問題：①2020版藥典方法因黃芪甲苷測得含量較高，方法中省去除雜、濃縮的步驟，故檢測器測得響應較低，不利于成分復雜、黃芪甲苷含量低的樣品測定，而且玉屏風顆粒在提取后直接測定所得峰面積仍較小，不便于建立方法，為滿足檢測要求須提高樣品溶液濃度；②中成藥的提取工藝多以水為溶媒，溶劑含水易使樣品測定受其它成分和輔料的影響，玉屏風顆粒在加入溶劑超聲提取后，多黏結，不易分散，影響目標成分溶出和測定結果的Rw6yj3NCliLQ2RlQQhVIfg==重復性，需以回流法，通過加熱沸騰使樣品分散、溶解。

3.2 含測法變更對成藥源頭、生產的影響 2020版藥典除變更了黃芪甲苷測定方法外，還將限量標準從0.040%上調至0.080%，這將影響相關成藥的原料藥材準入，因此成品的質量標準亦應根據實際情況調整。不同測定方法含量不同，但不同方法之間的提取效率、含量未發現有無明顯比例關系，不同方法計得的黃芪甲苷轉移率存在明顯差異，因此方法變更可能需調整生產過程中以黃芪甲苷含量為指標的質量控制參數。

3.3 黃芪甲苷含量測定方法優化考察 研究建立了玉屏風顆粒的黃芪甲苷加氨提取測定法，方法學考察結果良好。對玉屏風顆粒樣品提取方法進行考察，分別以索氏回流、加熱回流提取6 h，結果含量差異不大，考慮操作簡便性，選擇提取方法為加熱回流；分別以加熱回流提取1 h、1.5 h、2 h、2.5 h、6 h，結果分別為0.6239 mg·g-1、0.7603 mg·g-1、0.8242 mg·g-1、0.8071 mg·g-1、0.7995 mg·g-1，故選擇提取時間為2 h；樣品提取后直接濃縮，殘渣較難溶解，樣品溶液放置一段時間后有較多沉淀析出，通過正丁醇萃取后，濃縮殘渣較易溶解，樣品溶液澄清，無明顯沉淀析出；比較水飽和正丁醇萃取對測定的影響，分別萃取4次、5次、6次，結果分別為0.6972 mg·g-1、0.6767 mg·g-1、0.8157 mg·g-1，故確定萃取次數為6次。本研究優化的玉屏風顆粒黃芪甲苷含量測定方法切實可行，比原方法操作簡便快捷，可為提高相關質量標準提供參考。

本研究以玉屏風顆粒為例進行探討，認為加氨提取法較氨洗法有優勢，應用于成藥制劑質量評價具一定可行性，但質量檢測方法的方法變更將影響成藥從源頭、過程到成品的質量控制，建議完善、提高相關中成藥的質量標準，使與原料藥材測定方法一致。

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（收稿日期：2023-09-07 編輯：劉 斌）