卵母細(xì)胞成熟度在高齡患者ICSI治療結(jié)局中的影響研究

【摘要】 目的：探究高齡患者卵胞漿內(nèi)單精子注射（ICSI）中卵母細(xì)胞成熟度對其治療結(jié)局的影響。方法：選取贛州市婦幼保健院于2019年1月—2022年12月收治的進(jìn)行ICSI助孕治療的142例高齡患者作為研究對象，根據(jù)患者卵母細(xì)胞成熟度（成熟卵母細(xì)胞與取卵獲得卵母細(xì)胞數(shù)之比）將患者分為A組（成熟度>80%，n=104）、B組（60%<成熟度≤80%，n=28）、C組（成熟度≤60%，n=10）。比較三組獲卵情況及妊娠結(jié)局[受精率、雙原核（2PN）受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、囊胚形成率、累計(jì)臨床妊娠率]。結(jié)果：三組獲卵率、平均獲卵數(shù)、≥14 mm卵泡數(shù)、MⅡ卵率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。A組獲卵率、平均獲卵數(shù)、≥14 mm卵泡數(shù)、MⅡ卵率均顯著高于B組與C組（P<0.05）。三組受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、囊胚形成率、累計(jì)妊娠率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。三組2PN受精率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且以A組的2PN受精率最高（P<0.05）。A組與B組的累計(jì)妊娠率均高于C組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：高齡患者行ICSI治療結(jié)局受卵母細(xì)胞成熟度的影響，卵母細(xì)胞成熟度低可對獲卵情況、受精及胚胎發(fā)育造成負(fù)面影響。

【關(guān)鍵詞】 高齡 卵母細(xì)胞成熟度 卵胞漿內(nèi)單精子注射 受精率 優(yōu)質(zhì)胚胎率

Study on Effect of Oocyte Maturation on ICSI Outcomes in Elderly Patients/XIE Lisong， ZHOU Longping， YUE Linlin. //Medical Innovation of China， 2024， 21（21）： 170-174

[Abstract] Objective： To investigate the effect of oocyte maturation on intracytoplasmic sperm injection （ICSI） outcomes in elderly patients. Method： A total of 142 elderly patients who received ICSI assisted pregnancy in Ganzhou Women and Children's Health Care Hospital from January 2019 to December 2022 were selected as the research subjects， according to the degree of oocyte maturation （the ratio of mature oocytes to oocytes obtained）， the patients were divided into group A （maturity >80%， n=104）， group B （60% <maturity ≤80%， n=28） and group C （maturity ≤60%， n=10）. Oocyte retrieval and pregnancy outcomes [fertilization rate， bipronuclear （2PN） fertilization rate， high-quality embryo rate， blastocyst formation rate and cumulative clinical pregnancy rate] were compared among the three groups. Result： There were statistically significant differences in oocyte retrieval rate， average number of retrieved oocytes， number of follicles ≥14 mm and MⅡ rate of oocytes among the three groups （P<0.05）. The oocyte retrieval rate， average number of retrieved oocytes， number of follicles ≥14 mm and MⅡ rate of oocytes in group A were significantly higher than those in group B and group C （P<0.05）. The fertilization rate， high-quality embryo rate， blastocyst formation rate and cumulative pregnancy rate showed no statistically significant differences among the three groups （P>0.05）. The difference in fertilization rate of 2PN among the three groups was statistically significant， and 2PN fertilization rate in group A was the highest （P<0.05）. The cumulative pregnancy rate of group A and group B was higher than that of group C， the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion： ICSI outcomes in elderly patients is influenced by oocyte maturation， and low oocyte maturation has adverse effect on oocyte retrieval， fertilization and embryonic development.

[Key words] Elderly Oocyte maturation Intracytoplasmic sperm injection Fertilization rate High-quality embryo rate

First-author's address： Department of Reproductive Medicine， Ganzhou Women and Children's Health Care Hospital， Ganzhou 341000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2024.21.041

相關(guān)數(shù)據(jù)調(diào)查顯示高齡產(chǎn)婦占比約5%[1]，而女性到了一定年齡其卵母細(xì)胞質(zhì)量將隨著年齡的增加而不斷下降進(jìn)而對生育能力造成影響，因此需采用科學(xué)的方式幫助高齡女性受孕[2-3]。有研究報(bào)道卵胞漿內(nèi)單精子注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）可用于治療因男性因素而導(dǎo)致的不孕并使患者獲得健康嬰兒，ICSI在全球得到廣泛應(yīng)用[4]。隨著ICSI技術(shù)的不斷發(fā)展，其可對男性不育進(jìn)行治療，后該技術(shù)治療范圍的不斷擴(kuò)大至女性不孕，臨床應(yīng)用廣泛[5]。在ICSI的治療周期中，超促排卵使多個(gè)卵泡發(fā)育，其主要目的在于獲得一定數(shù)量的成熟卵母細(xì)胞（MⅡ期）[6]。但卵母細(xì)胞成熟度不足或者成熟度低下的患者在ICSI的臨床應(yīng)用中較為常見，特別是高齡患者，這直接關(guān)系到卵母細(xì)胞受精和胚胎發(fā)育情況，從而導(dǎo)致可移植胚胎數(shù)缺乏并直接對治療結(jié)局造成影響[7]。因此探究高齡患者卵母細(xì)胞成熟度是否對ICSI存在影響，有助于改善治療手段，使患者獲得更好的卵母細(xì)胞質(zhì)量和治療結(jié)局。基于此，本研究將對高齡患者卵母細(xì)胞成熟度對ICSI治療結(jié)局的影響進(jìn)行探究，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取贛州市婦幼保健院于2019年1月—2022年12月收治的142例高齡妊娠患者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡≥35歲；（2）促排卵方案采用促性腺激素釋放激素（gonadotropin-releasing hormone，GnRH）拮抗劑或者黃體期促排卵PPOS方案。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）行胚胎植入前遺傳學(xué)檢測（preimplantation genetic testing，PGT）助孕；（2）不配合試驗(yàn)；（3）卵母細(xì)胞成熟度≤10%；（4）臨床資料不全。根據(jù)取卵日脫顆粒細(xì)胞后患者卵母細(xì)胞成熟度（成熟卵母細(xì)胞與取卵獲得卵母細(xì)胞數(shù)之比）將患者分為A組（成熟度>80%，n=104）、B組（60%<成熟度≤80%，n=28）、C組（成熟度≤60%，n=10）。患者或家屬知情同意本研究。研究經(jīng)贛州市婦幼保健院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

所有患者均行ICSI。（1）促排卵方案。所有患者均使用GnRH拮抗劑或者黃體期促排卵PPOS方案進(jìn)行治療。①GnRH拮抗劑方案促排卵：月經(jīng)第2～4天，予125～300 IU的重組人促卵泡激素（recombinant human follicle-stimulating hormone，rh-FSH）注射液[生產(chǎn)廠家：長春金賽藥業(yè)股份有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字S20150007，規(guī)格：5.5 μg（75 IU）/瓶]啟動促排卵。采用B超監(jiān)測卵泡、黃體生成素（LH）、雌二醇（estradiol，E2）和孕酮（progesterone，P）水平，促排第5天或當(dāng)最大卵泡直徑 11～12 mm時(shí)加用拮抗劑0.25 mg至人絨毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，hCG）日。②PPOS方案：月經(jīng)第2～4天予絨促性素（生產(chǎn)廠家：上海麗珠制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20033377，規(guī)格：1 000單位）125～300 IU啟動，同時(shí)口服孕酮：地屈孕酮（生產(chǎn)廠家：Abbott Biologicals B.V，注冊證號：國藥準(zhǔn)字HJ20170221，規(guī)格：10 mg）10 mg/次，2次/d或者孕酮（生產(chǎn)廠家：浙江仙琚制藥股份有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H33020715，規(guī)格：2 mg）6～10 mg/d至hCG日（本研究中所有患者均使用地屈孕酮）。（2）取卵。主導(dǎo)卵泡群中≥17 mm 卵泡數(shù)超過一半，予hCG（生產(chǎn)廠家：馬鞍山豐原制藥有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H34023361，規(guī)格：1 000 單位） 6 000～10 000 U，或醋酸曲普瑞林注射液（生產(chǎn)廠家：長春金賽藥業(yè)股份有限公司，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H20044922，規(guī)格：1 mL︰0.095 6 mg）0.2 mg+hCG扳機(jī)，36 h后進(jìn)行取卵。IVF-plus液中放置卵-冠-丘復(fù)合物予以漂洗，漂洗3或4次后除去紅細(xì)胞，移入卵母細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將培養(yǎng)皿置于二氧化碳（濃度為5%～6%）培養(yǎng)箱中進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)（3～4 h），將透明質(zhì)酸酶中放入卵-冠-丘復(fù)合物將周圍顆粒細(xì)胞脫去，對卵母細(xì)胞狀態(tài)進(jìn)行觀察（顯微鏡下）；第一極體出現(xiàn)在卵母細(xì)胞的卵周間隙內(nèi)且無生發(fā)泡為MⅡ期卵母細(xì)胞，未成熟卵母細(xì)胞（MⅠ和GⅤ期），異常或退化卵母細(xì)胞。（3）ICSI及胚胎培養(yǎng)。①將MⅡ期卵母細(xì)胞進(jìn)行ICSI（hCG注射后的38～42 h），次日早晨觀察是否出現(xiàn)原核（有原核即為受精，2個(gè)原核即為正常受精）及原核數(shù)量；②卵裂情況于受精后43～45 h進(jìn)行觀察，正常卵裂：發(fā)育為4～6個(gè)細(xì)胞，未卵裂：胚胎停止發(fā)育；③再次觀察（受精后48～72 h）卵裂情況，卵裂大小均勻且為5個(gè)及以上，碎片比例<20%即可進(jìn)行胚胎移植，其中優(yōu)質(zhì)胚胎：正常受精；原核期：原核分級為Z1、Z2、Z3；D2觀察：卵裂球數(shù)目4～6個(gè)，碎片少于20%，沒有多核的卵裂球；D3觀察：卵裂球數(shù)目8～10個(gè)，碎片少于20%。優(yōu)質(zhì)囊胚要求≥3BB。

（4）根據(jù)方案選擇新鮮胚胎或者凍融胚胎移植：胚胎移植14 d后檢查患者血清hCG，4～5周后進(jìn)行陰道B超檢查，顯示宮內(nèi)胎囊及胎心搏動即為臨床妊娠。

1.3 觀察指標(biāo)及評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

（1）獲卵情況：比較三組獲卵率、平均獲卵數(shù)、≥14 mm卵泡數(shù)、MⅡ卵率。MⅡ卵率=MⅡ卵數(shù)/獲卵數(shù)×100%。（2）妊娠結(jié)局：比較三組受精率、雙原核（dual pronuclear，2PN）受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、囊胚形成率、累計(jì)妊娠率，其中受精率=[2PN+單原核（monopronuclear，1PN）+三原核（tripronuclear，3PN）+多原核（multipronuclear，多PN）]/獲卵數(shù)×100%；2PN受精率=2PN胚胎數(shù)/獲卵數(shù)；優(yōu)質(zhì)胚胎率=優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)/2PN胚胎數(shù)；囊胚形成率=囊胚形成數(shù)/2PN胚胎數(shù)；累積妊娠率=妊娠例數(shù)/總例數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)記錄與分析采用SPSS 25.0，計(jì)量資料采用（x±s）描述與t檢驗(yàn)或單因素方差分析；計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示與字2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組基線資料比較

A組年齡38～46歲；不孕時(shí)間1～7年；血清促黃體生成素（luteinizing hormone，LH）：5.27～6.83 U/L；FSH：2.32～5.47 U/L；基礎(chǔ)血清和卵泡液中抗米勒管激素（anti-Müllerian hormone，AMH）：1.76～2.72 ng/mL。B組年齡38～49歲；不孕時(shí)間2～7年；LH：5.31～6.75 U/L；FSH：2.46～5.26 U/L；AMH：1.77～2.58 ng/mL。C組38～44歲；不孕時(shí)間1～7年；LH：5.29～6.66 U/L；FSH：2.37～5.44 U/L；AMH：1.73～2.75 ng/mL。三組基線資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

2.2 三組獲卵情況比較

三組獲卵率、平均獲卵數(shù)、≥14 mm卵泡數(shù)、MⅡ卵率比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；A組獲卵率、平均獲卵數(shù)、≥14 mm卵泡數(shù)、MⅡ卵率均顯著高于B組與C組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；B組平均獲卵數(shù)、≥14 mm卵泡數(shù)、MⅡ卵率均顯著高于C組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2、表3。

2.3 三組胚胎發(fā)育情況及治療結(jié)局比較

三組受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、囊胚形成率、累計(jì)妊娠率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；三組2PN受精率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且以A組的2PN受精率最高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；A組與B組的累計(jì)妊娠率均高于C組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

3 討論

有數(shù)據(jù)顯示，在高齡女性中，生育女性的平均年齡為39歲[8]。隨之而來的便是女性生育功能低下，其主要原因在于年齡增長導(dǎo)致的卵母細(xì)胞質(zhì)量惡化或質(zhì)量異常等情況[9]。故部分高齡患者在無法正常懷孕的情況下選擇采用體外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）或者ICSI進(jìn)行助孕治療，與常規(guī)IVF相比，ICSI具有更高的受精率[10-11]。受精卵后卵母細(xì)胞發(fā)育能力常用來評價(jià)卵母細(xì)胞成熟程度，對于卵母細(xì)胞成熟程度的判定通常包括胞核與胞質(zhì)的成熟，但部分高齡女性在接受助孕治療效果不顯著[12-13]，故認(rèn)為高齡患者行ICSI后受精成功或治療結(jié)局成功與否與其卵母細(xì)胞成熟度有關(guān)，因此，本研究對高齡患者卵母細(xì)胞成熟度對行ICSI治療結(jié)局的影響進(jìn)行探究。

三組獲卵情況比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A組獲卵率、平均獲卵數(shù)、≥14 mm卵泡數(shù)、MⅡ卵率均顯著高于B組與C組（P<0.05），且B組平均獲卵數(shù)、≥14 mm卵泡數(shù)、MⅡ卵率均顯著高于C組（P<0.05），表明患者卵母細(xì)胞成熟度越高，其獲卵情況越好。三組妊娠結(jié)局比較結(jié)果顯示：三組受精率、優(yōu)質(zhì)胚胎率、囊胚形成率、累計(jì)妊娠率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；三組2PN受精率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明高齡女性胚胎發(fā)育潛能受卵母細(xì)胞成熟度的影響。年齡的增長可對卵巢儲備功能及卵巢反應(yīng)性造成影響，卵巢反應(yīng)性低下則導(dǎo)致卵泡發(fā)育出現(xiàn)障礙，產(chǎn)生的卵母細(xì)胞質(zhì)量差且數(shù)量更少，進(jìn)而對妊娠及受精情況造成影響[14-15]。卵母細(xì)胞的成熟路徑是一個(gè)復(fù)雜的生物學(xué)過程，細(xì)胞膜、細(xì)胞核、透明帶、細(xì)胞質(zhì)、卵丘細(xì)胞的同步成熟即可判定為優(yōu)質(zhì)卵母細(xì)胞，才會使卵母細(xì)胞具備優(yōu)秀的受精與胚胎發(fā)育能力[16-17]。本次結(jié)果表明，卵母細(xì)胞成熟度越低2PN受精率則隨之降低，研究結(jié)果與付蕾等[18]采用IVF助孕的研究結(jié)果一致，表明無論采用何種助孕方式，卵母細(xì)胞成熟度均會影響胚胎發(fā)育。另有研究認(rèn)為，未成熟卵母細(xì)胞過多也會對妊娠與治療結(jié)局造成影響。雖明確了卵母細(xì)胞成熟度會對ICSI成功率造成影響[19-20]。但研究仍存在樣本量少、研究對象范圍不全面等不足之處，另外為提升治療成功率、改善妊娠結(jié)局，后續(xù)將通過大樣本前瞻性研究對研究結(jié)果及如何提升卵母細(xì)胞成熟度、降低未成熟卵母細(xì)胞比例進(jìn)行進(jìn)一步探究。

綜上所述，高齡患者卵母細(xì)胞成熟度不僅會與胚胎質(zhì)量密切相關(guān)，而且會對ICSI治療結(jié)局造成影響，臨床應(yīng)對高齡患者引起重視，采用合適的方式對行ICSI的患者進(jìn)行干預(yù)以改善治療結(jié)局。

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（收稿日期：2024-05-28） （本文編輯：白雅茹）