桂附顆粒提取工藝研究

【摘要】

目的：選取桂附顆粒最佳提取工藝。方法：以加水量，煎煮時間，煎煮次數作為參考因素，以肉桂酸含量及浸膏得率作為綜合指標評分，選用L9（34）正交試驗優化桂附顆粒的提取制備工藝。結果：優選桂附顆粒提取工藝的最佳條件為煎煮兩次，每次加入10倍的水，并且每次煎煮1.5 h。結論：該試驗結果合理、可行，有效成分率高，適合工業生產的需要。

【關鍵詞】

桂附顆粒；正交試驗；提取工藝

【中圖分類號】R284.2

【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2024）16-0022-04

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.16.zgmzmjyyzz202416006

Study on the Extraction Process of Guifu Granules

PI FengjuanZHANG QinglianXU ZengLUO ChuanZHU Guanglin

Luzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine， Luzhou 646000， China

Abstract：

Objective mal extraction process for Guifu granules.Methods Using water addition， decoction time， and decoction frequency as reference factors， and cinnamic acid content and extract yield as synthetical evaluation index，the extraction and preparation process of Guifu granules was optimized using L9（34） orthogonal experiment.Result Optimal：The optimal preparation process for Guifu granules is to decoct twice， mixing 10 times the amount of water each time， decocting for 1.5 hours every time.Conclusion The results of this experiment are reasonable， and have a high effective ingredient rate， which is suitable for industrial production needs.

Keywords：

Guifu Granules; Orthogonal Test; Extraction Process

桂附顆粒為《傷寒論》中的經典名方桂枝加附子湯，在我院臨床使用多年，已形成固定的協定處方，經臨床初步驗證，其治療陽虛漏汗證、陽虛感冒、產后汗出、漏汗、遺精、不明原因發熱以及由陽虛所致氣血運行不暢引起的心悸、痹證、肩周炎等療效肯定［1］。經臨床使用暫未發現毒副作用，是一種療效確切，使用安全方便的復方制劑［2］。為了進一步確定桂附顆粒的提取工藝參數，通過正交實驗，以君藥桂枝中肉桂酸的含量和干浸膏得率為指標，對前期提取工藝進行優化，為該制劑的制備提供合理可行的工藝條件參數。

1儀器與試藥

1.1儀器含四元泵、UV檢測儀、自動進樣器等的安捷倫高效液相色譜儀（型號1260）；萬分之一電子天平（型號FA2004）。

1.2試藥肉桂酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110786-201604），桂枝、白附片、白芍等藥材均由瀘州天植中藥飲片有限公司提供；炙甘草由成都康美藥業有限公司提供；除色譜乙腈外，其他試劑規格均為分析級，水為雙蒸水。

2方法與結果

2.1正交試驗設計根據預試驗，考慮劑型原因，應用L9（34）正交試驗表進行試驗，考察加水量、煎煮次數、煎煮時間對以肉桂酸含量和干浸膏得率的影響。因素水平安排見表1。

根據L9（34）正交試驗設計要求，準確稱取9份處方量藥味。將實驗飲片混合均勻，分別置于1000 mL燒瓶中，按照上述因素水平表加入純化水提取。提取液趁熱過濾，冷卻，定容即得。

2.2干浸膏得率的測定參照水溶性浸出物測定法（中國藥典2020年版 通則2201）項下的方法測定。精密移取供試品溶液50 mL，置恒重蒸發皿中蒸干，烘箱105 ℃干燥3 h，干燥器中冷卻30 min，減去皿重，計算干浸膏得率。結果見表2。

2.3肉桂酸的含量測定方法

2.3.1色譜條件色譜柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（30∶70）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：285 nm；柱溫30 ℃，理論板數按肉桂酸峰計算應不低于2000［3-5］。色譜圖如圖1所示。

2.3.2線性范圍考察精密稱取肉桂酸對照品適量，加甲醇溶液分別制成肉桂酸濃度為1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的溶液，分別精密量取上述對照品溶液10 μL注入液相色譜儀測定峰面積，橫坐標（X）為進樣量μg，縱坐標（Y）為峰面積，進行線性回歸，得回歸方程：y=8221.1x-23.785，r=0.9995。結果表明：肉桂酸在0.01～0.2 μg內，進樣量與峰面積呈良好的線性關系。

2.3.3樣品供試液的制備取提取液適量，取上清液，微孔濾膜濾過，取續濾液，即得，作為供試品溶液。

2.3.4測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中肉桂酸的含量，結果見表2，方差分析采用Spss 10.0軟件，結果見表3。

2.4結果根據正交試驗結果分析，影響出膏率、肉桂酸提取率因素順序為：C＞A＞B，A、B的影響較小，因素C對本處方提取有顯著性影響，即煎煮次數對本處方提取影響最大。根據直觀分析結果可知，優選出的提取工藝為：A3B2C3，但因素A對本處方的指標無顯著性影響，且直觀結果顯示A2和A3之間差異較小，故選擇A2，即加水量為10倍量；由于煎煮次數有顯著性影響，故對煎煮次數進行單因素考察，分別設定煎煮次數為2次、3次、4次，每次加水10倍量，煎煮1.5 h，提取液200目篩過濾。

根據煎煮次數單因素試驗結果分析，煎煮3次比煎煮2次出膏率增長10.9%；肉桂酸（mg/g）增長-0.5%；煎煮4次比煎煮3次出膏率增長6.4%；肉桂酸（mg/g）增長3.1%。

從加權評分表可看出，提取2次即能得到較高的評分，從生產實際考慮，故初步確定提取工藝為加水提取2次，每次10倍量，每次提取1.5 h，提取液200目篩過濾。

2.5驗證試驗按上述提取工藝進行3批桂附提取進工藝驗證，結果見表6。

由三批驗證數據可看出，出膏率均值為26.5%，RSD值為0.0%；肉桂酸含量平均值為0.3484 mg/g桂枝飲片，RSD值為0.8%。2個指標數據比較平行，表明提取工藝重現性好，驗證所確定的提取工藝穩定可行，綜合實驗所得，桂附提取工藝確定為：水煎煮提取兩次，每次加10倍量水，每次煎煮時間為1.5 h，提取液200目篩過濾。

3討論

桂枝加附子湯以桂枝湯為基礎，加白附片，并加重甘草用量而成。桂枝湯調和營衛，解肌祛風，附子溫經復陽，固表止汗。俾邪去而陽回，則津液自復，諸癥自愈。該方以桂枝為君，桂枝中的主要成分包含揮發油、肉桂酸、香豆素、鞣質等，由于桂皮醛屬于揮發油類，在煎煮過程中隨著水蒸氣蒸發而損失，考慮到肉桂酸為本組方的主要藥理活性成分［6］，故將肉桂酸作為本制劑的指標性成分。另外由于中藥方劑強調的是其復方功效，是整體均衡原則、綜合辨證施治和協調作用的成果［7］，因而同時也將浸膏得率設置為考察因素，結合相關研究資料，本試驗將兩者所占的權重設置相等。這樣處理比較全面，既保留了中藥湯劑的特點，又體現了中藥的整體復方功效和調理作用，可操作性強。

中藥材的提取溶劑和提取方式多種多樣，有水浸泡、有機試劑滲透、水煎煮、有機試劑回流等［8-9］。其中水煎煮最為方便，易于工業化大生產。研究表明桂枝中含有以桂皮醛為主的揮發性成分，尚含有有機酸類、鞣質類、糖類、甾體類等成分。考慮到本實驗是以水煎煮為主，桂皮醛為揮發性成分，故以有機酸類主要成分肉桂酸為考察指標，同時將浸膏得率考慮在內，這樣既保留了中藥湯劑的特點，又可以充分提現中藥的整體復方功效和調理作用，符合醫院制劑實際配制的情況，便于患者的使用和接受。因此本文確定以浸膏得率和肉桂酸含量兩種指標的綜合評分來優選最佳水煎煮提取工藝。

正交設計方法在藥學試驗研究中發揮著重要的作用［10-11］。分析表2數據可見，不同提取工藝條件下測得肉桂酸含量0.2548～0.3615 mg/g，處方中主要藥效指標在優化條件下可以提高50%，充分說明對提取工藝篩選的必要性。

綜上所述，本實驗通過對加水量，煎煮次數，煎煮時間等3個因素考察，優化了桂附顆粒的提取工藝，通過正交試驗篩選得出的最優工藝條件為水煎煮提取兩次，每次加10倍量水，每次煎煮時間為1.5 h，并進行等水平驗證試驗，結果標明，該工藝穩定可行，可得到較滿意的浸膏得率和肉桂酸含量測定結果，可使制劑質量得到保證。

參考文獻

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（收稿日期：2023-11-17編輯：劉斌）