醫院制劑益氣解毒丸工藝及質量標準研究

【摘要】

目的：對益氣解毒丸的工藝、質量進行研究，優選生產工藝參數，建立質量控制方法。方法：制備工藝從飲片干燥溫度、煉蜜等進行參數篩選，以水分、成型、浸出物等內容作為指標成分考察；以三批中試樣品進行質量研究，參照丸劑的質量要求，從性狀、鑒別、檢查、浸出物等方面對益氣解毒丸進行質量研究，采用薄層層析色譜法（TLC）對黃芪、土茯苓、淫羊藿、當歸進行制劑的鑒別研究；篩選了浸出物的測定條件。結果：黃芪、土茯苓、淫羊藿、當歸的薄層斑點清晰，圓整，陰性制劑無干擾。性狀、水分、重量差異、裝量、微生物限度均符合要求。浸出物測定條件適宜。結論：該制劑工藝簡潔易操作、穩定，可用于制劑生產；質量研究方法穩定可行，重復性好，操作簡單、方便，適用于益氣解毒丸的質量控制。

【關鍵詞】

益氣解毒丸；工藝研究、質量研究；薄層色譜；浸出物

【中圖分類號】R283.6

【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2024）16-0035-07

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.16.zgmzmjyyzz202416009

Study on The Technology and Quality Standard of Yiqi Jiedu Pills in Hospital

CHEN LidaWU Zengguang*LI YuchuanYANG Bo

The Second Affiliated Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guizhou 550025， China

Abstract：

Objective To study the technology and quality of Yiqi Jiedu pills， optimize the production process parameters and establish a quality control method. Methods The preparation technology was screened from the drying temperature and honey refining， and the contents of moisture， molding and extract were used as the index components， according to the quality requirements of pills， the quality of Yiqi Jiedu pills was studied from the aspects of character， identification， examination and extract， radix astragali， Smilax glabra， herba epimedii and Angelica sinensis were identified by TLC， and the extraction conditions were selected. Results The thin layer spots of astragalus membranaceus， Smilax glabra， herba epimedii and Angelica sinensis were clear and round， and the negative preparation had no interference. Character， moisture， weight difference， loading capacity and microbial limit all meet the requirements. The conditions for the determination of extract were suitable. Conclusion the preparation process is simple， stable and suitable for the quality control of Yiqi Jiedu pills， and the method is stable and feasible with good repeatability.

Keywords：

Yiqi JieDu Pills; Technology Research， Quality Research; TLC; Extract

益氣解毒丸為復方中藥制劑，由黃芪、土茯苓、黨參、當歸、淫羊藿、生地黃、北沙參、鹿茸等10味中藥組成。方中重用黃芪益氣升陽，為君藥；黨參補益脾氣，淫羊藿、巴戟天振元陽、益氣力，更輔以血肉有形之品鹿茸養血生髓，補其虛損， 俱為臣藥；君臣相協，使氣血生化有源、補而不滯、元氣旺盛而祛邪外出。土茯苓、白芍、生地、北沙參、當歸，泄濁解毒，養陰補血，共為佐使藥。諸藥合用共奏益氣解毒之功。現代藥理研究［1-2］證實，黃芪提取物中主要由黃芪皂苷、黃芪多糖、黃芪總黃酮等發揮雙向免疫調節作用，使機體免疫紊亂恢復正常；淫羊藿對免疫系統具有雙向調節作用［3］；土茯苓的主要藥理成分落新婦苷能上調CD4+、CD25+、Foxp3+ T細胞的數量，從而增強對T細胞活性的抑制效應，調整過度免疫狀態［4］；鹿茸多肽可促進 T、B淋巴細胞增殖，進而提高免疫功能［5］。

該方已在臨床應用已經近7年余，作為協定處方于2012年進行系統觀察，臨床研究發現，益氣解毒丸治療Ⅰ、Ⅱ型重癥肌無力（myasthenia gravis，MG）患者的總有效率治療組91%，對照組70%，兩組比較差異有統計學意義（P＜0.05）；6 個月后復查治療組CD4+、CD4+/CD8+下降，與對照組比較具有顯著性差異（P＜0.01）。因此益氣解毒丸有效治療MG的機制可能與其調節 T 淋巴細胞亞群比例水平有關［6-10］。該藥目前仍在我院使用，深受患者歡迎。對于MG患者，輕型（Ⅰ、Ⅱa型）MG患者或穩定器MG患者可單獨使用，具有提高機體免疫力，減少外感機會的作用；對于較重類型（Ⅱb～Ⅴ型），可以與西藥聯合使用，有助于糖皮質激素、免疫抑制劑的減量。因此該藥是值得推廣的治療MG的中藥制劑。

1實驗材料

1.1設備與儀器2500C多功能粉碎機（永康市艾澤拉電氣有限公司）；WF-30B萬能粉碎機（江陰市雙佳機械制造有限公司）；CT-C熱風循環干燥箱（中國常州建達干燥設備有限公司）；W7-125全自動大丸機（長沙天和制藥機械設備有限公司）；1260高效液相色譜儀（Agilent Technologies）；101-2AB型電熱鼓風干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）；2F-7暗箱三用紫外分析儀（上海嘉鵬科技有限公司）； SK5210HP型超聲波清洗器（上海科導超聲儀器有限公司）； AUW220D型分析天平（島津公司）；BHS-6 數顯恒溫水浴鍋（寧波市鄞州群安實驗儀器有限公司）。

1.2試藥黃芪對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：121462-201705 ）；當歸對照藥材（國食品藥品檢定研究院，批號：121054-201306）；土茯苓對照藥材（國食品藥品檢定研究院，批號：121439-201803）；淫羊藿對照藥材（國食品藥品檢定研究院，批號：121632-201502）；乙酸乙酯（四川西隴科學有限公司，批號： 201013 ）；正己烷（西隴科學股份有限公司，批號： 210220 ）；甲醇（Sigma-Aldrich化工試劑有限公司，批號：67-56-1 ）；乙醇（重慶萬盛川東化工有限公司，批號： 20200801 ）；石油醚（天津市致遠化學試劑有限公司，批號：20201042 ）；三氯甲烷（四川西隴化工有限公司，批號：210818 ）；甲酸（國藥集團化學試劑有限公司，批號：T20111209 ）；乙腈（Sigma-Aldrich化工試劑有限公司，批號：75-05-8）；磷酸（國藥集團化學試劑有限公司，批號：20120425 ）；薄層層析用硅膠 G（青島海洋化工廠，批號：20211107）；益氣解毒丸三批（貴州中醫藥大學第二附屬醫院制劑室提供，批號：20220301/20220302/20220303）。

2工藝研究

2.1干燥工藝研究使用水分快速測定儀測定黃芪、地黃、土茯苓、淫羊藿、鹽巴戟天、北沙參、黨參、白芍、當歸、鹿茸藥材含水量，分別為：9.6%、12.9%、12%、10%、11.3%、11.4%、9.1%、8.6%、8.5%、13.7%，由其直接制得的蜜丸水分含量在10.98%～12.34%之間，符合飲片及制劑要求，但是由于處方中地黃和鹽巴戟天2味藥材含糖量高，粘性強，質地柔韌，不易粉碎，因此有必要對這2味原藥材進行干燥處理后再混合粉碎。常用的干燥方法有常壓干燥和減壓干燥。考慮本制劑為傳統制劑，故本試驗以含水量、出粉率為評價指標，考察 60℃、70℃、80℃常壓干燥不同干燥時間，優選最佳干燥條件。按處方比例取地黃、鹽巴戟天2味藥材，分別采用上述不同干燥方法，混合除鹿茸外其余藥材粉碎、過六號篩后測定含水量和出粉率，每個試驗平行2個樣品。結果見表1。

由表1可知，80℃常壓干燥2 h時出粉率最高為84.95%、含水量為8.90%，且80℃常壓干燥到3 h時，出粉率有所降低，因此初步確定藥材的干燥工藝為：80℃常壓干燥2 h。

2.2粉碎工藝研究按原工藝除鹿茸外全處方混合粉碎，結果表明，各味藥材的質地、成分、含水量、粉碎的要求、條件等的雖有差異，但混合粉碎過六號篩出粉率達78.20%，能較精確地達到處方要求的比例。根據各味藥材質地和預實驗，發現白芍、北沙參、黃芪、土茯苓、當歸出粉率一致，地黃、鹽巴戟天粉碎率相當，淫羊藿、黨參粉碎率相當。同時由于處方中地黃、鹽巴戟天含糖量高，粘性強，質地柔韌，不易粉碎，應采用常壓干燥后串料粉碎的方式。另外中藥黨參、淫羊藿含有揮發油成分，粉碎時可采取間斷性粉碎的方式，保證粉碎機內的溫度不會過高，這樣有效減少揮發油的蒸發。因此該制劑粉碎工藝定為：地黃、鹽巴戟天2味藥材80℃常壓干燥2 h后與除鹿茸外其余藥材混合粉碎過六號篩成細粉后，將鹿茸單獨粉碎過六號篩后，與上述粉末混合即可。

2.3煉蜜條件研究

2.3.1浸出物測定條件考察參考益氣解毒丸中組方藥材在《中國藥典》2020年版一部藥材浸出物的溶劑選擇，結合益氣解毒丸組方藥味所含化學成分特性，分別以稀乙醇、70%乙醇、無水乙醇、正丁醇作為益氣解毒丸的浸出物溶劑熱浸法考察醇溶性浸出物。

熱浸法：取供試品2 g，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，精密加稀乙醇50 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取續濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，于105℃的恒溫烘箱中干燥3 h，移置干燥器內冷卻30 min，取出，迅速精密稱定重量。

醇溶性浸出物（%）=（浸出物及蒸發皿重-蒸發皿重）×加稀乙醇體積供試品的重量×量取濾液的體積×100%

由表2可知，通過對稀乙醇、70%乙醇、無水乙醇、正丁醇作為益氣解毒丸的浸出物溶劑的考察進行醇溶性浸出物測定，結果表明：70%乙醇作為浸提溶劑的浸出物含量最高，為64.95%。因此，選擇70%乙醇作為益氣解毒丸的浸提溶劑。

2.3.2不同煉蜜規格考察考察煉蜜老蜜、中蜜、嫩蜜對益氣解毒丸的水分、浸出物含量的影響，優選益氣解毒丸泛丸所需煉蜜規格。結果見表3、表4。

表由表3、表4可知，老蜜的浸出物含量最高為76.475%，但含水量太低，成品硬度太高，難以嚼服，嫩蜜含水量超過15%，不符合藥典要求。因此，選擇中蜜為益氣解毒丸輔料。

2.3.3泛丸加煉蜜量考察考察所加煉蜜量對益氣解毒丸泛丸成型、水分、浸出物的影響，優選加煉蜜量的適宜范圍。結果發現，藥粉量與煉蜜量比例低于1∶0.8，則加蜜量不夠無法泛制成型，藥粉量與煉蜜量比例高于1∶1.2，則加蜜量太大，也無法泛制成型。對其浸出物、水分的影響見表5、表6。

由表5、表6可知，藥粉量與煉蜜量比例在1∶0.8～1.2之間丸劑水分符合藥典丸劑項下要求，浸出物也相對穩定。因此，確定加煉蜜量在1∶0.8～1.2之間。

2.4中試研究按擬訂制備工藝條件進行三批放大10倍生產，對生產工藝指標進行全面考核，對飲片和成品進行質量評定，考察本品制備工藝的合理性。按所投料理論應生產666袋（15粒/袋）成品計，丸劑成品實際得率不低于85% 。工藝生產條件符合工廠大生產要求，可操作性較強，飲片、成品質量可控，成品質量穩定。中試生產工藝參數及中試產品質量檢驗數據，見表7、如圖1所示。

經三批中試生產結果表明，本產品各項技術參數與工藝優選條件相同，且工藝條件穩定，說明工藝可行，適合批量生產。

3質量研究

3.1性狀以外觀和氣味為指標，檢查三批中試樣品性狀，確定本品性狀為本品為棕褐色固體；氣清香，味甜、苦。結果見表8。

3.2TLC鑒別

3.2.1黃芪TLC鑒別取本品和缺黃芪陰性模擬試劑各6 g，分別加甲醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加20 mL水使溶解，加乙酸乙酯20 mL萃取，分取乙酸乙酯液，水浴蒸干，殘渣加甲醇1 mL溶解，分別作為供試品溶液、陰性對照溶液。另取黃芪對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。《中國藥典》2020 年版四部薄層色譜法（通則0502）試驗［11］，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯（10∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置氨蒸氣中熏約5 min，取出，置紫外燈（254 nm）下觀察。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同藍色熒光斑點，陰性對照無干擾。經3批中試樣品驗證，此方法重復性好，故將其收入質量標準草案正文。如圖2A所示。

3.2.2土茯苓TLC鑒別取本品和缺土茯苓陰性模擬試劑各6 g，分別加水20 mL，超聲30 min，用水飽和的正丁醇萃取2至3次，取正丁醇層，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，分別作為供試品溶液以及陰性對照溶液。另取土茯苓對照藥材1 g，同法制備對照藥材溶液。照《中國藥典》2020 年版四部薄層色譜法（通則0502）試驗［11］，吸取對照藥材溶液5 μL，供試品溶液以及陰性對照溶液各10～15 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸 （5∶4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈光下（365 nm）下檢視。在供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的熒光斑點，陰性對照無干擾。經3批中試樣品驗證，此方法重復性好，故將其收入質量標準草案正文。如圖2B所示。

3.2.3淫羊藿TLC鑒別取本品和缺淫羊藿陰性模擬試劑各10 g，分別加無水乙醇30 mL，加熱回流30 min，濾過，濾液水浴蒸干后，殘渣加無水乙醇1 mL使溶解，分別作為供試品溶液以及陰性對照溶液。另取淫羊藿對照藥材1 g，同法制備對照藥材溶液。照《中國藥典》2020 年版四部薄層色譜法（通則0502）試驗［11］，吸取對照藥材溶液5 μL，供試品溶液以及陰性對照溶液各10～15 μL，分別點于同一硅膠H薄層板上，以乙酸乙酯-2-丁酮-甲酸 （10∶0.5∶0.2） 為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈光下（365 nm）下檢視，在供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的熒光斑點，陰性對照無干擾。經3批中試樣品驗證，此方法重復性好，故將其收入質量標準草案正文。如圖2C所示。

3.2.4當歸TLC鑒別取本品和當歸陰性模擬試劑各10 g，分別加石油醚30 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液水浴蒸干后，殘渣加乙醇1 mL使溶解，分別作為供試品溶液以及陰性對照溶液。另取當歸對照藥材4 g，同法制成對照藥材溶液。照《中國藥典》2020 年版四部薄層色譜法（通則0502）試驗［11］，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（8∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾，經3批中試樣品驗證，此方法重復性好，故將其收入質量標準草案正文。如圖2D所示。

3.3TLC鑒別方法耐用性考察分別參照3.2項下黃芪、土茯苓、淫羊藿、當歸薄層鑒別方法制備供試品、陰性樣品對照溶液及對照藥材溶液，點樣后的硅膠G板置于不同的環境溫度（常溫、4℃、35℃）和不同的環境濕度（RH%=23%、RH%=56%、RH%=85%）展開，取出，晾干，在相同的條件下進行觀察，結果供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的色斑。陰性對照無干擾，結果表明：不同環境溫度、環境濕度對鹿晶益氣生血丸中黃芪、土茯苓、淫羊藿、當歸的鑒別無顯著性影響，其鑒別方法耐用性較好。

3.4檢查照《中國藥典》2020年版四部（0108）丸劑項下檢查的有關規定，分別檢查水分、重量差異、裝量、微生物限度，應符合規定。

3.4.1水分照《中國藥典》2020年版四部水分測定法（通則0832）測定。水分不得超過15.0% 。

采用水分測定法測定樣品水分，結果三批中試中試樣品水分分別為11.39%、11.48%、10.99%，均小于15%，符合蜜丸項下水分的規定（結果見表9）。

3.4.2重量差異照重量差異檢查法，以1丸為1份，取供試品10份，分別稱定重量，再與每份標示重量相比較，重量差異限度為±6%，超出重量差異限度的不得多于2份，并不得有1份超出限度1倍。結果三批中試樣品重量差異限度均符合規定。

3.4.3裝量取供試品5袋，外表進行清潔干燥，分別精密稱定重量，除去內容物，清潔并干燥空袋，再分別精密稱定空袋的重量，求出每袋內容物的裝量與平均裝量，平均裝量不少于標示裝量，每袋裝量不得少于標示裝量的97%。結果三批中試樣品裝量均符合規定。

3.4.4微生物限度照非無菌產品微生物限度檢查：微生物計數法和控制菌檢查法（通則1106）及非無菌藥品微生物限度標準檢查，結果三批樣品微生物限度檢查均符合規定。結果見表10。

3.5浸出物取供試品2 g，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，精密加稀乙醇50 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過，精密量取續濾液25 mL，置已干燥至恒重的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，于105℃的恒溫烘箱中干燥3 h，移置干燥器內冷卻30 min，取出，迅速精密稱定重量，三批中試樣品浸出物分別為61.86%、61.81%、62.34%，浸出物相對穩定。結果見表11。

醇溶性浸出物（%）=（浸出物及蒸發皿重-蒸發皿重）×加稀乙醇體積供試品的重量×量取濾液的體積×100%

4結論與討論

課題組參照根據益氣解毒丸臨床多年使用的經驗，遵照傳統工藝進行了益氣解毒丸的工藝及質量參數進行了研究，為后期開發成院內制劑提供依據。

該制劑處方來源于臨床經驗方，臨床使用一直沿用處方上的飲片量進行加工成蜜丸，因飲片性質、水分以及設備性能不同，粉碎后出粉率會有較大差異，后期作為制劑生產，參照《中國藥典》2020版一部凡例規定：制劑處方中規定的藥量，系指品種正文［制法］項規定的切碎、破碎或粉碎后的藥量。因此，必須折算每一味中藥飲片的出粉率，以明確制劑處方每一味中藥飲片的投料量，確保與臨床經驗方飲片用量一致性，但一些飲片含油、糖較多，單獨粉碎比較困難，大多數情況下采用混合粉碎或串料粉碎等方法，出粉率計算比較困難。出粉率控制，直接影響到制劑投料量，是制劑處方形成的基礎，非常重要，后期必須科學合理進行粉碎工藝的研究，其次，對飲片或者細粉的滅菌工藝研究，對制劑的質量控制、微生物限度考察均有重要意義。

目前該制劑作為協定方制成大蜜丸在科室使用，臨床醫生及患者對該臨方制劑的反饋比較好，但因其包裝采用丸球殼作為內包，外包塑料袋，外觀比較簡陋，且制劑質量安全性存在較大風險，且攜帶不是很方便，后期考慮泡罩包裝，其密封性好，易攜帶，外觀也比較kmULlZdjeKUxFqdmgECCsfSGsXTiQLSOoHXcZldi4mY=精美，對作為制劑批量生產，易機械化生產，效率高，人力物力成本降低。符合制劑規范生產要求。

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（收稿日期：2023-12-06編輯：陶希睿）