落葉松枯梢病生防菌的篩選、鑒定及其生物學特性

摘要：[目的]為獲得落葉松枯梢病的生防菌。[方法]通過對峙實驗和發酵液復篩，篩選獲得對落葉松枯梢病菌（Neofusicoccum laricinum）具有較強抑制效果的菌株，對篩選得到的菌株進行鑒定，并對其生物學特性展開研究。[結果]篩選得到1株對落葉松枯梢病病原菌有顯著拮抗作用的土壤真菌T2，結合形態學以及分子生物學鑒定為鉤狀木霉（Trichoderma hamatum）。其平板對峙抑菌率達到74.16％，發酵液的抑菌率達到91.29％。發酵液對多種植物病原真菌均具有較強的抑菌作用，對松球殼孢菌、金黃殼囊孢菌、揚灰星葉點霉和立枯絲核菌表現出強抑制作用，抑菌率均為92.00％，對擬枝孢鐮刀菌和楊生褐盤二孢菌的抑茵效果較好，分別為79.67％和62.67％。T2能利用多種碳氮源、有廣泛的酸堿度適應能力及較高的致死溫度。[結論]通過篩選得到的鉤狀術霉T2對落葉松枯梢病病原菌的拮抗作用顯著，抑菌譜廣，環境適應力強。本研究可為落葉松枯梢病的防治提供理論研究和基礎。

關鍵詞：落葉松；Neofusicoccum laricinum；生物防治，鉤狀木霉

中圖分類號：S432.4 文獻標識碼：A 文章編號：1001-1498（2024）04-0182-11

落葉松枯梢病于1938年在日本北海道被發現，該病于上世紀70年代在我國東北地區報道發生，日前已擴散至內蒙古、遼寧、吉林、黑龍江、山東、陜西、甘肅、江蘇、安徽和江西等多個省份。落葉松枯梢病的病原菌為Neofusicoccum laricinum （Sawada）Y.Hattori＆C Nakash，病菌一般通過傷口潛入，落葉松感病后，嫩梢褪綠逐漸變為黑褐色，彎曲下垂呈鉤狀，已木質化的枝梢感病不彎曲，葉逐漸枯萎脫落，最終生長停止，嚴重者形成小老樹或全株枯死。松枯梢病傳播范圍廣、危害嚴重，給我國林業經濟造成重大損失。目前的防治措施有營林技術措施、化學防治和生物防治。其中化學防治應用廣，效果明顯，但是長期施用化學農藥，不但會有帶來耐藥性病原菌株的風險，還會提高成本和污染環境刪。因此，生物防治是目前備受關注的防治森林病害的有效方法。

根際土壤微生物和植物內生菌有巨大的生防潛力。根際是植物根系與土壤物質能量交換的場所，在根際土壤微生物與植物的互作中，植物招募有益微生物，這些微生物可以促進植物生長，提高其抗病能力。植物內生菌在與植物的長期共存里，一些內生菌可以分泌抗菌物質抵抗病菌侵染植物，不同的植物部位，其內生菌種類和豐度也存在差異。生防菌可以通過定殖競爭作用，拮抗作用，誘導抗性和重寄生等多種作用機制，抑制或殺死植物病原菌，達到生物防治的作用，生物防治不僅對環境友好、效果突出還價格低廉。目前科學界有一些關于松枯梢病生防菌的研究，蔣萍從松樹針葉上分離篩選松枯梢病拮抗細菌，篩選出防效達60％以上的拮抗細菌。黃潔芳發現新洋蔥伯克霍爾德菌的代謝物對松枯梢病菌有拮抗作用。Yun Dai發現Bacillius purmllus Meyer＆Gottheil對松枯梢病的防治效果明顯，有效抑制病害發生。張銘篩選出一種對松枯梢病原菌有顯著抑制效果的土壤真菌M75，該真菌被鑒定為森吉木霉（Trichoderma songyi M.S.Park.S.Y.Ohamp; Y.WLim）。但是落葉松枯梢病的生防菌目前鮮見報道。

本研究擬通過對峙實驗和發酵液復篩，篩選獲得對落葉松枯梢病菌（Neofusicoccum Iaricinum）具有較強抑制效果的菌株，對篩選得到的菌株進行鑒定，并對其生物學特性展開研究，為實際生產應用中防治落葉松枯梢病奠定基礎。