秋水仙堿長期干預高脂飲食大鼠的安全性研究

張帆 趙春輝 陳麗 黃明月

[摘要]目的 探討秋水仙堿長期干預高脂飲食大鼠的安全性。方法 將30只SPF級健康雄性8周齡SD大鼠隨機分為3組，各10只。對照組大鼠采用基礎飼料喂養+生理鹽水管飼喂養8周；高脂組大鼠采用按比例配方的高脂喂養+生理鹽水管飼喂養8周，觀察組大鼠采用按比例配方的高脂喂養并給予秋水仙堿[0.02 mg/（kg·d）]管飼喂養8周，比較三組大鼠的骨髓抑制情況和免疫功能。結果 觀察組的白細胞、紅細胞、血紅蛋白的骨髓抑制發生率高于對照組、高脂組，差異均有統計學意義（P<0.05）。觀察組的CD3、CD8、CD56、CD4/CD8高于對照組、高脂組，差異有統計學意義（P<0.05）。觀察組斑塊內浸潤的巨噬細胞個數為（17.93±3.87）%，低于高脂組的（22.98±2.12）%，差異有統計學意義（P<0.05），與對照組的（16.78±2.98）%比較，差異無統計學意義（P>0.05）。結論 長期應用秋水仙堿干預高脂飲食大鼠會引起大鼠的骨髓抑制和免疫功能紊亂，該研究結果也提示臨床治療應綜合考慮，進行全面評估，以提高治療效果。

[關鍵詞]高脂飲食；骨髓抑制；大鼠；免疫功能

[中圖分類號] R332 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2018）11（c）-0037-03

[Abstract] Objective To explore the safety of Colchicine for long-term intervention in rats fed with high-fat diet. Methods Thirty healthy and male rats （SPF grade） were randomly divided into the 3 groups， and there were 10 rats in each group. Rats in the control group were fed with basal feed and saline for 8 weeks. Rats in the high-fat group were given proportionally formulated high-fat feeding + saline tube feeding for 8 weeks. The rats in the observation group were given proportionally formulated high-fat feeding + Colchicine （0.02 mg/[kg·d]） tube feeding for 8 weeks. Bone marrow suppression and immune function were compared in rats among the three groups. Results The incidence of myelosuppression of leukocytes， erythrocytes， and hemoglobin in the observation group was higher than that of the control group and high-fat group reapectively， and the differences were statistically significant （P<0.05）. The CD3， CD8， CD56， and CD4/CD8 in the observation group was higher than that of the control group and high-fat group reapectively， and the differences were statistically significant （P<0.05）. The number of infiltrating macrophages in plaque of the observation group was （17.93±3.87）%， which was significantly lower than that of the high-fat group （[22.98±2.12] %）， and the difference was statistically significant （P<0.05）， and there was no significant difference between the observation group and control group （[16.78±2.98]%） （P>0.05）. Conclusion Long-term use of Colchicine in rats with high-fat diet can cause myelosuppression and immune dysfunction. The results also suggest that clinical treatment should be considered comprehensively and evaluated comprehensively in order to improve the therapeutic effect.

[Key words] High fat diet； Myelosuppression； Rats； Immune function

動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是血管內皮損傷導致的以脂質沉積和慢性炎癥反應為特點的血管壁病變[1-2]。動脈硬化斑塊的發生、發展乃至不穩定斑塊的破裂已證實與炎癥反應有關，其中炎癥因子起重要作用。由于炎癥反應是機體防御功能的一部分，抗AS藥物長期應用產生的抗炎作用可降低機體的防御功能，因此長期應用秋水仙堿導致的骨髓抑制、糖皮質激素以及免疫抑制劑等會誘發感染等不良反應[3-5]。本研究通過探討秋水仙堿對高脂飲食大鼠的骨髓功能和免疫功能的影響，明確秋水仙堿長期干預高脂飲食大鼠的安全性。

1材料與方法

1.1實驗動物

試驗所用健康雄性SD大鼠為SPF級的8周齡大鼠由廣東省某實驗提供，共30只，體重（205±20）g。

1.2分組與喂養

30只大鼠用隨機分為三組，每組10只。對照組采用基礎飼料喂養+生理鹽水管飼喂養8周；高脂組采用按比例配方的高脂喂養+生理鹽水管飼喂養8周，觀察組采用按比例配方的高脂喂養并給予秋水仙堿（云南植物藥業有限公司，0.02 mg/（kg·d）喂養8周，實驗結束后收集大鼠血液，待測。

1.3血清指標的檢測

在治療前及治療完成后采集外周血2 ml，Ficoll 密度梯度離心法分離淋巴細胞，流式細胞儀檢測 CD3、CD4、CD8、CD56 T細胞水平變化，評價機體的免疫功能。

主動脈HE染色，測定斑塊的面積，脂質核心面積、纖維帽的厚度，斑塊內浸潤的巨噬細胞個數。大鼠動脈粥樣硬化模型成功的判斷標準為：主動脈管腔變小，內膜明顯增厚，內膜下大量平滑肌細胞（SMC）增生，脂質斑塊彌漫，可見泡沫細胞積聚，斑塊底部泡沫細胞發生變性壞死，內彈力層和中彈力板發生變性、斷裂和崩解，在內膜和中膜均出現了大量的斑快和炎細胞浸潤，其中易損斑塊的評價標準：纖維帽（<65 μm），大面積壞死的脂質核心占斑塊面積30%以上，其中還含有大量巨噬細胞等炎癥細胞（>25個/高倍鏡下）及少量的平滑肌細胞。

治療后進行大鼠的血常規檢查，骨髓的抑制程度根據WHO分為0～Ⅳ級：0級：白細胞≥4.0×109/L，血紅蛋白≥110 g/L，血小板≥100×109/L；Ⅰ級：白細胞（3.0～3.9）×109/L，血紅蛋白95～100 g/L，血小板（75～99）×109/L；Ⅱ級：白細胞（2.0～2.9）×109/L，血紅蛋白80～94 g/L，血小板（50～74）×109/L；Ⅲ級：白細胞（1.0～1.9）×109/L ，血紅蛋白65～79 g/L，血小板（25～49）×109/L；Ⅳ級：白細胞（0～1.0）×109/L ，血紅蛋白<65g/L，血小板<25×109/L。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件分析數據，計量資料用x±s表示，組間比較采用兩樣本獨立t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 三組大鼠骨髓抑制發生率的比較

觀察組的白細胞、紅細胞、血紅蛋白的骨髓抑制發生率高于對照組、高脂組，差異均有統計學意義（P<0.05）；觀察組和高脂組的白細胞、紅細胞、血紅蛋白的骨髓抑制發生率比較，差異無統計學意義（P>0.05）（表1）。

2.2三組大鼠免疫功能相關指標的比較

高脂組與對照組大鼠的CD3、CD4、CD8、CD56、CD4/CD8比較，差異無統計學意義（P>0.05），高脂組與觀察組的CD3、CD8、CD56、CD4/CD8比較，差異有統計學意義（P<0.05），但高脂組與觀察組的CD4比較，差異無統計學意義（P>0.05）（表2）。

2.3 主動脈HE染色結果

對照組大鼠血管壁內膜、中膜、外膜及平滑肌細胞結構清晰、細胞排列整齊，高脂組和觀察組大鼠的主動脈官腔可見典型的纖維斑塊及粥樣斑塊，內膜明顯增厚，但是高脂組大鼠的斑塊體積較大，融合成片，官腔較狹窄，形成的斑塊多為纖維帽薄，脂質核心大的斑塊，符合易損斑塊的特點，但是經過秋水仙堿干預的大鼠的動脈斑塊病變程度淺，斑塊的病變較為局限，官腔的狹窄程度較輕，形成的粥樣斑塊多為纖維帽厚，脂質核心小的穩定性的斑塊（圖1）。

高脂組斑塊內浸潤的巨噬細胞個數為（22.98±2.12）%，顯著高于對照組的（16.78±2.98）%，觀察組為（17.93±3.87）%，顯著低于高脂組（P<0.05），觀察組斑塊內浸潤的巨噬細胞個數與對照組比較，差異無統計學意義（P>0.05）。

3討論

秋水仙堿雖然能降低穩定性冠心病患者的血漿hs-CRP濃度，縮短患者的住院時間等，但是長期使用秋水仙堿則會發生骨髓抑制等不良反應[6-8]。本研究結果顯示，高脂飲食并不能引起大鼠的骨髓抑制，但是長期使用秋水仙堿干預高脂飲食大鼠后，大鼠的白細胞、血紅細胞和血小板的毒性程度發生了改變，因此，在秋水仙堿用藥中，要密切關注骨髓抑制的癥狀[9]。

長期的秋水仙堿藥物使用對大鼠的免疫功能也造成了很大的影響[10-12]，本研究結果顯示，觀察組大鼠外周血中的CD8、CD56、CD4/CD8在秋水仙堿藥物干預后呈顯著上升趨勢，CD4細胞的含量雖然無明顯變化，但是CD4/CD8顯著降低，提示大鼠的免疫功能已經紊亂[13-15]，但是其對免疫功能的影響機制還有待進一步研究。

斑塊內的巨噬細胞對粥樣斑塊的穩定性起很重要的作用。巨噬細胞能損傷內皮細胞[16-18]，分泌的活性金屬蛋白酶會降解斑塊中的膠原和細胞外物質，引起纖維帽變薄，血管的易損性增加。本研究結果顯示，秋水仙堿可以顯著降低巨噬細胞的數量，起穩定斑塊的作用[19-20]，這與主動脈的HE染色結果是一致的。

綜上所述，長期應用秋水仙堿干預高脂飲食大鼠會引起大鼠骨髓抑制，導致大鼠的免疫功能紊亂，該研究結果也提示臨床治療中應綜合考慮，對患者進行全面評估，提高其治療效果。

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