復合侵染云南西番蓮的兩種菜豆金色花葉病毒屬病毒的分子鑒定及序列分析

摘要西番蓮Passiflora caerulea是我國南部省區廣泛種植的一種熱帶果樹。本研究于2020年6月從云南省德宏州西番蓮種植區采集到4份疑似感染菜豆金色花葉病毒屬病毒的西番蓮樣品，利用PCR擴增、克隆、測序以及生物信息學分析等方法，明確了西番蓮樣品受菜豆金色花葉病毒屬病毒侵染。對4份西番蓮樣品進行菜豆金色花葉病毒屬病毒全基因組擴增，從中共獲得5條菜豆金色花葉病毒屬病毒全基因組序列，分別命名為YN7292-6、YN7293-12、YN7293-4、YN7294-16和YN7295-25，均具有菜豆金色花葉病毒屬單組分病毒的典型結構，編碼7個開放閱讀框（open reading frame， ORF）;其中YN7292-6、YN7293-12、YN7294-16及YN7295-25與一品紅曲葉病毒（Euphorbia leaf curl virus， EuLCuV）的不同分離物的核苷酸相似性均高于99.05%，為EuLCuV的不同分離物;而YN7293-4則與分離自江西西番蓮樣品的廣東番木瓜曲葉病毒（papaya leaf curl Guangdong virus， PaLCuGdV）分離物GNPF1（GenBank登錄號：MK673114.1）的核苷酸相似性最高，為99.70%，為PaLCuGdV的一個分離物;重組分析發現，2個分離物EuLCuV-YN7293-12和PaLCuGdV-YN7293-4 均為重組病毒。本研究首次在云南省發現EuLCuV和PaLCuGdV這2種菜豆金色花葉病毒屬病毒復合侵染西番蓮，為有效預防和控制西番蓮病毒病害的發生和傳播提供理論依據。

關鍵詞廣東番木瓜曲葉病毒;一品紅曲葉病毒;西番蓮;復合侵染;重組

中圖分類號：S 432.1文獻標識碼：ADOI：10.16688/j.zwbh.2023514Molecular identification and sequence analysis of two begomoviruses from

Passiflora caerulea in Yunnan province， ChinaZHONG Jing1，LI Tingting1，ZHAO Liling1，HOU Yue2，YE Suzheng1，XIE Mian2，DING Ming1*（1. Key Laboratory of Agricultural Biotechnology of Yunnan Province， Key Laboratory of the Southwestern Crop

Gene Resources and Germplasm Innovation， Ministry of Agriculture and Rural Affairs， Institute of Biotechnology

and Germplasm Resources， Yunnan Academy of Agricultural Sciences， Kunming650223， China; 2. Agricultural

Technology Extension Center of Mangshi County， Dehong Prefecture， Mangshi678400， China）AbstractPassiflora caerulea is a kind of tropical fruit tree widely planted in the southern provinces of China. The suspected virus-infected P.caerulea has been found in the growing area of Dehong prefecture， Yunnan province. In this study four P.caerulea samples were collected in June 2020 and identified using PCR amplification， cloning， sequencing and bioinformatics analysis. Five full genome sequences， namely YN7292-6， YN7293-12， YN7294-4， YN7294-16 and YN7295-25 were obtained from this four samples， they all have typical monopartite begomoviruses genome structure， encoding seven open reading frames （ORF）. The sequences YN7292-6， YN7293-12， YN7294-16 and YN7295-25 were most closed to different isolates of Euphorbia leaf curl virus （EuLCuV） with the similarity higher than 99.05% in total nucleotide sequences. The sequence YN7293-4 were most closely related to isolate GNPF1（GenBank accession no： MK673114.1）of papaya leaf curl Guangdong virus （PaLCuGdV） with the similarity of 99.70% in total nucleotide sequences. Recombinant analysis showed that EuLCuV-YN7293-12 and PaLCuGdV-YN7293-4 were both recombinant begomoviruses. This is first report of EuLCuV and PaLCuGdV synergistically infected passionflower in Yunnan province， which provide a theoretical basis for effective prevention and control of P.caerulea viral diseases.

Key wordspapaya leaf curl Guangdong virus;Euphorbia leaf curl virus;Passiflora caerulea;mixed infection;

recombination雙生病毒科Geminiviridae病毒是廣泛分布于全球熱帶及亞熱帶地區的一類單鏈環狀DNA病毒，對全球植物具有嚴重的危害。但近年來，雙生病毒在溫帶設施大棚中也時有發生，說明該類病毒的分布范圍在不斷擴大，推測其危害可能將會日趨嚴重［12］。根據國際病毒分類委員會（International Committee on Taxonomy of Viruses， ICTV）的分類將雙生病毒科分為14個屬［3］，分別為玉米線條病毒屬Mastrevirus、曲頂病毒屬Curtovirus、番茄偽曲頂病毒屬Topocuvirus、菜豆金色花葉病毒屬Begomovirus、甜菜曲頂病毒屬Becurtovirus、畫眉草病毒屬Eragrovirus、蕪菁曲頂病毒屬Turncurtovirus、葡萄斑點病毒屬Grablovirus、美杜莎大戟潛隱病毒屬Capulavirus［45］、柑橘褪綠矮縮相關病毒屬Citlodavirus、蘋果病毒屬Maldovirus、桑葉皺葉病毒屬Mulcrilevirus、仙人掌病毒屬Opunvirus和番茄頂葉卷曲病毒屬Topilevirus［6］，其中菜豆金色花葉病毒屬病毒是種類最多、分布最廣和造成危害最嚴重的一個屬，該屬病毒主要通過煙粉虱Bemisia tabaci以持久性方式傳播，因此又稱為粉虱傳雙生病毒。該屬病毒為環狀單鏈DNA病毒，病毒粒子大小約為18 nm×30 nm，主要侵染雙子葉植物［78］。根據基因組類型該屬病毒分為單組分和雙組分病毒，雙組分病毒包含了2條大小為2.5～2.8 kb的DNA分子（DNA-A和DNA-B），如菜豆金色花葉病毒（bean golden mosaic virus， BGMV）［9］，單組分病毒僅含一條大小約為2.8 kb的DNA分子（DNA-A），但單組分菜豆金色花葉病毒屬病毒通常還伴隨衛星分子，如中國番茄黃化曲葉病毒（tomato yellow leaf curl China virus， TYLCCNV），通常伴隨中國番茄黃化曲葉beta衛星分子（tomato yellow leaf curl China betasatellite， TYLCCNB）［10］。

西番蓮Passiflora caerulea是西番蓮科Passifloracea西番蓮屬Passiflora植物，原產于南美洲，現廣泛種植于熱帶和亞熱帶地區，至今已在我國臺灣、廣東、海南、福建、貴州、廣西、云南、四川等省區大量推廣栽種［1112］。西番蓮植株用途較廣，可作為食用、藥用和綠化觀賞苗木等［13］，由于其果肉和果汁都具有獨特的香味也被稱為百香果。近年來，西番蓮在我國南方種植面積不斷擴大，已成為部分區域特色產業中的重要果樹。前期病害調查發現，隨著云南省西番蓮種植規模不斷擴大，不同區域西番蓮種植田塊均有病毒病發生，嚴重時發病率高達100%，嚴重影響西番蓮的產量、質量和該產業的持續、健康發展，明確西番蓮病毒病的病原從而精準防治西番蓮病毒病對于西番蓮產業發展顯得尤為重要。

1993年在波多黎各首次報道了菜豆金色花葉病毒屬病毒侵染西番蓮，通過田間癥狀描述為西番蓮葉斑駁?。?4］，后經鑒定為麻風樹花葉病毒（Jatropha mosaic virus， JMV）［15］;2003年Novaes等在巴西分離到了西番蓮小葉花葉病毒（passionflower flower little leaf mosaic virus， PLLMV）［16］;2017年Vaca-Vaca等在哥倫比亞從西番蓮中分離并命名了西番蓮葉片皺縮病毒（passionflower fruit leaf distortion virus， PLDV）［17］;國內臺灣省已報道侵染西番蓮的菜豆金色花葉病毒屬病毒有2個種，分別為一品紅曲葉病毒（Euphorbia leaf curl virus， EuLCuV）和廣東番木瓜曲葉病毒（papaya leaf curl Guangdong virus， PaLCuGdV）［18］;隨后在廣西、福建等地也發現這2種菜豆金色花葉病毒屬病毒可侵染西番蓮植株［1920］。本研究對云南省德宏州疑似感染雙生病毒的西番蓮植株進行病毒種類鑒定，并通過分子生物信息學相關分析方法進行病毒序列進化及重組分析，以期為該區域西番蓮病毒病害防控提供理論依據。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1樣品來源

樣品采集：2020年10月從云南省德宏州芒市西番蓮種植區采集西番蓮疑似感染病毒的樣品4株，將樣品編號并裝入帶標記的自封袋中（圖1），置于4℃冰箱中保存備用。

1.1.2試劑和儀器

試劑：Taq Plus DNA聚合酶購自上海申能博彩生物科技有限公司;dNTPs（2.5 μmol/L）、DNA Ladder Marker購自TaKaRa公司;KOD FX DNA聚合酶購自日本東洋紡;AxyPrep DNA凝膠回收試劑盒購自美國Axygen;瓊脂糖購自德國BioFroxx;pEASY-Blunt Zero Cloning Kit購自北京全式金生物技術有限公司;pGEM-T Easy購自美國Promega公司;T4 DNA連接酶購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司;TempliPhiTM Kit購自GE Healthcare Life Sciences公司。

儀器：5418R型高速臺式離心機，Eppendof;C1000 Touch Thermal Cycler，BIO-RAD;DK-8D型數顯恒溫水浴鍋，江蘇金怡儀器科技有限公司;Tissuelyser-192型全自動樣品快速研磨儀、MK2000-2E型干式恒溫器，上海凈信實業發展有限公司;SKP-02.420型電熱恒溫培養箱，黃石市恒豐醫療器械有限公司;THZ-C-1全溫振蕩器、瓊脂糖水平電泳儀、SIM-F140AY6制冰機，SANYO。

1.2試驗方法

1.2.1總DNA的提取

西番蓮樣品總DNA的提取采用CTAB法［21］，提取的DNA用超純水溶解后于-20℃冰箱保存備用。

1.2.2西番蓮樣品中菜豆金色花葉病毒屬病毒檢測用菜豆金色花葉病毒屬病毒的通用引物PA/PB（表1）［22］對4份西番蓮樣品進行PCR檢測，同時用beta衛星分子和alpha衛星分子通用引物β01/β02［23］和UNA101/UNA102［24］（表1）對4份西番蓮樣品進行PCR檢測，以含有菜豆金色花葉病毒屬病毒全基因組的重組質粒為陽性對照，以健康西番蓮樣品為陰性對照。

PCR反應體系：10×PCR 反應緩沖液（含 Mg2+）5 μL，dNTPs（2.5 μmol/L）4 μL，F/R 引物（20 μmol/L）各 1 μL，Taq Plus DNA 聚合酶（5 U/μL）1 μL，模板DNA 0.8 μL，加超純水定容至50 μL。PCR擴增條件：94℃預變性 2 min;94℃變性45 s，50℃退火45 s，72℃延伸60 s（PA/PB）或90 s（β01/β02和UNA101/UNA102），32個循環;72℃延伸10 min。將PCR產物于1.0%瓊脂糖凝膠中進行電泳檢測，利用AxyPrep DNA凝膠回收試劑盒進行純化回收目標條帶，將回收產物與pGEM-T Easy載體連接，熱激法轉化到大腸桿菌DH5α中后進行涂板，倒置過夜培養，挑取陽性克隆，送華大基因測序。

1.2.3西番蓮樣品中菜豆金色花葉病毒屬病毒滾環擴增利用TempliPhiTM Kit對樣品DNA進行滾環擴增（rolling circle amplification， RCA），RCA可對環狀DNA進行擴增，實現靶核酸信號的放大。具體步驟：在0.2 mL離心管中加入1 μL植物總DNA樣品和5 μL樣品緩沖液，95℃變性3 min后于冰上放置10 min，再向離心管中加入0.2 μL酶和5 μL反應緩沖液，在30℃條件下反應18 h，65℃滅活10 min，4℃ 10 min，反應結束后于-20℃保存備用。

1.2.4西番蓮樣品中菜豆金色花葉病毒屬病毒全基因組擴增根據PA/PB引物擴增、克隆及測序后所得序列設計病毒全長引物PaLCuGdV-F/-R和EuLCuV-F/-R（表1）分別對PaLCuGdV和EuLCuV的全基因組序列進行擴增，分別以含有PaLCuGdV和EuLCuV全基因組的重組質粒為陽性對照，以健康西番蓮樣品為陰性對照。PCR擴增體系：2×PCR 反應緩沖液（含 Mg2+）25 μL，dNTPs（2 mmol/L）10 μL，F/R引物（20 μmol/L）各1 μL，KOD FX DNA 聚合酶（1 U/μL）1 μL，RCA 產物 0.5 μL，加超純水定容至50 μL。PCR擴增條件：98℃預變性2 min;98℃變性10 s，49℃退火30 s，68℃延伸 3 min，32個循環;68℃延伸10 min。PCR產物于1.0%瓊脂糖凝膠中進行電泳檢測，利用AxyPrep DNA凝膠回收試劑盒純化回收目標條帶，利用pEASY-Blunt Zero Cloning Kit與載體進行連接，42℃熱激轉化到大腸桿菌DH5α中后進行涂板，倒置培養12 h，挑取陽性克隆，送華大基因測序。

1.2.5數據分析

首先，通過NCBI中的BLAST（https：∥blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.）進行基因序列相似性初步比較，其次，采用DNAStar Lasergene V 7.1（Madison，Wis.，USA）軟件進一步比較基因序列相似性，并尋找基因組序列中的開放閱讀框;使用MEGA6中的鄰近法（neighbor-joining）構建系統進化樹［25］，進化樹的可信度使用1 000次自導復制驗證;采用Recombination Detection Program（RDP）V.4.56［26］的默認設置進行序列的重組分析。

2結果與分析

2.1西番蓮病樣中菜豆金色花葉病毒屬病毒檢測用菜豆金色花葉病毒屬病毒通用引物PA/PB（表1）分別對4個西番蓮樣品YN7292、YN7293、YN7294和YN7295進行PCR檢測，結果4個樣品均擴增到片段長度約為500 bp的目的條帶（圖2）。通過測序獲得4條序列，分別命名為YN7292-1、YN7293-3、YN7294-2和YN7295-5，將所獲得的核苷酸序列進行BLAST比對后發現，YN7293-3與廣東番木瓜曲葉病毒各分離物的核苷酸序列相似性在82.91%～95.22%之間，YN7292-1、YN7294-2和YN7295-5與一品紅曲葉病毒各分離物的核苷酸序列相似性在83.1%～97.6%之間。因此，推測西番蓮樣品YN7292、YN7293、YN7294和YN7295均受菜豆金色花葉病毒屬病毒侵染。

2.2西番蓮病樣中beta和alpha衛星分子檢測應用菜豆金色花葉病毒屬病毒伴隨性衛星分子beta和alpha特異性引物β01/β02和UNA101/UNA102（表1）對西番蓮樣品YN7292、YN7293、YN7294和YN7295進行PCR檢測，結果發現，4個西番蓮樣品中均未檢測到beta和alpha衛星分子（圖3）。2.3西番蓮病樣中菜豆金色花葉病毒屬病毒全基因組結構分析用一品紅曲葉病毒全長特異引物EuLCuV-F/-R對YN7292、YN7293、YN7294和YN7295進行擴增，4個樣品均擴增到片段長度約為2 800 bp的目標條帶（圖4a）。通過回收、克隆及測序，共獲得4條序列，分別命名為YN7292-6、YN7293-12、YN7294-16以及YN7295-25。應用廣東番木瓜曲葉病毒全長特異引物PaLCuGdV-F/-R對4個西番蓮樣品進行擴增，結果僅在YN7293中擴增到片段長度約為2 800 bp的目標條帶（圖4b）。通過回收、克隆及測序獲得1條序列，命名為YN7293-4。

通過SDT比對發現，YN7292-6、YN7293-12以及YN7295-25與江西西番蓮EuLCuV分離物GNPF1（GenBank登錄號：MK673114.1）核苷酸序列相似性最高，在99.05%～99.78%之間;YN7294-16與中國臺灣西番蓮EuLCuV分離物PF1（GenBank登錄號：KC161185.1）的核苷酸序列相似性最高，為99.42%;而YN7293-4則與韓國西番蓮PaLCuGdV分離物JN17-PF10（GenBank登錄號：MK070462.1）的核苷酸序列相似性最高，為99.70%（圖5）。根據ICTV對菜豆金色花葉病毒屬病毒的分類標準，病毒全基因組DNA-A核苷酸序列相似性大于91%則為同一種病毒，小于91%則為不同種病毒［3］，因此，西番蓮中獲得的YN7292-6、YN7293-12、YN7294-16以及YN7295-25 4條序列均為EuLCuV的不同分離物，分別命名為EuLCuV-YN7292-6、EuLCuV-YN7293-12、EuLCuV-YN7294-16、EuLCuV-YN7295-25;而YN7293-4則為PaLCuGdV的一個分離物，命名為PaLCuGdV-YN7293-4（圖5）。

本研究所獲得的菜豆金色花葉病毒屬病毒不同分離物全基因組序列均具有典型的單組分菜豆金色花葉病毒屬病毒基因組結構，全基因組共編碼7個開放閱讀框，正義鏈編碼V1和V2蛋白，負義鏈編碼C1、C2、C3、C4和C5蛋白，以及一個包含菜豆金色花葉病毒屬病毒復制和轉錄必需的各種元件的基因間隔區（intergenic region， IR）。將所獲序列在NCBI上進行登錄注釋，獲得的登錄號見表2。

2.4西番蓮病樣中菜豆金色花葉病毒屬病毒全基因組相似性比較在西番蓮樣品YN7292、YN7294和YN7295中僅檢測出一品紅曲葉病毒，而在YN7293樣品中同時檢測出一品紅曲葉病毒和廣東番木瓜曲葉病毒，為2種病毒復合侵染，故選取YN7293樣品的PaLCuGdV-YN7293-4和EuLCuV-YN7293-12序列進行相似性分析。

PaLCuGdV-YN7293-4分離物編碼區和非編碼區與PaLCuGdV不同分離物相似性較高，其中全長基因組核苷酸序列與韓國西番蓮PaLCuGdV分離物JN17-PF10（GenBank登錄號：MK070462.1）的相似性最高（99.7%），IR區和V1與中國臺灣西番蓮PaLCuGdV分離物BXG4（GenBank登錄號：KP876482.1）的相似性最高（99.4%和99.5%），V2、C1、C2、C3和C4與韓國西番蓮PaLCuGdV分離物JN17-PF10（GenBank登錄號：MK070462.1）的相似性最高（表3）。

EuLCuV-YN7293-12分離物編碼區和非編碼區與EuLCuV不同分離物相似性較高，其中全長基因組核苷酸序列與江西EuLCuV分離物GNPF1（GenBank登錄號：MK673114.1）的相似性最高（99.8%）;IR區與江西EuLCuV分離物GNPF1和中國臺灣EuLCuV分離物PF1（GenBank登錄號：KC161185.1）的相似性均最高（均為99.7%）;V1和V2與韓國西番蓮EuLCuV分離物DY15-3（GenBank登錄號：MG257894.1）的相似性最高（均為100%）;C1、C2、C3和C4均分別與PF1和DY15-3的核苷酸相似性最高（99.5%以上）（表4）。

2.5西番蓮病樣中菜豆金色花葉病毒屬病毒系統進化分析將PaLCuGdV-YN7293-4分離物與其他菜豆金色花葉病毒屬病毒不同分離物進行系統進化分析發現，PaLCuGdV-YN7293-4與PaLCuGdV的不同分離物聚為一個大的分支，其中又與韓國PaLCuGdV分離物形成一個相對獨立的進化分支，表明云南西番蓮病樣中分離到的PaLCuGdV分離物與韓國分離物親緣關系較近，而與中國或其他國家的PaLCuGdV不同分離物親緣關系較遠（圖6），同時也表明PaLCuGdV的進化與地理來源具有明顯相關關系。

將EuLCuV-YN7293-12分離物與其他菜豆金色花葉病毒屬病毒進行系統進化分析發現，EuLCuV-YN7293-12與EuLCuV的不同分離物聚為一個大的分支，與江西西番蓮分離物GNPF1（GenBank登錄號：MK673114.1）和韓國不同分離物聚于一個小的分支，表明EuLCuV-YN7293-12與中國分離物和部分韓國分離物親緣關系較近，同時也表明EuLCuV的進化與地理來源無明顯關系（圖7）。

2.6西番蓮中菜豆金色花葉病毒屬病毒重組分析

用RDP軟件中的9種重組檢測方法對PaLCuGdV-YN7293-4和EuLCuV-YN7293-12兩個分離物進行重組分析表明，2個分離物均存在重組事件。

EuLCuV-YN7293-12發生重組的位置位在523-946 nt之間，位于病毒基因組的V1區;其主要親本未知，但極有可能為ToLCKaV-Dapoli（GenBank登錄號：MH577031.1），次要親本為CaYMV-DR-151（GenBank登錄號：NC_025964.1）（RDP值：5.862×10-8，GENECONV值：1.647×10-9，BootScan值：7.422×10-8，MaxChi值：2.547×10-5，Chimaera值：1.994×10-6，SiScan值：7.607×10-20，3Seq值：4.035×10-2）（圖8）。

PaLCuGdV-YN7293-4發生重組的位置位在90-1 116 nt之間，位于病毒基因組的V1和V2區;其主要親本為TYLCThV-Y72（GenBank登錄號：AJ495812），次要親本為PaLCuCNV-G22（GenBank登錄號：AJ704604）（RDP值：9.559×10-3，BootScan值：3.213×10-4，MaxChi值：2.171×10-5，Chimaera值：1.556×10-5，SiScan值：1.309×10-12，3Seq值：6.264×10-3）（圖8）。

3結論與討論

近年來，隨著國內西番蓮種植規模和范圍的不斷擴大，西番蓮病毒病在全國呈現不斷蔓延趨勢，廣西、廣東、貴州、福建、臺灣等西番蓮種植區均有西番蓮病毒病的報道［1819， 2728］。本研究對采集自云南省德宏州的4個西番蓮樣品進行病毒種類鑒定。通過PCR擴增、克隆及測序獲得了5條菜豆金色花葉病毒屬病毒全長序列，通過序列分析后發現，侵染云南省德宏州西番蓮的菜豆金色花葉病毒屬病毒分別為圖6基于PaLCuGdV-YN7293-4與其他菜豆金色花葉病毒屬病毒全長核苷酸序列構建的系統進化樹

廣東番木瓜曲葉病毒和一品紅曲葉病毒，其中西番蓮樣品YN7293為2種病毒復合侵染，并進一步分析了2種病毒全基因組結構特征和進化重組關系。

一品紅曲葉病毒和廣東番木瓜曲葉病毒均屬于菜豆金色花葉病毒屬病毒，其中一品紅曲葉病毒于2004年首次在廣西報道［29］，之后我國臺灣和山東也相繼在西番蓮和一品紅上發現一品紅曲葉病毒［18，30］，該病毒除在我國發生外，目前僅在韓國有報道［31］。一品紅曲葉病毒可以侵染的寄主植物主要有西番蓮（GenBank登錄號：KT259282.1）、一品紅Euphorbia pulcherrima［30］、勝紅薊Ageratum conyzoides（GenBank登錄號：AJ811911.1）等。廣東番木瓜曲葉病毒僅在中國的雞蛋果Passiflora edulis［18］、韓國的燈籠椒［32］和菲律賓的賽山藍Ruellia blechum（GenBank登錄號：KF446660.1）有報道，在GenBank上有記錄的寄主還包括番木瓜（NC_005844.1）、洋桔梗Eustoma grandiflorum（LC089766.1）、西番蓮（KP876482.1）、煙草Nicotiana tabacum（FJ869907.1）和一品紅（FJ495184.1）。與番茄黃化曲葉病毒（tomato yellow leaf curl virus， TYLCV）相比，一品紅曲葉病毒和廣東番木瓜曲葉病毒報道的寄主范圍并不廣泛，下一步可對這2種病毒的寄主范圍進行鑒定。

本研究在云南省德宏州芒市的西番蓮樣品中檢測到EuLCuV和PaLCuGdV，獲得的PaLCuGdV分離物與韓國的不同分離物相似性較高，系統進化關系也較近;而EuLCuV的進化關系較為復雜，沒有明顯的地理分布特征，但云南西番蓮EuLCuV分離物除了與我國EuLCuV廣州分離物聚于一個小的分支，還與很多韓國EuLCuV分離物聚于一個大的分支，親緣關系也較近，因此云南西番蓮病樣中2種病毒的分離物均有可能來源于韓國。

重組是雙生病毒科病毒進化的主要動力，重組后的病毒不但能夠擴大其寄主范圍還能使寄主癥狀加重，從而造成嚴重的經濟損失［3336］。如印度木薯曲葉病是由斯里蘭卡木薯花葉病毒（Sri Lankan cassava mosaic virus， SLCMV）和印度木薯花葉病毒（Indian cassava mosaic virus， ICMV）為主的菜豆金色花葉病毒屬不同病毒引起的病害，而不同病毒的復合侵染使當地不同種病毒之間出現重組并產生了致病性更強的毒株，從而對當地木薯造成更為嚴重的危害［36］;而在西班牙，重組病毒馬拉加番茄黃化曲葉病毒（tomato yellow leaf curl Málaga virus）不僅在茄科植物番茄中檢測出，還能在豆科植物菜豆中檢測出，甚至檢出率更高，說明該病毒重組后寄主范圍在擴大［37］。本研究對4個西番蓮樣品進行病毒全序列擴增時發現，YN7293樣品是由PaLCuGdV和EuLCuV 2種病毒復合侵染的，并且通過重組分析發現，2個分離物均不同程度存在重組事件。我國廣西、福建以及臺灣等地也發現了西番蓮樣品中PaLCuGdV和EuLCuV復合侵染，因此需警惕兩種病毒在西番蓮中復合侵染后產生病毒基因組的交換等變異導致產生致病性更強的病毒種類或株系，從而造成更為嚴重的危害。針對西番蓮菜豆金色花葉病毒屬病害發生危害范圍及程度不斷增加，應加強西番蓮不同種植區種苗繁殖、調運、媒介昆蟲的防治及種植過程中菜豆金色花葉病毒屬病毒的監測，為科學防控西番蓮病毒病害提供理論基礎。

參考文獻

［1］SALEHZADEH M， AFSHARIFAR A， DEHGHANPOUR F S， et al. The first report of the chilli leaf curl virus and its beta satellite from bell peppers and tomatoes from the central provinces of Iran ［J］. Iranian Journal of Plant Pathology， 2022， 57（4）： 337341.

［2］杜江， 張麗， 崔麗艷， 等. 侵染河北土貝母的中國南瓜曲葉病毒分子特征分析［J］. 植物病理學報， 2023， 53（3）： 539545.

［3］FIALLO-OLIVE E， LETT J M， MARITIN D P， et al. ICTV virus taxonomy profile： Geminiviridae 2021 ［J/OL］. Journal of General Virology， 2021， 102（12）： 001696. DOI： 10.1099/jgv.0.001696.

［4］VARSANI A， NAVAS-CASTILLO J， MORIONES E， et al. Establishment of three new genera in the family Geminiviridae： Becurtovirus， Eragrovirus and Turncurtovirus ［J］. Archives of Virology， 2014， 159（8）： 21932203.

［5］ZERBINI F M， BRIDDON R W， IDRIS A， et al. ICTV virus taxonomy profile： Geminiviridae ［J］. Journal of General Virology， 2017， 98（2）： 131133.

［6］ROUMAGNAC P， LETT J M， FIALLO-OLIVE E， et al. Establishment of five new genera in the family Geminiviridae： Citlodavirus， Maldovirus， Mulcrilevirus， Opunvirus， and Topilevirus ［J］. Archives of virology， 2022， 167（2）：695710.

［7］ROJAS M R， HAGEN C， LUCAS W J， et al. Exploiting chinks in the plant’s armor： evolution and emergence of geminiviruses ［J］. Annual Review of Phytopathology， 2005， 43（1）： 361394.

［8］HARRISON B D， BARKER H， BOOK K R， et al. Plant viruses with circular single-stranded DNA ［J］. Nature， 1977， 270（5639）： 760762.

［9］XAVIER C A D， GODINHO M T， MAR T B， et al. Evolutionary dynamics of bipartite begomoviruses revealed by complete genome analysis ［J］. Molecular Ecology， 2021， 30（15）： 37473767.

［10］DING M， LUO Y Q， DONG J H， et al. First report of tomato yellow leaf curl China virus with DNA β infecting Datura stramonium in China ［J］. Australasian Plant Disease Notes， 2007， 2（1）： 63.

［11］吳均秀. 淺談西番蓮及其發展前景［J］. 廣西熱作科技， 1994， 50（1）： 4346.

［12］王秀榮， 段安安， 許玉蘭. 國內西番蓮引種栽培現狀及改良思路［J］. 西南林學院學報， 2003， 23（2）： 8891.

［13］李莉萍. 西番蓮綜合開發利用研究進展［J］.安徽農業科學， 2012， 40（28）： 1384013843.

［14］BROWN J K， BIRD J， FLETCHER D C. First report of Passiflora leaf mottle disease caused by a whitefly-transmitted geminivirus in Puerto Rico ［J］. Plant Disease， 1993， 77（12）： 1264.

［15］BROWN J K， BIRD J. Introduction of an exotic whitefly （Bemisia） vector facilitates secondary spread of Jatropha mosaic virus， a geminivirus previously vectored exclusively by the Jatropha biotype ［M］. United Kingdom： Intercept Publications， Wimborne， 1996： 351353.

［16］NOVAES Q S， FREITAS-ASTUA J V， YUKI A， et al. Partial characterization of a bipartite begomovirus infecting yellow passion flower in Brazil ［J］. Plant Pathology， 2003， 52（5）： 648654.

［17］VACA-VACA J C， CARRASCO-LOZANO E C， LPEZ-LPEZ K. Molecular identification of a new begomovirus infecting yellow passion fruit （Passiflora caerulea） in Colombia ［J］. Archives of Virology， 2017， 162： 573576.

［18］CHENG Y H， DENG T C， CHEN C C， et al. First report of Euphorbia leaf curl virus and papaya leaf curl Guangdong virus on passion fruit in Taiwan ［J］. Plant Disease， 2014， 98（12）： 1746.

［19］謝麗雪， 張小艷， 鄭姍， 等. 福建西番蓮上廣東番木瓜曲葉病毒的分子鑒定［J］. 東南園藝， 2019， 7（5）： 1922.

［20］羅金水， 周知恩， 王隆燊， 等. 西番蓮病毒病的發生與防控［J］. 東南園藝， 2019， 7（6）： 3640.

［21］DOYLE J J，DOYLE J L. A rapid DNA isolation procedure for small quantities of fresh leaf tissue ［J］. Phytochemistry Bulletin， 1987， 19： 1115.

［22］DENG D， MCGRATH P F， ROBINSON D J， et al. Detection and differentiation of whitefly-transmitted geminiviruses in plants and vector insects by the polymerase chain-reaction with degenerate primers ［J］. Annals of Applied Biology， 1994， 125（2）： 327336.

［23］BRIDDON R W， BULL S E， MANSOOR S， et al. Universal primers for the PCR-mediated amplification of DNA beta-a molecule associated with some monopartite begomoviruses ［J］. Molecular Biotechnology， 2002， 20（3）： 315318.

［24］BULL S E， BRIDDON R W， MARKHAM P G. Universal primers for the PCR-mediated amplification of DNA 1： a satellite-like molecule associated with begomovirus-DNA β complexes ［J］. Molecular Biotechnology， 2003， 23（1）： 8386.

［25］TAMURA K， STECHER G， PETERSON D， et al. MEGA6： Molecular evolutionary genetics analysis 3ab39e81c3d461a6f488b89815fb4980version 6.0 ［J］. Molecular Biology and Evolution， 2013， 30（12）： 27252729.

［26］MARTIN D， RYBICKI E. RDP： detection of recombination amongst aligned sequences ［J］. Bioinformatics， 2000， 16（6）： 562563.

［27］BROWN J K， ZERBINI F M， NAVAS-CASTILLO J， et al. Revision of Begomovirus taxonomy based on pairwise sequence comparisons ［J］. Archives of Virology， 2015， 160（6）： 15931619.

［28］嚴佳文， 袁啟鳳， 解璞， 等. 利用小RNA測序技術檢測貴州西番蓮病毒［J］. 熱帶作物學報， 2019， 40（8）： 15771584.

［29］MA X Y， CAI J H， LI G X， et al. Molecular characterization of a distinct begomovirus infecting Euphorbia pulcherrima in China ［J］. Journal of Phytopathology， 2004， 152（4）： 215218.

［30］李剛， 趙黎明， 高穎， 等. 侵染一品紅的一品紅曲葉病毒山東分離物的全基因組克隆和序列分析［J］. 植物保護， 2014， 40（3）： 133137.

［31］KIL E J， SEO H， BYUN H S， et al. First report of Euphorbia leaf curl virus in passion fruits in South Korea and its natural occurrence in papaya ［J］. Plant Disease， 2016， 100（4）： 865.

［32］KIM M， HONG S B， KIM J， et al. First report of papaya leaf curl Guangdong virus in bell pepper in Korea ［J］. Plant Disease， 2018， 102（10）： 2046.

［33］HANLEY-BOWDOIN L， SETTLAGE S B， OROZCO B M， et al. Geminiviruses： models for plant DNA replication， transcription， and cell cycle regulation ［J］. Critical Reviews in Plant Sciences， 1999， 18（1）： 71106.

［34］PADIDAM M， SAWYER S， FAUQUET C M. Possible emergence of new geminiviruses by frequent recombination ［J］. Virology， 1999， 265（2）： 218225.

［35］LEFEUVRE P， MORIONES E. Recombination as a motor of host switches and virus emergence： geminiviruses as case studies ［J］. Current Opinion in Virology， 2015， 10： 1419.

［36］ROTHENSTEIN D， HAIBLE D， DASGUPTA I， et al. Biodiversity and recombination of cassava-infecting begomoviruses from southern India ［J］. Archives of Virology， 2006， 151（1）： 5569.

［37］GARCA-ANDRS S， ACCOTTO G P， NAVAS-CASTILLO J， et al. Founder effect， plant host， and recombination shape the emergent population of begomoviruses that cause the tomato yellow leaf curl disease in the Mediterranean basin ［J］. Virology， 2007， 359（2）： 302312.

（責任編輯：楊明麗）