結核桿菌/利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增檢測技術聯合干擾素-γ釋放試驗對肺結核的診斷效能

【摘要】目的 探討結核桿菌利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增檢測（Gene Xpert-MTB/RIF）技術聯合干擾素-γ釋放試驗（IGRA）對肺結核的診斷效能，為臨床治療提供參考。方法 選取2022年3月至2024年3月睢寧縣中醫院收治的78例疑似肺結核患者的臨床資料，進行回顧性分析。所有患者均接受結核分枝桿菌（MTB）培養、Gene Xpert-MTB/RIF、IGRA檢查，以MTB培養結果為金標準，分析Gene X-pert MTB/RIF聯合IGRA對肺結核的診斷效能。結果 MTB培養結果顯示：78例疑似肺結核患者中，陽性58例，陰性20例；聯合檢測結果顯示：陽性72例，陰性6例。聯合檢測準確度為85.90%，靈敏度為94.83%，特異度為60.00%，陽性預測值為91.67%，陰性預測值為66.67%，均高于各項單一檢測（均P<0.05）。結論 Gene Xpert-MTB/RIF聯合IGRA診斷肺結核的價值較高，值得臨床應用。

【關鍵詞】結核桿菌；利福平；耐藥性；實時熒光定量核酸擴增檢測技術；干擾素-γ釋放試驗；肺結核

【中圖分類號】R512.91 【文獻標識碼】A 【文章編號】2096-2665.2024.21.0112.03

DOI：f0ucP/mKDCHlJ+dLgROy/V1cQzGYoCUEIHe/Nnzmly0=10.3969/j.issn.2096-2665.2024.21.034

結核病是一種由結核桿菌引起的高發傳染性疾病，主要通過飛沫傳播，可侵襲人體多個器官（如腸道、肝臟、胃和肺等），且該疾病潛伏期較長，病情多呈慢性進展性發展[1]。早期準確診斷對提升患者治療效果、改善預后具有重要價值。既往結核病的臨床診斷主要依賴結核分枝桿菌（MTB）的培養，但MTB培養通常需要幾周時間，導致診斷的時效性不足，從而錯過最佳治療時機[2]。隨著醫療技術的進步，結核桿菌利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增檢測（Gene Xpert-MTB/RIF）技術逐漸應用于肺結核的診斷，該技術能全自動提取樣本中的核酸并進行純化和濃縮，有效簡化檢測流程[3]。干擾素-γ釋放試驗（IGRA）是一種檢測結核感染的新型免疫學檢測方法，通過檢測機體感染MTB后特異性 T 細胞釋放干擾素-γ（IFN-γ）的情況判斷是否存在結核感染[4]。基于此，本研究分析Gene Xpert-MTB/RIF技術聯合IGR1H+ENb6O3jwxbNM606sa95GszaQh3T4WG0C6bphNWC8=A對肺結核的診斷效能，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2022年3月至2024年3月睢寧縣中醫院收治的78例疑似肺結核患者的臨床資料，進行回顧性分析。所有患者中男性45例，女性33例；年齡27～83歲，平均年齡（55.00±3.72）歲； BMI 20～35 kg/m2，平均BMI（27.50±1.72）kg/m2。本研究經睢寧縣中醫院醫學倫理委員會批準。納入標準：⑴符合肺結核可疑癥狀者（咳嗽、咯痰≥2周、咯血或者血痰，具有以上1項癥狀即為肺結核可疑癥狀者）[5]；⑵意識清晰，可正常溝通。排除標準：⑴存在肺結核病史者；⑵合并其他傳染性疾病者；⑶合并血液系統疾病者；⑷合并免疫系統疾病者。

1.2 研究方法 患者使用清水漱口2次，將痰液咳入無菌痰瓶后，密封并及時送至檢驗科。

MTB 培養：取1 mL痰樣本，加入20 mL 4%氫氧化鈉溶液（德國達姆施塔特默克集團，規格：500 mL/瓶），靜置 30 min 待其充分液化（可振蕩2～3次加速液化，如痰液黏稠可延長液化時間）。液化完成后接種至酸性培養基，將生化培養箱（青島海爾生物醫療科技有限公司，魯械注準20222221116，型號：HSP-160）設置為37 ℃恒溫培育14 d，培育期間觀察病原菌生長情況。培育完成后制片，采用結核分枝桿菌顯微掃描儀（鄭州中普醫療器械有限公司，豫械注準20222220089，型號：ZOPOMED-240）檢測MTB菌落生長情況。

Gene X-pert MTB/RIF：另取1 mL痰樣本，與處理液混勻（比例為1∶2）后靜置10 min，隨后再次混勻靜置5 min。取2 mL混合液貼壁加入Gene Xpert-MTB/RIF試劑盒（購自美國Cepheid公司，嚴格按照說明書操作），將其置于配套Gene X-pert檢測器中，通過配套軟件自動判讀結果。

IGRA：檢查當天，采集患者空腹靜脈血6 mL于肝素抗凝管中，16 h內將全血標本振蕩搖勻并均分裝至培養管（T）、陽性對照管（P）、陰性對照管（N）中。分別向板孔加入各管待測樣品50 μL，采用酶聯免疫吸附試驗測定。將生化培養箱設置為（37.0±0.5）℃進行培養，將板孔中待測品振蕩混勻后封板膜封板，培養60 min。取出后各孔加50 μL酶標試劑震蕩搖勻，再次封板培養60 min。取出后揭開封板膜采用洗滌液潤洗充分后，繼續培養15 min。取出后各孔加入500 μL終止液，于10 min內采用酶標儀[賽默飛世爾（上海）儀器有限公司，滬械注準20182220073，型號：Multiskan FC]測定吸光度A值，設置波長450 nm，計算各管干擾素-γ水平。N≤400 pg/mL，若P-N為任何值，T-N≥14 pg/mL且T-N=N/4，則判定為陽性；若T-N為任何值，P-N<20 pg/mL且P-N<N/4或N>400 pg/mL，則判定為陽性；若P-N≥20 pg/mL，T-N為任何值且T-N<N/4為陰性[6]。

1.3 觀察指標 ⑴比較MTB 培養、Gene X-pert MTB/RIF、IGRA檢測結果。⑵診斷效能分析。以MTB培養為金標準，分析Gene X-pert MTB/RIF、 IGRA及聯合檢測的診斷效能。準確度=[（真陽性例數+真陰性例數）/總例數]×100%；靈敏度=[真陽性例數/（真陽性例數+假陰性例數）]×100%；特異度=[真陰性例數/（真陰性例數+假陽性例數）]×100%；陽性預測值=[真陽性例數/（真陽性例數+假陽性例數）]×100%；陰性預測值=[真陰性例數/（真陰性例數+假陰性例數）]×100%。

1.4 統計學分析 采用SPSS 23.0統計學軟件分析數據。計數資料以[例（%）]表示，采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MTB 培養、Gene X-pert MTB/RIF、 IGRA檢測結果比較 MTB培養結果顯示：78例疑似肺結核患者中，陽性58例，陰性20例；聯合檢測結果顯示：陽性72例，陰性6例，見表1。

2.2 Gene X-pert MTB/RIF、 IGRA及聯合檢測的診斷效能比較 聯合檢測準確度為85.90%，靈敏度為94.83%，特異度為60.00%，陽性預測值為91.67%，陰性預測值為66.67%，均高于各項單一檢測，差異均有統計學意義（均P<0.05），見表2。

3 討論

結核病是一種由MTB引起的慢性傳染病，主要通過呼吸道進行傳播，在肺結核初期，患者主要表現為咳嗽、低熱、乏力等癥狀，若未得到及時有效的治療，隨著疾病進展會進一步損傷肺功能，嚴重威脅患者生命安全[7]。MTB具有極強的生存能力，能在宿主體內長期潛伏，結核病易發生于免疫力低下的人群（如艾滋病患者、糖尿病患者、老年人等）。肺結核的發病機制較為復雜，涉及免疫反應、慢性炎癥等方面[8]。MTB進入肺部后，通常會被巨噬細胞吞噬，但巨噬細胞并不能完全殺滅細菌，細菌繼續在細胞內存活并繁殖，之后機體免疫系統會啟動反應并產生細胞介導的免疫反應，T細胞等免疫細胞會被募集到感染部位，形成肉芽腫。此時若免疫反應足夠強烈，可控制住感染，反之則會破壞肺組織，形成空洞和結核性病變[9]。因此，盡早準確診斷對于控制結核病的傳播、改善患者預后具有重要意義。

本研究結果顯示：在78例疑似肺結核患者中，陽性58例，陰性20例；聯合檢測結果顯示：陽性72例，陰性

6例；聯合檢測準確度為85.90%，靈敏度為94.83%，特異度為60.00%，陽性預測值為91.67%，陰性預測值為

66.67%，均高于各項單一檢測。這提示Gene Xpert-MTB/RIF聯合IGRA診斷肺結核的價值較高。分析原因為，Gene Xpert-MTB/RIF技術能全自動提取樣本中的核酸并進行純化和濃縮，快速準確地檢測出MTB及利福平耐藥情況，可縮短檢測時間，為早期診斷和及時治療提供有力支持[10]。IGRA作為一種新型免疫學檢測方法，可反映機體感染MTB后特異性T細胞釋放干擾素γ的情況，具有較高的特異性，能較好地區分結核感染與其他非結核分枝桿菌感染及其他疾病[11]。兩者聯合使用，可優勢互補，提高診斷的準確性。對于一些復雜的病例（如免疫功能低下的患者、早期感染或潛伏感染的患者），單一的檢測方法易出現假陰性或準確度不高的情況。Gene Xpert-MTB/RIF 主要針對細菌核酸進行檢測，而IGRA則從免疫反應的角度檢測，二者聯

合應用可增加對特殊人群的診斷敏感性，降低漏診的可能性。

綜上所述，Gene Xpert-MTB/RIF聯合IGRA診斷肺結核的價值較高，值得臨床應用。

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1作者簡介：張志慶，大學本科，副主任檢驗師，研究方向：微生物的臨床檢驗。