恩諾沙星片含量均勻度測定方法的建立

【摘要】目的：為了建立恩諾沙星片中恩諾沙星含量均勻度的測定方法。方法：采用高效液相色譜法，以0.025 mol/L磷酸溶液（用三乙胺調節pH值至3.0）-乙腈（83∶17）為流動相，色譜柱為Waters Xbridge C18（250 mm×4.6 mm，5μm），流速為1.0 mL/ min，柱溫為35℃，檢測波長為278 nm；進樣體積為10μL。結果：恩諾沙星的峰面積積分值在20.50～102.52μg/mL范圍內具有良好的線性關系（r=0.9999），平均回收率達到99.9%，RSD=0.4%，含量均勻度的平均值（A+2.2S）分別為98.4%（5.2）、93.2%（11.0）、95.5%（10.1）、107.1%（14.8）。結論：該方法簡便、準確、可靠，適用于恩諾沙星片含量均勻度的測定。

【關鍵詞】恩諾沙星片；含量均勻度；高效液相色譜法

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.06.005

Establishment of Test for Content Uniformity in Enrofloxacin Tablets

HAN Chunxiao， GAO Hongqian， XU Bin， XU Lijia， LI Yan

（Liaoning Inspection ，Examination&Certification〔Liaoning Institute forAgro-product Veterinary Drugs and Feed Control〕， Liaoning Key Laboratory of Livestock Product Safety， Shenyang 110036， China）

Abstract： Objective： To establish the method for content uniformity of compound enrofloxacin tablets. Method： The mobile phase is 0.025 mol / L phosphoric acid solution （adjust pH to 3.0 with triethylamine） - acetonitrile （83∶17）， the HPLC column is Waters Xbridge？C18 column （250 mm×4.6 mm）， the flow rate is 1.0 mL/min， the column temperature is 35℃， the detection wavelength at 278 nm， and injection volumes are 10μL. Result： The linear range of syringing is 20.50～102.52μg/mL （r=0.9999）. The average recovery （n=9） is 99.9 % （RSD=0.4%）， the averages （A+2.2S） of the content uniformity are 98.4%（5.2）、93.2%（11.0）、95.5%（10.1）、107.1%（14.8）. Conclusion： The method is simple，accurate，reliable and suitable for content uniformity determination of enrofloxacin tablets.

Keywords： enrofloxacin tablets； content uniformity； high performance liquid chromatography

恩諾沙星（簡稱ENRO）是動物專屬的喹諾酮類抗菌藥，主要用于細菌性疾病和支原體感染的防治[1]。它對包括假單胞菌素屬在內的大部分革蘭氏陰性菌具有很強的殺滅作用，對部分革蘭氏陽性菌也有良好的抗菌效果，同時對某些支原體、衣原體、立克次氏體也顯示出有效性[2-4]，常用于腸炎、肺炎、子宮內膜炎、乳腺炎、皮膚病及一些軟組織感染的治療[5]。目前，ENRO在獸醫臨床上已得到廣泛應用，特別是在用于治療禽病的片劑中普遍含有該藥，同時在寵物用藥中也有廣泛的應用。

含量均勻度是藥品質量控制的基礎。依據《中華人民共和國獸藥典》附錄“0941含量均勻度檢查法”的規定，對于標示量不大于10 mg的片劑，應進行含量均勻度的檢查?！吨腥A人民共和國獸藥典》所收錄的恩諾沙星片規格為2.5 mg和5 mg?！吨腥A人民共和國獸藥典》2015年版對恩諾沙星片含量均勻度沒有要求[6-7]。根據獸藥國家標準制修訂計劃，本中心完成了恩諾沙星片含量均勻度方法的建立，并且此方法已被收錄在《中華人民共和國獸藥典》2020年版一部中。

1儀器與試藥

1.1儀器

Waters 2695型高效液相色譜儀，配紫外檢測器；梅特勒公司生產的AX205DR型電子天平；梅特勒公司生產的S220型pH計；昆山市超聲儀器有限公司生產的KQ-250DE型數控超聲波清洗器；5 mL注射器；0.22μm濾膜。

1.2試藥

恩諾沙星對照品購自中國獸醫藥品監察所（批號為H0081505，純度為99.5%）；恩諾沙星片分別購自成都乾坤動物藥業股份有限公司（批號：20180601，20180602，20180603；規格：5 mg），贛州華醫動物藥業有限公司（批號：20180110；規格：2.5 mg）；實驗用水為自制超純水，乙腈為色譜純，磷酸和三乙胺采用分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件

采用含量測定項下的色譜條件。以Waters Xbridge C18（250 mm×4.6 mm，5μm）為色譜柱，0.025 mol/L磷酸溶液（用三乙胺調節pH值至3.0）-乙腈（83∶17）為流動相，流速為1.0 mL/min，柱溫為35℃，檢測波長為278 nm，進樣量為10μL。

2.2溶液配制

配制對照品溶液：精密稱取恩諾沙星對照品（經105℃干燥至恒重），置于25 mL容量瓶中，用流動相溶解，振搖，再用流動相定容，振搖均勻，即制成質量濃度約為2 mg/mL的對照品貯存液。精密量取5 mL，用流動相稀釋定容至200 mL，搖勻，即制成對照品溶液。

配制供試品溶液：取樣品1片（5 mg）置于100 mL容量瓶中或者取樣品1片（2.5 mg）置于50mL容量瓶中，加流動相約40 mL，超聲30 min使其溶解，加流動相稀釋定容，搖勻，經0.22μm濾膜過濾后制成供試品溶液。

陰性對照溶液的制備：去除恩諾沙星片中的恩諾沙星制備空白片劑，并使用與供試品溶液相同的制備方法進行制備。

溶劑空白溶液：取流動相適量經0.22μm濾膜過濾。

2.3方法學考察

2.3.1干擾性試驗

在高效液相色譜儀中分別注入空白溶液、陰性對照溶液、對照品溶液和供試品溶液各10μL。色譜圖（圖1至圖4）顯示，供試品溶液與對照品溶液在相同保留時間處有色譜峰，陰性對照溶液和溶劑空白溶液在恩諾沙星保留時間處無色譜峰，這表明其他成分及輔料對恩諾沙星含量測定無影響。

2.3.2線性關系考察

精密量取恩諾沙星對照品貯存液，用流動相稀釋定容，按上述方法進行分析，將恩諾沙星溶液的質量濃度分別稀釋為20、40、60、80、100μg/mL。線性回歸方程以溶液的質量濃度為橫坐標，以峰面積積分值為縱坐標，線性回歸方程為：y= 69687.555x-62687.1（r=0.9999）。結果顯示，溶液濃度在20.50～102.52μg/mL內，濃度和峰面積積分值有著良好的線性關系。

2.3.3精密度試驗

取對照品溶液注入液相色譜儀，連續6次進樣，每次進樣量為10μL，根據色譜圖計算峰面積。連續6次恩諾沙星溶液的峰面積RSD為0.14%，表明儀器系統精密度符合要求。

2.3.4重復性試驗

取同一批的恩諾沙星片樣品（20180601），按照上述的方法配制6份供試品溶液，分別注入液相色譜儀，每份的進樣體積均為10μL。根據色譜圖的積分峰面積同法進行試驗，RSD為0.74%，表明方法重復性符合要求。

2.3.5穩定性試驗

取批號為20180601的恩諾沙星片樣品，按照上述方法配制供試品溶液，在與整個試驗環境相同的條件下靜置一段時間，然后分別于0、4、8、16、24 h注入液相色譜儀，每次注入10μL，根據色譜圖計算峰面積。結果顯示，恩諾沙星的RSD為0.9%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.3.6加樣回收試驗

取恩諾沙星片劑中的其他成分，置于9個100 mL容量瓶中，然后分別加入0.8、1.0、1.2 mL對照品貯存液，相當于處方量的80%、100%、120%，每個濃度有3個恩諾沙星對照品平行樣。加流動相超聲，按供試品溶液方法配制，根據上述色譜條件測定，并根據色譜圖色譜峰面積，以外標法計算回收率。結果見表1。

2.3.7耐用性試驗

取同一供試品溶液和對照品溶液，調整柱溫為30℃、35℃、40℃，或改變流速為0.8 mL/min、1.0 mL/min、1.2 mL/ min。以上色譜條件的微小改變對分離效果、含量測定均無明顯影響。

2.4樣品含量均勻度測定

取成都乾坤動物藥業股份有限公司和贛州華醫動物藥業有限公司生產的恩諾沙星片樣品各10片，制備供試品溶液，按“2.1”的色譜條件進行測定。按外標法測定峰面積，計算樣品含量，根據《中國獸藥典》2015年版（通則0941）計算含量均勻度，結果均符合要求。詳見表2。

3討論與結論

恩諾沙星片含量均勻度的檢測方法依據《中華人民共和國獸藥典》（通則0941）。除另有規定外，通常L值為15.0，對于某些特殊劑型或情況，L值可能為20.0或25.0。所測試的樣品已符合標準，且存在通過提升生產工藝可進一步優化的空間，同時本版獸藥典中含量均勻度與《中華人民共和國藥典》《美國藥典》的寬松度一致。本試驗所選批次的片劑之間含量差異較大，獸藥生產廠家應該提高藥品生產水平和工藝，如減少重量差異和優化混合工藝等，以提高藥物的混合均勻性，加強對藥品含量均勻度的質量控制。

由于本品在所選溶劑中較易崩解，且為了更加準確地定量計算，本試驗未采取研磨轉移的方法，但同時比較了振搖和超聲兩種方法對含量的影響，發現振搖和超聲對含量測定結果無明顯影響，30 min后溶解度不再增加，因而選擇超聲30 min處理樣品。

本品采用《中華人民共和國獸藥典》中恩諾沙星片含量的測定方法，結果符合《中華人民共和國獸藥典》（通則0941）含量均勻度檢查法的要求。采用上述方法可以對恩諾沙星片進行含量均勻度的檢測。

【參考文獻】

[1]應翔宇，楊永勝.獸用新型抗菌藥物：恩諾沙星[J].中國獸藥雜志，1995，29（3）：53-56.

[2]吳海坤，方炳虎，時書寧，等.恩諾沙星混懸液的研制及其在雞組織中的殘留研究[J].動物醫學進展，2010，31（4）：47-52.

[3]梁靜，李超，黃俊，等.復方氨酚烷胺片（膠囊）中主成分含量均勻度測定[J].中國藥業，2023，32（23）：7-12.

[4]蘇思尹.吲達帕胺片含量均勻度測定方法影響因素的探討[J].中國藥品標準，2018，19（4）：317-320.

[5]田潔，車寶泉，田菁.HPLC法測定復方利血平片中6個成分的含量均勻度[J].藥物分析雜質，2018，38（9）：1634-1640.

[6]紀建勛.對比2015版《中國藥典》與《美國藥典》中含量均勻度檢測法[J].中國衛生標準管理，2017（8）：65-67.

[7]國家藥典委員會.中國藥典分析檢測技術指南[M].北京：中國醫藥科技出版社，2017.

【作者簡介】

韓春曉，女，1986年出生，高級畜牧師，碩士，研究方向為獸藥檢測和質量標準制修訂。

（編輯：李鈺雙）