超高效液相色譜-串聯質譜法測定鮮蛋中喹諾酮類化合物

【摘要】采用QuEChERS法進行前處理，建立超高效液相色譜-串聯質譜同時測定鮮蛋中喹諾酮類化合物的檢測方法，并對樣品前處理和色譜條件進行優化。采用酸化乙腈提取樣品，鹽析，離心取上清液，40℃水浴下氮氣吹干，復溶后用正己烷去除脂溶性雜質，取下層溶液過濾，用UPLC-MS/MS進行測定。結果表明，喹諾酮類化合物在2～100μg/L相關系數大于0.99，檢出限和定量限分別為0.5μg/kg和2μg/kg，回收率在87.3%～109.1%，相對標準偏差為1.3%～10.2%（n=6），利用所建立的方法有7份樣品檢出恩諾沙星。本方法簡單、經濟、實用，適用于鮮蛋中的喹諾酮類化合物的測定。

【關鍵詞】超高效液相色譜-串聯質譜法；鮮蛋；喹諾酮；檢測

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.06.007

【基金項目】遼寧省應用基礎研究計劃項目（2022JH2/101300076）：食品安全非靶向篩查及溯源識別關鍵技術研究。

Determination of Fluoroquinolones Residues in Fresh Eggs by UPLC-MS/MS

CHEN Yuwei， SUN Xiaojuan， ZHOU Ziren， GAO Guanghui*

（Liaoning Inspection Examination and Certification Centre， Shenyang 110036， China）

Abstract： A method for the simultaneous determination of Fluoroquinolones in fresh eggs by UPLC-MS/MS was established using QuEChERS pretreatment， and the sample pretreatment and chromatographic conditions are optimized. The sample is extracted using acidified acetonitrile， salting out， centrifuged to obtain the supernatant， dried under nitrogen in a 40℃water bath， and after reconstitution， lipid soluble impurities were removed using n-hexane. The lower layer solution is filtered and analyzed using UPLC-MS/ MS. The results shows that the correlation coefficient of fluoroquinolones between 2～100μg/L is greater than 0.99， with detection and quantification limits of 0.5 and 2μg/kg， respectively. The recovery rate is between 87.3%～109.1%， with a relative standard deviation of 1.3%～10.2% （n=6）. Seven samples are detected for enrofloxacin using the established method. This method is simple， economical， and practical， suitable for the determination of quinolone compounds in fresh eggs.

Keywords： UPLC-MS/MS； fresh eggs； quinolones； detection

喹諾酮類抗生素是一類人畜通用的藥物，其以4-喹諾酮結構作為結構母核，屬于廣譜抗生素。由于這類抗生素具有抗菌譜廣、價格低廉、菌活性強，且與其他抗菌藥物無交叉耐藥性等優點，在人和動物疾病的治療方面應用廣泛。GB 31650—2019《食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留限量》明確規定了家禽產蛋期禁止使用的喹諾酮類藥物。GB 31650.1—2022《食品安全國家標準食品中41種獸藥最大殘留限量》規定了家禽的鮮蛋中喹諾酮類化合物最大殘留限量。目前，全國食品安全抽檢實施細則中指定鮮蛋的中喹諾酮類化合物的檢測依據GB/T 21312—2007《動物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測方法液相色譜-質譜/質譜法》。由于禽蛋中的蛋白質和脂肪的含量較高，按照指定方法進行檢測經常會出現樣品測試液渾濁的現象，不僅導致設備被污染還造成實驗結果不可靠。因此，筆者建立了一種快速、靈敏、準確、簡便的分析方法，用來檢測鮮蛋中的喹諾酮類藥物殘留。

1材料與方法

1.1儀器、標準物質、試劑及樣品來源

本研究采用的樣品為從市場中通過多階段分層隨機購買的普通雞蛋、無公害雞蛋、安心雞蛋、鵪鶉蛋等鮮禽蛋。檢測儀器為串聯四極桿液質聯用儀（美國賽默飛公司）。對照品恩諾沙星、環丙沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、培氟沙星均購于德國Dr.Ehrenstorfer公司。乙腈、甲酸（Sigma公司）均為色譜純。水為Millipore超純水。其他試劑均為分析純。

1.2溶液制備

1.2.1標準品溶液的制備

稱取喹諾酮類化合物及其內標標準品適量，以乙腈稀釋制成2、5、10、20、50、100 ng/mL系列標準溶液（內標濃度20 ng/mL）。

1.2.2樣品溶液的制備

將雞蛋打散，稱取混勻的鮮蛋液的樣品5.00 g，置于50 mL離心管中，加入50μL內標溶液（1000μg/L），渦旋1 min，避光放置10 min。加入20 mL 1%乙酸乙腈，再加入10 g無水硫酸鈉，渦旋混勻，重復提取2次，合并提取液，用1%乙酸乙腈定容50 mL，精密量取20 mL提取液，于40℃水浴下氮氣吹干，加1 mL 10%甲醇溶解殘渣，再加入2 mL正己烷渦旋混合30 s，以4000 r/min離心5 min，取下層清液，經0.22μm濾膜濾過后制成供試品溶液。

1.3檢測方法

1.3.1色譜及質譜條件

色譜柱：Waters C18 column（2.2 mm×50 mm，2.1μm）；流動相：0.1%甲酸水（A）-乙腈（B）；柱溫：30℃；進樣量：2μL，梯度洗脫程序見表1。

離子源：電噴霧正負離子模式（ESI+），掃描模式為多反應監測（MRM）模式；毛細管壓力：3500 V（PostiveIon），2500 V（NegativeIon）；鞘氣流速：50 Arb；輔助氣流速：10 Arb；吹掃氣流速：0Arb；離子傳輸管溫度：325℃；脫溶劑溫度：350℃。

1.3.2測定法

取標準品溶液及樣品溶液各2μL，注入液質聯用儀。采用標準曲線法計算含量。

2實驗方法與結果

2.1儀器條件優化

首先將0.5μg/mL的待測化合物的標準溶液分別以流動注射的方式在正離子模式下進行母離子全掃描，確定分子離子，然后對其子離子進行全掃描，優化碰撞能量等參數，得到孔喹諾酮類的最佳質譜條件。檢測參數見表2，色譜圖見圖1至圖9。

2.2方法的線性范圍及檢出限

將系列標準溶液按照“1.3”的方法進行檢測，以待測物質量濃度為橫坐標，待測物峰面積與內標峰面積的比值為縱坐標，繪制標準曲線。結果表明，喹諾酮類化合物在2～100 ng/ mL范圍內的線性關系良好，能夠滿足樣品的定量分析需求。檢出限（以3倍信噪比S/N=3計）及定量限（以10倍信噪比S/N=10計）見表3。

2.3回收率及精密度實驗

以空白基質為樣品，在2、5、40μg/kg這3個水平下進行加標回收實驗，平行測定6個樣品，計算加標回收率，結果見表4。

2.4樣品測定結果

選取鮮蛋中恩諾沙星陽性樣品，進行自建方法和國標方法比對，精確度符合要求，具體結果見表5。

2.5結果與分析

本研究改進了雞蛋中喹諾酮類化合物的前處理方法，所建方法的線性范圍、檢出限、定量限和加標回收率等指標均滿足GB/T 27404—2008《實驗室質量控制規范食品理化檢測》的要求。陽性樣品測定的結果同標準方法進行比較，相對偏差≤15%，滿足GB/T 27404—2008《實驗室質量控制規范食品理化檢測》對精密度的要求。

3結束語

本研究采用高效液相色譜-串聯質譜法測定鮮蛋中的喹諾酮類化合物殘留量。根據喹諾酮類化合物和鮮蛋的基質的性質，樣品采用1%乙酸乙腈提取，又用正己烷去除脂溶性雜質。該方法易于操作，簡便快速。經方法學驗證，該方法的回收率、精密度和準確度能夠滿足鮮蛋中獸藥殘留的分析要求。

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【作者簡介】

陳玉威，女，1978年出生，高級工程師，研究方向為食品質量與安全。

通信作者：高廣慧，女，1976年出生，主任藥師，研究方向為食品質量與安全。

（編輯：李鈺雙）