不同廠家維生素B₁片有關物質對比與研究

【摘要】目的：統一規范維生素B1片質量標準，優化有關物質檢測方法，簡化操作，保證試驗結果真實可靠。方法：采用AiChrom-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm），以3.764 g/L己烷磺酸鈉（磷酸調節pH值為3.1）為流動相A，甲醇∶乙腈（1∶1）為流動相B，梯度洗脫，對維生素B1有關物質進行分離；采用加校正因子的主成分自身對照法對維生素B1中的8個已知雜質進行定性和定量分析。結果：維生素B1與有關物質分離良好。17家企業生產的維生素B1片檢出11種雜質。結論：建立的方法專屬性良好，可有效地分離和測定維生素B1片中的有關物質。本研究為維生素B1有關物質雜質譜的研究提供科學參考。

【關鍵詞】維生素B1；有關物質；雜質

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.06.011

【基金項目】江西省藥品監督管理局科研項目（2023JS22）。

Comparison and Study of Substances Related to Vitamin B1 Tablets from Different Manufacturers

ZHENG Lupan1， HE Yafen1， FANG Wenchao1， DING Jinyou1， ZHANG Jihong2*

（1.Drug Testing Branch of Shangrao Inspection， Testing and Certification Institute， Shangrao 334000， China； 2.Product Quality Testing Branch of Shangrao Inspection， Testing and Certification Institute， Shangrao 334000， China）

Abstract： Purpose： To standardize the quality standards of vitamin B1 tablets， optimize the detection methods of related substances， simplify operations， and ensure the authenticity and reliability of test results. Method： An Ai-Crom-C18 chromatographic column （4.6 mm×250 mm， 5μm） is used， with 3.764 g/L sodium hexanesulfonate （pH adjusted to 3.1 with phosphoric acid） as the mobile phase A， Methanol∶Acetonitrile （1∶1） as mobile phase B， gradient elution， to separate vitamin B1 related substances； Qualitative and quantitative analysis of 8 known impurities in vitamin B1 was conducted using principal component self comparison method with added correction factors. Result： Vitamin B1 was well separated from related substances. Eleven impurities were detected in vitamin B1 tablets produced by 17 companies. Conclusion： The established method has good specificity and can effectively isolate and determine the relevant substances in vitamin B1 tablets. This study provides scientific reference for the study of impurity spectra of vitamin B1 related substances.

Keywords： Vitamin B1； regarding substances； impurity

0引言

維生素B1又稱為鹽酸VB1、鹽酸硫胺或硫胺素，化學名：氯化4-甲基-3-[（2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基）甲基]-5-（2-羥基乙基）噻唑鎓鹽酸鹽。國內最早以“鹽酸硫銨片”收載于《中華人民共和國藥典》1953年版，自《中華人民共和國藥典》1963年版起收載為“維生素B1片”。查閱相關文獻及各國藥典得知，目前國內外藥典對維生素B1片有關物質的控制限度相對寬松，只有《中華人民共和國藥典》2020年版二部對單個雜質和總雜質進行控制[1-2]。因此，為更好地控制該品種質量，本研究優化了檢測方法，并分別利用本法及現行標準給出的檢測方法對17個不同廠家生產的維生素B1片進行有關物質檢測和對比分析，為研究統一規范維生素B1片質量標準，優化有關物質的檢測方法，并對維生素B1片有關物質雜質譜的研究提供科學的數據參考。

1儀器和試藥

1.1儀器

Uitimate3000戴安高效液相色譜儀（賽墨飛世爾）；BS124S電子天平（德國Sartorius）；BP211D型電子天平（德國Sartoriu公司）；XMTD-7000電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫療儀器有限公司）；Ai-Chrom-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；Agilent XDB-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm）。

1.2試藥

維生素B1對照品（中國食品藥品檢定研究院，100390-201806，97.0%）；EP雜質D（氧硫胺99.08%）；EP雜質E（硫代硫胺99.87%）；EP雜質C（氯硫胺99.33%）；EP雜質G（乙酰硫胺99.80%）；EP雜質A（硫胺素硫酸酯99.0%）；EP雜質H（酮二硫代氨基甲酸酯99.0%）；EP雜質F（乙基硫胺99.0%）；維生素B1片（分別為廠家A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N、O、P、Q）；甲醇、乙腈、己烷磺酸鈉均為色譜純；水為超純水；其他試劑均為分析純試劑。

2方法和結果

2.1樣品的配制

2.1.1供試品溶液的制備

精密稱取30片，研細，精密稱取細粉適量（約相當于維生素B1 10 mg），置于10 mL量瓶中，加溶液I適量超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.2對照溶液的制備

精密量取供試品溶液1 mL，置于100 mL量瓶中，加溶液I稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.3系統適用性溶液的制備

分別精密稱取對照品EP雜質A、雜質B、雜質C、雜質D、雜質E、雜質F、雜質G、雜質H和維生素B1適量，制成質量濃度為20μg/mL的混合標準溶液，作為系統適用性溶液。溶液I為流動相A∶流動相B（85∶15）。

2.2色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以3.764 g/L己烷磺酸鈉（磷酸調節pH值3.1）為流動相A，甲醇∶乙腈（1∶1）為流動相B；梯度洗脫：0～15 min，85%A；15～45 min，80%A；45～58 min，60%A；58～64 min，60%A；64～65 min，85%A；流速：1 mL· min-1；檢測波長：248 nm；柱溫：30℃；進樣量：20μL。系統適用性試驗見圖1。

2.3專屬性試驗

取企業A生產的維生素B1片適量（約相當于維生素B110 mg），置于10 mL量瓶中，分別加入相應溶液，進行酸破壞溶液（0.1 mol/L鹽酸1 mL），堿破壞溶液（0.01%氫氧化鈉1 mL），氧化破壞溶液（3%過氧化氫1 mL），光破壞溶液（4000 lx光強），高溫破壞溶液（50℃水浴）等降解試驗。維生素B1降解情況：酸破壞溶液、堿破壞溶液及光破壞溶液均未檢出新雜質；在氧化條件下，維生素B1迅速降解產生了3個較大的雜質，分別為未知雜質J、未知雜質N和未知雜質X，同時也產生了雜質D、雜質G和4個未知雜質等6個較小雜質；在高溫條件下，未知雜質L和已知雜質G峰面積均有增大的趨勢。結果表明，該方法能有效分離維生素B1片中雜質及相關降解產物[3-5]。

2.4線性、檢測線及定量限的考察

分別精密稱取雜質A、雜質C、雜質D、雜質E、雜質F、雜質G、雜質H、維生素B1對照品適量，加溶劑制成質量濃度為600μg/mL的混合標準溶液。分別精密吸取上述混合標準溶液0 mL、0.1 mL、0.4 mL、0.6 mL、1.0 mL、1.2 mL，置于10 mL量瓶中，制成標準工作溶液。以對照品濃度為橫坐標，各組分峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程，相關系數均達到0.999以上，線性良好。取維生素B1對照適量，加溶劑稀釋制成質量濃度約為0.1/μg·mL對照品溶液，分別精密量取1μL、3μL、5μL、15μL注入液相色譜儀中。維生素B1檢測限為0.89 ng，定量限為2.691 ng。

2.5樣品測定

分別按“2.1”方法處理17家企業生產的維生素B1片，按“2.2”的色譜條件進樣，記錄色譜圖，加校正因子的主成分自身對照法計算各有關物質含量，17個廠家結果見表1。17家企業樣品共檢出11種雜質，其中有5家企業樣品檢出單個雜質含量超出雜質鑒定限0.2%。

3結束語

根據國內現有維生素B1片檢驗標準的有關物質檢查uZ0mEmQQi2w1CgJ1x4BLmQ==方法進行檢測，維生素B1出峰較快，有關雜質不能有效分離，且對單個雜質尚未限定。以雜質鑒定限0.2%為單個雜質限度，1.0%為總雜質限度對單個雜質及總雜質進行控制。據統計，依據法定標準檢測17家企業生產的維生素B1片有關物質項均在法定限度范圍內。根據該方法檢測，分別有企業M、企業L和企業K生產的維生素B1片檢出單個雜質超出限定范圍0.2%[6-7]。由此可知，目前的法定檢測方法不易區分制劑維生素B1片的質量優劣，難以控制產品質量的變化，可能會導致內在質量的誤判。本研究建立的檢測方法專屬性強、準確度好、穩定性良好，各組分均呈良好的線性關系，符合《中華人民共和國藥典》2020年版四部“分析方法驗證指導原則”，為評價不同廠家生產的維生素B1片質量優劣提供有力依據，也為液相色譜-串聯質譜聯用法測定維生素B1有關物質雜質譜的研究提供一些參考價值。

【參考文獻】

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[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2020年版四部[M].北京：中國醫藥科技出版社，2020：480-482.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2020年版二部[M].北京：中國醫藥科技出版社，2020：1473-1474.

【作者簡介】

鄭露盼，女，1990年出生，助理工程師，學士，研究方向為食品藥品質量標準研究。

通信作者：張繼紅，女，1979年出生，主管藥師，碩士，研究方向為食品藥品質量標準研究，149747048@qq.com。

（編輯：侯睿琪）