一款修護抗皺護膚精華的功效研究

本文通過體外試驗和人體功效測試相結合的方式，研究了一款修護抗皺護膚精華的功效。利用3D表皮皮膚模型評價了產品對VC刺激性的舒緩效果；采用人體功效測試，通過儀器測試、圖像拍攝分析及受試者自我評估方法對各項指標進行評估，綜合評價了產品在保濕、修護、舒緩、抗皺、緊致方面的功效。結果顯示：①相較于10%VC，添加測試產品可顯著抑制炎癥因子表達；②使用產品4周后，皮膚角質層水分含量、經皮水分流失率、皮膚紅區參數、皮膚彈性（R2、R5、R7）、皮膚緊致度（F4）、外眼角皺紋參數均有顯著性改善。結果表明，該精華產品具有良好的保濕、修護、舒緩、抗皺、緊致的效果。

關鍵詞：修護；舒緩；抗皺；人體功效評價

皮膚作為人體免疫系統的第一道防線，直接與外界環境接觸，更容易受到外部因素的影響而處于敏感狀態[1]。敏感性皮膚大多表現為自覺性癥狀，如刺痛、灼燒、瘙癢緊繃感等不適感覺，可能伴有紅斑反應、鱗屑、毛細血管擴張等客觀體征[2]。目前，敏感性皮膚的生理產生機制尚不完全明確，有研究認為敏感性皮膚病的發生是一種累積皮膚屏障-神經血管-免疫炎癥的復雜過程，包括：皮膚屏障功能損傷、皮膚感覺神經功能失調、血管反應性增高、免疫炎癥反應[2]。與此同時，隨著大眾消費水平及護膚意識的提升，對護膚品的功效需求越來越多，一定程度上也加重了皮膚的負擔。開發能夠修護敏感性肌膚同時具有其他護膚功效的護膚品成為化妝品市場的熱門研究方向之一。

神經酰胺是皮膚表皮層細胞間脂質的重要組成部分，對表皮的結構功能有重要的作用[3， 4]。神經酰胺可以增強表皮屏障功能，同時具有抗皺的功效，在敏感肌修護化妝品中應用廣泛[5-7]。蜂毒肽是蜂毒的主要功能物質，是迄今為止人類所知的強抗炎活性的物質之一[8]，在化妝品中使用類蜂毒肽物質，可以起到很好的抑制炎癥和舒緩的作用。多聚脫氧核糖核苷酸（polydeoxyribonucleotide，PDRN）是一種分子量范圍在50-1500kDa的活性多聚核苷酸混合物，主要是從鱒魚和鮭魚的精子細胞中的DNA經嚴格純化過程提取而來，具有高安全性和穩定性[9]。PDRN能夠激活腺苷受體A2A并產生有助于DNA合成的核苷酸，因而具有組織修復、傷口愈合和抗衰老的作用[9， 10]。它被廣泛應用于個人護理品、水光產品和皮膚填充劑中。

本研究以一款含有神經酰胺，類蜂毒肽成分及PDRN的修護抗皺護膚精華為研究對象，采用體外皮膚模型和人體功效測試相結合的方式，對該護膚精華進行多維度的功效評估研究。

Part 1實驗部分

1.1 主要材料、試劑與儀器

測試樣品：含有神經酰胺、類蜂毒肽成分及PDRN的修護抗皺護膚精華，西安博鴻生物技術有限公司提供。

3D表皮皮膚模型（EpiKutis?）、EpiGrowth培養液，博溪生物；磷酸鹽緩沖液PBS，索萊寶；維生素C（VC）、十二烷基硫酸鈉（sodium lauryl sulfate，SLS），美國Sigma公司；IL-1α ELISA試劑盒，Abcam公司；地塞米松，中檢所；PGE2 ELISA試劑盒，ENZO公司。

Corneometer CM825型皮膚水分含量測定儀、Tewameter TM Hex型皮膚水分流失測定儀、Cutometer dual MPA580型皮膚彈性測定儀，德國CK；Primos CR型3D皮膚成像系統、VISIA CR型面部圖像分析儀，美國Canfield；150I型CO2培養箱，美國Thermo；SW-CJ-1F型超凈工作臺，蘇凈安泰；Epoch型酶標儀，美國BioTek。

1.2 實驗部分

1.2.1 3D表皮皮膚模型炎癥因子測試

將3D表皮皮膚模型轉移到添加0.9mL表皮模型溶液的6孔板中，分為空白對照組（BC）、陰性對照組（NC）、陽性對照組（PC）和樣品組。BC組不作處理，其余組別的模型表面添加25μL 0.1%的SLS溶液，孵育30min。孵育結束后，NC組液下添加相應濃度的工作液，PC組和樣品組模型表面分別涂布地塞米松和待測樣品，于37℃、5%CO2培養箱中孵育24h。孵育結束后，用PBS溶液清洗模型表面殘留的受試物。收集模型培養液于離心管中，將ELISA檢測的樣品置于-80℃冰箱冷凍保存，根據ELISA試劑盒的操作說明書進行IL-1α、PGE2的含量檢測。

1.2.2人體功效測試

1.2.2.1 受試者篩選

按照以下納入排除標準，篩選入組32名中國健康敏感皮膚女性受試者。

納入標準：18歲-60歲；自認為面部皮膚為敏感肌者，面部皮膚有泛紅、緊繃、灼熱、發癢、刺痛等不適感；自認為面部皮膚松弛、無彈性者；面部泛紅等級3-6級；隨機一側外眼角皺紋等級3-6級；隨機一側臉頰區域皮膚水分含量＜60 a.u.；隨機一側臉頰區域經皮水分流失率>15 g/m2/h；自愿參與試驗并簽署知情同意書。

排除標準：測試部位患有皮膚疾病者；自述處于懷孕期、哺乳期；在參加測試前3個月內接收過皮膚治療或者免疫抑制劑治療的受試者；其他研究者判斷為不適合參與者。

1.2.2.2 產品使用及測試要求

受試者每天早晚潔面后，取適量測試產品均勻涂抹于面部，按摩至吸收，連續使用4周。測試期間受試者需停用其他同類功效護膚產品。

測試當天受試者使用實驗室提供潔面產品清潔面部并靜坐30min。測試全程在溫度為（21.0±1.0）℃，相對濕度為50%±10%的恒溫環境中進行。

1.2.2.3 測試方法

（1）使用Corneometer CM825和Tewameter TM Hex在使用前、使用后1周、4周分別檢測受試者皮膚角質層水分含量和經皮水分流失率（TEWL值），評估產品的保濕、修護功效。

（2）使用VISIA-CR在使用前、使用后1周、4周分別采集受試者正面圖像，通過軟件分析測試區域皮膚紅區a*值、紅區面積及占比，評估產品的舒緩功效。

（3）使用Primos CR在使用前、使用后4周分別采集受試者隨機一側外眼角區域圖像，并分析皺紋體積、皺紋面積、皺紋長度、皺紋深度，評估產品的抗皺功效。

（4）使用Cutometer MPA580在使用前、使用后4周分別檢測受試者皮膚彈性參數R2、R5、R7和皮膚緊致參數F4，評估產品的緊致功效。

（5）受試者在初次使用產品30s、4周分別填寫自評問卷，對使用產品后的各項效果進行5分制滿意度評價，以輔助評估產品的保濕、修護、舒緩、抗皺、緊致功效。

1.3 統計學分析

數據使用SPSS 28.0進行統計分析。數據以平均值±標準差形式表示。統計分析前對各參數進行正態分布檢驗，若測試數據符合正態分布，則采用配對T檢驗方法進行統計分析，否則采用兩個相關樣本秩和檢驗。顯著性水平為p＜0.05。

Part 2結果與討論

2.1基于3D表皮皮膚模型的舒緩VC刺激性測試結果

隨著“早C晚A”“刷酸煥膚”等護膚理念的盛行，消費者在使用了VC、VA等刺激性比較大的強功效性護膚產品后難免會出現刺痛、泛紅、脫皮等“猛藥翻車”問題。本測試采用表皮皮膚模型，對比10%VC+測試產品的樣品組與10%VC對炎癥因子表達的影響，來評價測試產品對VC刺激性的舒緩效果。

如圖1所示，10%VC組的IL-1α含量相較NC組有顯著上升（p＜0.001），PGE2含量同樣超過了NC組，說明單獨使用10%VC會促進炎癥因子的分泌，對皮膚具有明顯的刺激性。而添加了測試產品的樣品組的IL-1α含量相較10%VC組有顯著下降（p＜0.001），PGE2含量同樣有顯著下降（p＜0.01），說明測試產品能夠顯著抑制VC引起的炎癥因子的分泌，從而舒緩VC對皮膚帶來的刺激問題。

2.2人體功效測試結果

本次試驗共31例完成所有回訪，年齡在20歲至59歲，平均年齡為（36.87±12.52）歲。

2.2.1 角質層水分含量、TEWL值測試結果

TEWL值是表征皮膚屏障功能的關鍵指標，TEWL值越低，皮膚屏障功能越好。角質層水分減少，會使局部對刺激的敏感性增強，所以通過檢測皮膚角質層水分的變化，可間接反映皮膚屏障功能[11]。受試者使用產品前后各時間點的皮膚角質層水分含量和TEWL值測試結果如表1所示。與0周相比，皮膚角質層水分含量在1周和4周后均有顯著升高（p＜0.001），說明產品具有良好的保濕效果。與0周相比，TEWL值在1周和4周后均有顯著下降（p＜0.001）。以上結果說明產品具有修護皮膚屏障功能的作用。

2.2.2 皮膚紅區測試結果

皮膚紅區相關參數直接反映了真皮乳頭層的血紅素情況，從而間接反映皮膚的炎癥狀態[11，12]。紅區相關參數數值越低，產品抑制皮膚炎癥、改善皮膚泛紅、舒緩肌膚刺激狀態的效果越好。受試者使用產品前后各時間點的皮膚紅區a*值、紅區面積及占比的測試結果如表2所示。與0周相比，紅區a*值在1周后有顯著降低（p＜0.05），在4周后有更顯著的降低（p＜0.001）。與0周相比，紅區面積和紅區面積占比在1周、4周均有顯著降低（p＜0.001）。以上客觀測量結果說明產品具有良好的舒緩退紅效果。

圖2是19號和25號兩位受試者在使用產品前后的面部皮膚紅區圖像。從圖中可直觀看出，兩位受試者在使用產品1周和4周皮膚紅區情況有明顯的緩解現象。

2.2.3外眼角皮膚皺紋參數測試結果

受試者使用產品前后的外眼角皮膚皺紋參數測試結果如表3所示。與0周相比，皺紋體積、皺紋面積、皺紋長度在4周有顯著減少（p＜0.001），皺紋深度在4周也有顯著減少（p＜0.05）。以上客觀測量結果說明測試產品能夠改善皺紋問題，具有抗皺效果。

圖3是7號和11號兩位受試者在使用產品前后的一側外眼角皺紋的Primos圖像。從圖中可直觀看出，兩位受試者一側外眼角的皺紋程度有一定改善。

2.2.4皮膚彈性及緊致度測試結果

受試者使用產品前后的皮膚彈性及緊致度測試結果如表4所示。參數R2、R5、R7表征皮膚彈性，數值越大，皮膚彈性越好[13]；參數F4表征皮膚緊致度，數值越小，皮膚越緊致[14]。與0周相比，皮膚彈性參數R2、R5、R7在4周后均有顯著提升（p＜0.001），緊致度參數F4在4周后有顯著降低（p＜0.001）。以上客觀測量結果說明產品可以提升皮膚的彈性和緊致度，具有緊致功效。

2.2.5 受試者產品使用自我評價結果

在單次使用產品30s 后，100% 的受試者認同皮膚緊繃/ 灼熱/ 刺痛/ 發癢等問題得到即刻改善與舒緩，87% 的受試者認同皮膚即刻退紅，表明測試產品具有較好的即刻舒緩皮膚不適的效果。具體結果見表5。

Part 3結論

本研究采用體外皮膚模型和人體功效測試相結合的方式，對一款含有神經酰胺，類蜂毒肽和PDRN 等功效成分的修護抗皺護膚精華進行了一系列功效評估研究。

體外試驗結果表明：基于3D 表皮皮膚模型，測試產品能夠抑制炎癥因子（IL-1α、PGE2） 的表達，舒緩VC 對皮膚的刺激性。

人體功效測試結果表明，31 名敏感肌受試者在初次使用產品30s 后，100% 的受試者認同皮膚緊繃/ 灼熱/ 刺痛/發癢等問題得到即刻改善，87% 的受試者認同皮膚即刻退紅；使用產品4 周后，皮膚角質層水分含量、TEWL 值、皮膚紅區參數（a* 值、紅區面積及占比） 有顯著性改善，表明產品具有很好的保濕、修護皮膚屏障、舒緩皮膚刺激、改善退紅的效果。同時，受試者皮膚彈性（R2、R5、R7）、皮膚緊致度（F4）、外眼角皺紋（ 深度、體積、長度、面積） 均有顯著性改善，表明產品具有很好的緊致、抗皺效果。受試者在使用產品4 周后，對產品保濕、強韌屏障、減少敏感、舒緩、緊致和抗皺效果的滿意度均達到97% 及以上。

綜上所述，該精華產品具有良好的保濕、修護、舒緩、抗皺、緊致的效果。

作者介紹

溫燕佳，王長明：供職于博鴻生物技術（ 蘇州） 有限公司

吳黎明：供職于西安博和醫療科技有限公司

吳田田：供職于陜西佰傲再生醫學有限公司

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