丹參提取物的抑菌活性測定研究

丹參為多年生草本植物，是我國傳統(tǒng)常用中藥材。研究丹參提取物抑菌效果，能更好地篩選活性成分，以活性成分為模板或先導(dǎo)化合物，合成高效、低毒、低殘留的新型農(nóng)藥。

一、材料和方法

（一）供試植物與菌種

丹參為市場購買，晾干后用植物粉碎機(jī)粉碎備用。選取棉花黃萎病菌、小麥赤霉病菌、水稻紋枯病菌、蘋果炭疽病菌、小麥紋枯病菌為供試菌種，菌種用PDA斜面培養(yǎng)基保存在4℃以下備用。

（二）主要儀器設(shè)備

主要儀器設(shè)備有微波爐、循環(huán)水真空泵、恒溫水浴鍋、分析天平、凈化工作臺、高壓滅菌鍋、植物粉碎機(jī)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、智能光照培養(yǎng)箱等。

（三）PDA培養(yǎng)基制備

馬鈴薯稱取200 g，洗凈去皮挖芽眼切成小塊，加水煮沸30 min，雙層紗布過濾，再加12 g葡萄糖和12 g瓊脂，加熱充分溶解并定容至1000 mL。將培養(yǎng)基分裝到250 mL錐形瓶，在0.15～0.20 MPa、121～130℃滅菌20 min后備用。

（四）提取方法

將440 g丹參用95%乙醇溶劑，按照材料和溶劑1：5（W：V）的比例浸泡3 d，浸泡液用抽濾瓶減壓抽濾得到澄清的粗提液，減壓旋轉(zhuǎn)濃縮得到丹參乙醇浸膏。浸泡3 d提取1次，共重復(fù)提取5次。

（五）抑菌活性測定方法

將丹參提取物配成10 g·mL-1（干樣）的丙酮溶液，再配置一定量的1 g·mL-1（干樣）的樣品藥液。在凈化工作臺上用滅過菌的移液槍，在每個已滅菌的培養(yǎng)皿中先放入1 mL丹參提取物樣品藥液，再倒入約9 mL無菌的PDA培養(yǎng)基混合均勻，制成帶藥平板。以丙酮溶劑作為對照，每個處理重復(fù)3次。從培養(yǎng)好的供試病原真菌菌落邊緣用打孔器打取直徑4 mm的菌餅，用消毒的接種針將其倒扣在制好的平板中央，使菌絲與新鮮的培養(yǎng)基充分接觸，再將接種好的平板放置在25℃光照條件下的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3 d。用十字交叉法測量各培養(yǎng)皿中的菌落直徑，以其平均值代表菌落直徑，每個處理重復(fù)3次，以3次重復(fù)測得的菌落直徑的平均值計算抑菌率。計算公式如下：

二、結(jié)果和分析

記錄3天、4天、5天、6天后的觀察結(jié)果（水稻紋枯病菌的菌落直徑從接種96 h后開始測量，“-”表示未測量），如表1、表2、表3、表4所示。

由以上結(jié)果可知，丹參提取物在3天后對小麥赤霉病菌和小麥紋枯病菌的抑制率都超過50%，對棉花黃萎病菌和蘋果炭疽病菌的抑制率也都在20%左右。從表1、表2、表3、表4可以看出，提取液中的活性成分對小麥赤霉病菌、水稻紋枯病菌、蘋果炭疽病菌、小麥紋枯病菌的抑制作用隨時間延長而降低，對水稻紋枯病菌的抑制作用在6天后的抑制率為0。從圖1可以看出，丹參提取物對水稻紋枯病菌的抑制作用變化最為劇烈，對棉花黃萎病菌的抑制作用變化最緩慢。

三、結(jié)論與討論

試驗結(jié)果表明，丹參95%乙醇提取物對五種病原菌都有抑制作用，對小麥赤霉病菌的抑制作用最強(qiáng)，抑菌率為65.54%，但隨著時間延長抑制作用顯著下降；對小麥紋枯病菌的抑制率在50%以上，隨著時間延長抑制作用有所下降；對棉花黃萎病菌和蘋果炭疽病菌的抑制率在20%左右，抑制率隨時間的變化緩慢下降，在持效期方面效果較好。

目前，開發(fā)生物活性高、對非靶標(biāo)生物安全、環(huán)境相容性好的生物合成農(nóng)藥已成為農(nóng)藥發(fā)展的新趨勢。從植物中發(fā)現(xiàn)并分離出有抑菌活性的物質(zhì)，是今后農(nóng)藥的重要發(fā)展途徑，有必要加大研究力度。

作者簡介：劉術(shù)昆（1988—），男，河南新縣人，本科，助理農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣工作。

（責(zé)任編輯" "劉沛儒）