海南黑山羊ATG16L2基因啟動子區多態性研究

摘 要： 旨在研究海南黑山羊ATG16L2基因啟動子區的結構特征及其遺傳分布情況，為進一步探索該基因的表達調控機制及功能提供理論依據。本研究以200頭海南黑山羊為研究對象，構建DNA混池，采用Sanger法測序對海南黑山羊ATG16L2基因啟動子區的多態性進行初篩，應用PCR-RFLP技術對200頭海南黑山羊個體進行基因型鑒定。對篩選到的SNP位點進行連鎖不平衡分析，構建單倍型。利用生物信息學方法分析SNP位點對海南黑山羊ATG16L2基因表達的影響。在海南黑山羊ATG16L2基因啟動子區共檢測到3個SNPs位點，分別為SNP1（g.30667970T＞C）、SNP2（g.30668540T＞C）和SNP3（g.30668664C＞T），且彼此連鎖。SNP1和SNP2位點均表現為中度多態性，SNP3位點表現為低度多態性，且符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05）。單倍型分析結果顯示，H1、H2、H3和H4單倍型頻率分別為0.321、0.304、0.271和0.097，且H1（CGC）為優勢單倍型。生物信息學分析顯示，山羊ATG16L2基因共預測到3個啟動子和4個CpG島區域；存在2個重復元件LINE2（-1 989～-1 826 bp、-562～-426 bp）、hAT-Charlie （-1 804～-1 511 bp）以及5個CCAAT-Box、13個CAAT-Box、10個CGCG-Box、11個GATA-Box和2個TATA-Box。綜合多種在線軟件預測發現，上述SNPs可能通過影響ATG16L2基因的啟動子區的順式作用元件，從而影響海南黑山羊ATG16L2基因的轉錄表達。本研究在海南黑山羊ATG16L2基因啟動子序列中發現3個SNPs位點，其中SNP1和SNP2表現為中度多態性，SNP3表現為低度多態性，并預測這些SNPs可能影響轉錄因子結合，從而調控基因表達，為進一步探究ATG16L2基因功能及其調控機制提供了理論依據。

關鍵詞： 海南黑山羊；ATG16L2基因；啟動子；多態性；生物信息學

中圖分類號： S827.2

文獻標志碼：A

文章編號：0366-6964（2024）11-4980-12

收稿日期：2024-05-14

基金項目：國家自然科學基金青年基金項目（32202631）；國家現代農業產業技術體系項目（財政部和農業農村部-CARS38）

作者簡介：王 歡（1997-），女，河南南陽人，碩士生，主要從事動物遺傳育種與繁殖研究，E-mail：772101737@qq.com

*通信作者：陳 思，主要從事反芻動物遺傳免疫學研究，E-mail：chensi.ruth@hotmail.com

Polymorphism Analysis of the ATG16L2 Gene Promoter Region in Hainan Black Goat

WANG" Huan1， CHEN" Taoyu1， WU" Hui2， MENG" Yong1， LI" Shiyuan1， QIAN" Hejie1， NIU" Shihua1， MAN" Churiga1， CHEN" Qiaoling1， GAO" Hongyan1， DU" Li1， WANG" Fengyang1， CHEN" Si1*

（1.Key Laboratory of Tropical Animal Reproduction amp; Breeding and Epidemic Disease

Research of Hainan Province， College of Tropical Agriculture and Forestry， Hainan University，

Haikou 570228，" China;

2.Animal Husbandry and Veterinary Workstation of Barkol Kazak

Autonomous County， Hami City， Xinjiang

Uygur Autonomous Region， Hami 839202，" China）

Abstract：" The study aimed to investigate the structural characteristics and genetic distribution of the ATG16L2 gene promoter region in Hainan Black goat， providing a theoretical basis for further exploring the expression regulation mechanism and function of this gene. This study focused on 200 Hainan Black goats， constructing a DNA pooling strategy. The polymorphism of the ATG16L2 gene promoter region in Hainan Black goats was initially screened using Sanger sequencing. PCR-RFLP technology was applied for genotyping the 200 Hainan Black goats. Linkage disequilibrium analysis was performed on the identified SNP loci to construct haplotypes. Bioinformatics methods were utilized to analyze the impact of SNP loci on the expression of the ATG16L2 gene in Hainan Black goats. The promoter region of the ATG16L2 gene in Hainan Black goats contained 3 linked single nucleotide polymorphisms （SNPs）： SNP1 （g.30667970T＞C）， SNP2 （g.30668540T＞C）， and SNP3 （g.30668664C＞T）. Both SNP1 and SNP2 exhibited moderate levels of polymorphism， whereas SNP3 showed low levels. Notably， all three SNPs conformed to the principles of Hardy-Weinberg equilibrium（P＞0.05）. The haplotype analysis revealed that the frequencies of haplotype H1， H2， H3， and H4 were 0.321， 0.304， 0.271， and 0.097， respectively， with H1 （CGC） being the predominant haplotype.The bioinformatics analysis results showed that there were 3 promoters， 4 CpG island regions， 2 repetitive elements LINE2 （-1 989--1 826 bp， -562--426 bp）， hAT-Charlie （-1 804--1 511 bp）， and 5 CCAAT-Box， 13 CAAT-Box， 10 CGCG-Box， 11 GATA-Box and 2 TATA-Box of the ATG16L2 gene in Hainan Black goat. The integrated prediction from various online tools suggests that the above SNPs may affect the expression regulation of the ATG16L2 gene in Hainan Black goats by influencing the changes in transcription factors in the gene’s promoter region. In this study， 3 SNP loci were identified in the promoter sequence of the ATG16L2 gene in Hainan Black goats. Among these， SNP1 and SNP2 exhibited moderate polymorphism， while SNP3 showed low polymorphism. It is predicted that these SNPs may influence transcription factor binding， thereby regulating gene expression. This provides a theoretical basis for further exploration of the function and regulatory mechanisms of the ATG16L2 gene.

Key words： Hainan Black goat; ATG16L2 gene; promoter; polymorphism; bioinformatics

*Corresponding author：CHEN Si， E-mail： chensi.ruth@hotmail.com

自噬是一種保守的細胞降解途徑，由自噬相關基因（autophagy-related genes， ATG）編碼的蛋白介導，它在維持機體內環境穩態［1］、抵抗應激反應［2］、調節先天性免疫反應［3］、緩解炎癥反應［4］方面起著至關重要的作用，是機體抵抗病原體感染的重要防御機制。ATG16L2是自噬相關蛋白16-1（autophagy-related 16-like 1， ATG16L1）的旁系同源物，是自噬體形成的另一種關鍵自噬蛋白，它能夠與其他蛋白如ATG5、ATG16L1等協同參與巨自噬、自噬小體組裝、線粒體自噬等生物學過程。海南黑山羊是中國熱帶島嶼上的山羊品種，也是海南獨特的地方品種［5］。海南黑山羊經過長期自然選擇，逐步形成了耐粗飼、抗病力強、耐高溫高濕的品種特性，并且具備肉質鮮美、無膻味、營養豐富、肉質鮮嫩的特點［6-7］。Wang等［8］通過細胞水平和活體水平研究ATG16L2基因對NLRP3炎癥小體的影響，發現ATG16L2在調控異常炎癥反應中存在潛在的作用。Mo等［9］通過對中國人群ATG16L2 rs11235604多態性與類風濕性關節炎的遺傳關聯分析發現，ATG16L2 rs11235604與類風濕性關節炎（RA）的發病率相關。Luu等［10］研究發現，ATG16L2 rs11235667與炎癥性腸病密切相關。Ma等［11］研究結果表明，ATG16L2是中國人群中克羅恩病的易感基因，rs11235604 SNP與ATG16L2表達下調顯著相關。Molineros等［12］通過薈萃分析發現，ATG16L2基因的rs11235604與系統性紅斑狼瘡（SLE）存在關聯。上述研究說明，ATG16L2的多態性與多種免疫相關疾病的發生發展密切相關。

啟動子是位于基因轉錄起始位點上游的特定DNA片段，在調控基因表達過程中發揮重要作用。啟動子通過染色質重塑促進核小體解聚、調節轉錄起始復合物形成、與特定轉錄因子相互作用以及經歷表觀遺傳修飾等機制調控基因轉錄活性。深入研究啟動子功能對于了解生物的生長發育、防御系統、疾病等都有非常重要的意義。多項研究揭示啟動子區域的多態性可能通過改變啟動子活性［13-15］和轉錄因子［16-17］結合等來影響基因表達［18］。單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphism， SNP）是繼限制性片段長度多態性和微衛星多態性之后的第三代遺傳標記，目前檢測分析SNP的方法包括，PCR擴增與Sanger測序［19-21］，此方法準確性高，適用于多種規模的樣本；限制性酶切分析（RFLP）［22-23］方法簡單易行且成本低；基于芯片的SNP檢測［24］方法只能檢測芯片上存在的SNPs，無法檢測新的SNPs位點；全基因組測序方法［25］雖然節省時間且能夠獲得高通量的SNPs信息，但存在成本較高的問題。

綜上所述，大多數有關ATG16L2多態性的研究主要集中于人類相關疾病和基因編碼區，目前尚未有涉及山羊ATG16L2基因啟動子多態性的研究報道。本試驗采用限制性片段長度多態性聚合酶鏈反應（PCR-RFLP）技術和Sanger法測序，檢測200頭海南黑山羊ATG16L2基因啟動子區域的單核苷酸多態（single nucleotide polymorphisms， SNPs）位點，并利用生物信息學分析方法預測該區域的核心啟動子區、CpG島、轉錄因子結合域，以期為進一步研究ATG16L2基因的表達調控機制及其在機體自噬的調控機制提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗樣品

于三亞、昌江、定安等地采集200頭海南黑山羊的血樣，保存至5 mL的EDTA-K2抗凝采血管中。通過血液基因組提取試劑盒提取血樣中基因組DNA，置于－20 ℃保存。超微量分光光度計對提取的DNA濃度進行檢測，每個樣品的濃度不低于70 ng·μL-1；以10 g·L-1瓊脂糖凝膠電泳對提取DNA質量進行檢測，條帶單一明亮整齊。

1.2 試驗材料

試驗試劑：DNA提取試劑盒、2000 DNA Marker、2×Taq PCR Master Mix均購自天根生化科技（北京）有限公司；2×Es Taq PCR Master Mix購自康為世紀生物科技股份有限公司；6×Loading Buffer 購自TaKaRa公司；DNA 分子量標準Marker（50～1 031 bp）購自生工生物工程（上海）股份有限公司；50 bp DNA Ladder購自索萊寶生物科技有限公司；Pvu Ⅱ和BamH Ⅰ 內切酶購自Thermo Fisher Scientific；Nde Ⅰ內切酶購自上海圣爾生物科技有限公司；紅細胞裂解液均購自Biosharp；引物合成及測序由生工生物工程（上海）股份有限公司完成。

1.3 試驗方法

1.3.1 SNP位點鑒定

以NCBI數據庫（登錄號：NC_030822.1）為參考序列，利用Primer 5.0設計7對特異性引物（表1）。隨機選取73頭羊的DNA樣品，各取1 μL構建DNA混池模板，－20℃保存。PCR擴增總體積為50 μL，包括25 μL 2×Taq PCR Master Mix、21 μL ddH2O、2 μL DNA混池模板及上、下游引物各1 μL。擴增程序為95℃預變性5min；95℃ 30s；適宜溫度退火30s，72℃延伸（根據目的片段長度設不同延伸時間），35個循環；72℃終延伸5min。PCR產物經10 g·L-1瓊脂糖凝膠檢測合格后測序，測序結果用DNAMAN軟件對擴增序列進行比對，鑒定SNP位點。

1.3.2 基因分型

根據Sanger法測序結果，設計突變引物（表1），用于在SNP位點附近引入限制性內切酶位點，具體設計方法參照文獻［26］。采用PCR-RFLP方法對海南黑山羊個體的基因型進行分型鑒定。酶切總體系10.0 μL，含PCR擴增產物7.0 μL，10×Buffer 1.0 μL，內切酶0.5 μL，ddH2O 1.5 μL。

1.3.3 進化樹構建

從NCBI數據庫（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov）中檢索并下載19個物種的ATG16L2基因序列，再從海南黑山羊全基因組測序信息中提取ATG16L2基因序列。用ClustalW（codon）方法對20條基因CDS區序列進行系統發育分析。利用MEGA 11軟件采用極大似然法構建系統發育樹。模擬1 000次重復抽樣中獲得Bootstrap值。

1.3.4 山羊ATG16L2基因啟動子區的生物信息學分析

利用NCBI數據庫搜索山羊ATG16L2（NCBI登錄號：NC_030822.1）基因組DNA信息，并結合NCBI公布的ATG16L2基因的轉錄起始位點（TSS），選取山羊ATG16L2基因5′ UTR上游啟動子區2 000 bp （Chr15∶30666994-30669217）作為研究的序列。使用Promoter 2.0在線軟件對啟動子的序列特征進行分析，評分設定要求：評分lt;0.5，結果被忽略；0.5≤評分lt;0.8，表示低可能性預測；0.8≤評分lt;1.0，表示中等可能性預測；評分≥1.0，表示高度可能性預測。采用在線軟件JASPAR和AnimalTFDB4.0對啟動子區進行轉錄因子結合位點的預測。同時使用MethPrimer在線軟件對啟動子區進行CpG島預測，設定參數為CpG島長度gt;100 bp；GC含量gt;50%；CpG觀察值（0bs）/預測值（Exp）gt;0.6。具體的生物信息學軟件信息見表2。

1.3.5 數據分析

利用Excel 2022統計PCR-RFLP基因分型結果，計算ATG16L2基因不同基因型在海南黑山羊群體中的等位基因頻率和基因型頻率；通過POPGENE v1.32計算基因期望雜合度（heterozygosity，He）、觀測純合度（homozygosity，Ho）、有效等位基因數（effective number of alleles，Ne）和多態信息含量（polymorphism information content，PIC），并進行Hardy-Weinberg平衡（HWE）的χ2檢驗，用于評估理論基因型數與觀測基因型數之間的偏差；通過Haploview計算LD系數（D’）和相關系數（r2），構建單倍體模型，舍棄單倍型頻率小于0.01的數據模型。

2 結 果

2.1 ATG16L2基因系統進化樹分析

為了解不同物種中潛在的進化關系，采用MEGA 11軟件對20個物種的ATG16L2基因編碼序列構建系統進化樹（圖1），并應用DNAMAN軟件對序列進行相似性分析（表3）。結果顯示，山羊與反芻動物（綿羊、牛）的進化距離最小，說明親緣關系最近。

2.2 ATG16L2基因啟動子序列的特征性分析

通過NCBI數據庫分別下載以轉錄起始位點為“0”的-2 000～+224 bp間的山羊和綿羊ATG16L2基因啟動子序列。利用在線軟件Promoter 2.0對山羊和綿羊ATG16L2基因可能的啟動子進行預測，結果顯示，在山羊中存在3個啟動子，分別位于第-1 401、-901、-401 bp處；在綿羊中也存在3個啟動子，分別位于第-501、-1 001、-1 501 bp處。用RepeatMasker軟件來預測序列的重復元件，發現在山羊序列存在兩個重復元件LINE2（-1 989～-1 826 bp、-562～-426 bp）、hAT-Charlie（-1 804～-1 511 bp）；在綿羊序列中也存在兩個重復元件LINE2（-1 990～-1 912 bp）、hAT-Charlie（-1 908～-1 601 bp）。利用NARO DNA Bank預測發現，山羊ATG16L2基因啟動子區域存在5個CCAAT-Box、13個CAAT-Box、10個CGCG-Box、11個GATA-Box和2個TATA-Box；綿羊TG16L2基因啟動子區域存在2個ACGTC-Box、10個CAAT-Box、4個CCAAT-Box、13個CGCG-Box、10個GATA-Box和3個TATA-Box。通過MethPrimer網站對ATG16L2基因啟動子區的CpG島進行分析，結果顯示（圖2），山羊序列中存在4個CpG島，長度分別約為106、105、164和197 bp，分別位于第 -567～-462 bp、第-412～-308 bp、第 -296～-133 bp和第 -51～+145 bp處；綿羊序列中存在2個CpG島，長度分別約為320和298 bp，分別位于第 -499～-180 bp和第-132～+165 bp處。其中，發現在第 -412～-308 bp的CpG島中存在一個核心啟動子。利用JASPAR對此啟動子區域進行轉錄因子預測，發現在此區域內存在兩個轉錄因子（圖2），分別為GATA2和YY1。運用DNAMAN軟件和ClustalW網站對山羊和綿羊啟動子序列進行比對，結果發現，山羊與綿羊序列的一致性高達90.80%，山羊與綿羊ATG16L2基因啟動子序列存在32處差異（圖3）。其中，在綿羊 -2 000～+132區間內，綿羊序列比山羊序列缺6個堿基。

2.3 山羊ATG16L2基因啟動子區SNPs位點鑒定及基因分型分析

為了篩選山羊ATG16L2基因啟動子區中可能存在的SNP位點，以DNA混池為模板進行PCR擴增，測序分析結果表明（圖4），在ATG16L2基因的啟動子區存在3個SNPs位點，分別為SNP1（g.30667970T＞C）、SNP2（g.30668540T＞C）、SNP3（g.30668664C＞T）。為了分析山羊群體中3個突變位點的基因型分型情況，利用PCR-RFLP技術在200只海南黑山羊群體中進行分型分析。SNP1（g.30667970T＞C）位點是Pvu Ⅱ酶的酶切位點，該酶識別序列為CAG/CTG。若該位點存在T突變為C，則Pvu Ⅱ酶能識別該位點，也能對該位點進行酶切；相反則不能識別且不能酶切。利用這一原理，將PCR產物進行RFLP檢測后出現了3種帶型，結合測序判定其片段大小分別是：TT型為294 bp，CC型為275 bp和19 bp，CT型為294、275和19 bp，其中19 bp的條帶過小，經3%的瓊脂糖凝膠電泳后不顯示該條帶（圖5A）。SNP2（g.30668540T＞C）位點上G為等位基因時，存在BamH Ⅰ酶切位點，突變前基因型為TT，即圖5B中的198 bp片段；GG基因型為純合突變位點，經BamH Ⅰ酶切后分為179和19 bp；CT基因型為其雜合突變位點，經BamH Ⅰ酶酶切后片段大小為198、179和19 bp。同上，SNP3（g.30668664C＞T）位點存在Nde Ⅰ酶切位點，PCR產物經酶切后出現了兩種帶型，片段大小分別是：CC型為317 bp，CT型為317、292和25 bp，其中25 bp沒有在圖中顯示（圖5C）。

2.4 海南黑山羊ATG16L2基因啟動子區SNPs位點種群遺傳多樣性分析

在海南黑山羊群體內，SNP1位點存在3種基因型，即TT、TC和CC，其中優勢等位基因為T，其基因頻率為0.575（表4），TC的基因型頻率高于其他基因型；SNP2位點也存在3種基因型，分別為GG、TG和TT，G為優勢等位基因，等位基因頻率為0.723（表4），GG為優勢基因型；SNP3位點的基因分型結果表明，等位基因C的頻率在樣本群體中占主導地位，CC基因型是優勢基因型。由于0.25≤PIC＜0.5，所以SNP1和SNP2位點在海南黑山羊群體中均表現為中度多態性；由于PIC＜0.25，SNP3位點在海南黑山羊群體中表現為低度多態性。χ2檢驗結果顯示，海南黑山羊群體中3個SNPs位點的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律（P＞0.05）。

2.5 海南黑山羊ATG16L2基因啟動子區SNPs位點連鎖不平衡及單倍型分析

海南黑山羊ATG16L2基因啟動子區3個SNPs位點連鎖不平衡分析結果表明，SNP1（g.30667970T＞C）、SNP2（g.30668540T＞C）和SNP3（g.30668664C＞T）3個SNPs位點之間存在強連鎖不平衡（圖6），各位點間的D’和相關系數（r2）詳見表5。基于連鎖不平衡分析結果構建存在強連鎖SNP位點間的單倍型，且過濾掉頻率小于0.01的單倍型，結果共形成4種不同的單倍型（表6），其中，H3（TTC）單倍型為突變前基因型，頻率為0.271，H1（CGC）單倍型頻率最高（0.321）為優勢單倍型，H4（CGT）單倍型頻率最低（0.097）。以此評估海南黑山羊群體中各單倍型的分布情況。

2.6 海南黑山羊ATG16L2基因啟動子區SNPs位點功能分析

利用2個在線軟件對山羊ATG16L2基因啟動子區轉錄因子的結合位點進行預測，發現啟動子區上包含多個潛在的轉錄因子結合位點。其中在SNP位點附近，選取被2種軟件共同預測到的且評分在10以上的轉錄因子發現，SNP2和SNP3在突變前后均未預測到相同的轉錄因子，SNP1突變以后會產生新的轉錄因子SNAI2、MYOD1和FIGLA，如圖7所示。說明，這些SNPs可能通過干擾轉錄因子（TF）與ATG16L2基因啟動子的結合來改變ATG16L2基因啟動子的活性進而影響ATG16L2基因的轉錄水平。

3 討 論

ATG16L2作為一個自噬相關基因，是細胞自噬過程中的一個調節器，在自身免疫性疾病和抵御病原體入侵［27］中發揮作用，但對其基因結構功能的了解目前仍知之甚少。啟動子是結構基因的一個重要組成部分，在基因的表達過程中，轉錄起始階段最為關鍵，這一階段主要發生RNA聚合酶與啟動子的相互作用，啟動子結構改變會影響其與RNA聚合酶的親和力、啟動子序列的變異，直接影響基因的表達水平［28］。據報道，位于亮氨酸氨基肽酶3（leucine aminopeptidase 3， LAP3）基因啟動子區的2個SNPs（rs720373055：Tgt;C和rs715189731：Agt;G）通過產生新的轉錄因子鋅指轉錄因子26（zinc finger protein 26， ZF26），從而調控LAP3基因的表達［19］。Luo等［29］在豬HHEX的啟動子區發現了一個新的單倍型，該單倍型由2個SNPs rs80901185 （Tgt;C）和rs80934526 （Agt;G）組成，這個單倍型可能通過影響轉錄因子的結合，進而改變HHEX基因的啟動子活性。因此，本研究通過Sanger測序法在海南黑山羊ATG16L2基因啟動子區鑒定得到3個SNPs。采用PCR-RFLP方法對SNPs位點進行基因分型分析發現，SNP1（g.30667970T＞C）和SNP2（g.30668540T＞C）均存在3種基因型，但SNP3（g.30668664C＞T）只存在2種基因型，猜測可能在海南黑山羊群體中存在TT純合子基因型致死現象，有待進一步證實。其中2個SNPs位點在海南黑山羊群體中均表現為中度多態性（0.25≤PIC＜0.5），1個SNPs位點表現為低多態性（PIC＜0.25），處于Hardy-Weinberg平衡狀態，說明這3個SNPs位點的基因型在海南黑山羊群體中廣泛存在，具有較豐富的遺傳多樣性。下一步將探討該SNP位點是否調控基因表達，進而對機體自噬產生影響。

基因表達既受啟動子區SNP的影響，也可能受到啟動子區甲基化的調控。而DNA甲基化作為基因啟動子區一種常見的分子調控模式，能通過抑制轉錄過程調控基因表達［30］。轉錄因子與RNA聚合酶Ⅱ結合形成轉錄起始復合物參與基因的轉錄調控。本研究對山羊ATG16L2基因核心啟動子和CpG島預測發現，在山羊群體中存在4個甲基化島，且-401 bp處的核心啟動子存在于其中一個CpG島內，對該位點附近進行轉錄因子預測發現了GATA2和YY1轉錄因子。GATA結合蛋白（GATA binding proteins， GATAS）是一類具有2個保守鋅指結構的轉錄因子，因能特異性結合A/T（GATA）A/G序列而得名［31］。GATA2是GATAs家族成員之一，在胚胎發育［32］、造血系統［33］、調節炎癥反應［34］和免疫系統［35］中發揮重要作用。也有研究發現，GATA2突變導致其DNA結合能力喪失，可能導致位點的異常甲基化［36］。YY1是一種C2H2鋅指核轉錄因子（TF），具有高度進化保守性，屬于GLI-Krüppel蛋白家族［37］。在哺乳動物細胞中，YY1通常占據增強子-啟動子相互作用的位點，偶爾也占據絕緣子相互作用的位點［38］，且研究發現大約10%的哺乳動物基因受該轉錄因子調控［39］。因此YY1對基因的調控具有重要意義。甲基化是否會影響這兩個轉錄因子對海南黑山羊ATG16L2的轉錄還需進一步驗證。

4 結 論

在海南黑山羊ATG16L2基因啟動子序列共檢測到3個SNPs位點，其中，SNP1和SNP2位點在海南黑山羊群體中均表現為中度多態性，SNP3位點在海南黑山羊群體中表現為低度多態性，且處于Hardy-Weinberg平衡狀態。生物信息學預測得到部分SNPs位點可能導致轉錄因子以及轉錄因子結合位點的改變，從而導致基因表達的改變。本研究結果為進一步分析ATG16L2基因表達調控奠定基礎。

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（編輯 郭云雁）