漢黃芩素調(diào)節(jié)Hippo/YAP信號通路對肝硬化大鼠肝纖維化的影響

〔摘要〕 目的 初步探討漢黃芩素（Wogonin， Wog）調(diào)節(jié)河馬（Hippo）/Yes-相關(guān)蛋白（Yes associated protein， YAP）信號通路對肝硬化大鼠肝纖維化的影響。方法 將大鼠分為空白對照組（腹腔注射等量生理鹽水+灌胃等量生理鹽水）、模型組（腹腔注射等量生理鹽水+灌胃等量生理鹽水）、陽性對照組（0.8 g/kg復(fù)方鱉甲軟肝片溶液灌胃）和Wog低、中、高劑量組（7、14、28 mg/kg Wog腹腔注射），每組12只。除空白對照組外，其余各組腹腔注射四氯化碳溶液構(gòu)建肝硬化模型。所有大鼠造模后給藥干預(yù)，連續(xù)4周。檢測大鼠血清肝功能指標(biāo)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase， AST）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase， ALT）；ELISA法檢測血清纖維化指標(biāo)Ⅲ型前膠原（type Ⅲ procollagen， PCⅢ）、透明質(zhì)酸（hyaluronic acid hyaluronan， HA）、層粘連蛋白（laminin， LN）；HE、Masson及免疫組織化學(xué)染色法觀察肝硬化大鼠肝纖維化程度；Ishak評分判斷肝組織纖維化程度，分析膠原體積分?jǐn)?shù)（collagen volume fraction， CVF）及Ⅰ型膠原（collagen-Ⅰ，COL-Ⅰ）和Ⅲ型膠原（collagen-Ⅲ，COL-Ⅲ）陽性表達(dá)；Western blot檢測肝組織中α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1， TGF-β1）及Hippo/YAP信號通路蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 與空白對照組比較，模型組AST、ALT、PCⅢ、HA、LN、Ishak評分、CVF、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1表達(dá)升高（Plt;0.05），p-大腫瘤抑制因子1（large tumor suppressor gene 1，LATS1）/LATS1、p-YAP/YAP表達(dá)降低（Plt;0.05）；與模型組比較，Wog低、中、高劑量組及陽性對照組AST、ALT、PCⅢ、HA、LN、Ishak評分、CVF、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1表達(dá)降低（Plt;0.05），p-LATS1/LATS1、p-YAP/YAP表達(dá)升高（Plt;0.05）。Wog各劑量組AST、ALT、PCⅢ、HA、LN、Ishak評分、CVF、COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1水平均隨劑量升高而降低（Plt;0.05）；p-LATS1/LATS1、p-YAP/YAP水平隨劑量升高而升高（Plt;0.05）。結(jié)論 Wog可能通過抑制Hippo/YAP信號通路的激活，改善肝硬化大鼠肝纖維化。

〔關(guān)鍵詞〕 肝硬化；肝纖維化；漢黃芩素；Hippo信號通路；Yes-相關(guān)蛋白

〔中圖分類號〕R285.5" " " " "〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A" " " " " 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.07.003

Effects of Wogonin on liver fibrosis in cirrhotic rats by regulating the Hippo/YAP signaling pathway

YANG Maohui1， RAN Hengquan2， WANG Hebin1*， LIU Deqin1， LI Jin1

1. Department of Hepatobiliary Surgery， The Hospital of Panzhihua University， Panzhihua， Sichuan 617000， China;

2. Department of Hepatobiliary Surgery， The Central Hospital of Panzhihua， Panzhihua， Sichuan 617000， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To investigate the effects of Wogonin （Wog） on liver fibrosis in cirrhotic rats by regulating the Hippo/Yes associated protein （YAP） signaling pathway. Methods The rats were divided into blank control （with intraperitoneal injection of equal volume of saline solution + intragastric administration of equal volume of saline solution）， model （with intraperitoneal injection of equal volume of saline solution + intragastric administration of equal volume of saline solution）， positive control （with intragastric administration of 0.8 g/kg Compound Biejia Ruangan Tablets solution）， low-， medium-， and high-dose （with intraperitoneal injection of 7， 14， 28 mg/kg Wog） Wog groups， with 12 rats in each group. Except for blank control group， the other groups were injected intraperitoneally with carbon tetrachloride in aqueous solution to construct cirrhosis models. After modeling， all rats were treated with corresponding drugs， for consecutive 4 weeks. The serum liver function indicators of rats including alanine aminotransferase （AST） and aspartate aminotransferase （ALT） were measured; ELISA was used to test serum fibrosis indicators including type Ⅲ procollagen （PCⅢ）， hyaluronic acid （HA）， and laminin （LN）; Hatmatoxylin-eosin （HE）， Masson and immunohistochemical staining were performed to observe the degree of liver fibrosis in cirrhotic rats; Ishak score was used to determine the degree of liver tissue fibrosis， the collagen volume fraction （CVF）， and the positive expressions of collagen-I （COL-Ⅰ） and collagen-Ⅲ （COL-Ⅲ）; Western blot was used to determine the expression levels of α-smooth muscle actin （α-SMA）， transforming growth factor-β1 （TGF-β1）， and Hippo/YAP signaling pathway in liver tissue. Results Compared with blank control group， the expressions of AST， ALT， PCⅢ， HA， LN， Ishak score， CVF， COL-I， COL-Ⅲ， α-SMA， and TGF-β1 in model group were higher （Plt;0.05）， the expressions of phosphorylation （p）-large tumor suppressor gene 1 （LATS1）/LATS1 and p-YAP/YAP were lower （Plt;0.05）; compared with model group， the expressions of AST， ALT， PCⅢ， HA， LN， Ishak score， CVF COL-I， COL-Ⅲ， α-SMA， and TGF-β1 in low-， medium-， and high-dose Wog groups and positive control group were lower （Plt;0.05）， the expressions of p-LATS1/LATS1 and p-YAP/YAP were higher （Plt;0.05）. The levels of AST， ALT， PCⅢ， HA， LN， Ishak score， CVF， COL-Ⅰ， COL-Ⅲ， α-SMA and TGF-β1 in all dose Wog groups decreased with the increase of dose （Plt;0.05）. While the levels of p-LATS1/LATS1 and p-YAP/YAP increased with the dose increasing （Plt;0.05）. Conclusion Wog may improve liver fibrosis in cirrhotic rats by inhibiting the activation of Hippo/YAP signaling pathway.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 liver cirrhosis; liver fibrosis; Wogonin; Hippo signaling pathway; Yes-associated protein

肝硬化是由于肝臟疾病或特定疾病引起的長期反復(fù)損傷而導(dǎo)致肝臟經(jīng)歷緩慢瘢痕形成過程的疾病，其病理特征包括肝組織炎癥和壞死、肝臟前部纖維化，其中，肝纖維化是導(dǎo)致肝硬化甚至肝癌等肝臟疾病發(fā)生的重要因素[1]。治療肝硬化的理想策略包括預(yù)防纖維化、病因治療、肝硬化并發(fā)癥治療等[2]。目前，暫無批準(zhǔn)的抗纖維化或促再生藥物治療肝硬化，肝移植是終末期肝病最有效的治療選擇。然而，肝移植受到供體器官稀缺的限制，因此，急需尋找其他治療肝硬化的方法。漢黃芩素（Wogonin，Wog）具有抗炎、抗癌、抗病毒、抗血管生成、抗氧化和神經(jīng)保護等多種藥理活性[3]。Wog可通過抑制核因子κB、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1， TGF-β1）/Smad3通路改善腎臟炎癥和纖維化[4]。研究表明，Wog可通過調(diào)節(jié)肝星狀細(xì)胞的活化和凋亡減輕肝纖維化，可能是治療和預(yù)防肝纖維化的有效藥物[5]。研究發(fā)現(xiàn)，河馬（Hippo）途徑及下游其效應(yīng)物Yes-相關(guān)蛋白（Yes associated protein，YAP）是肝星狀細(xì)胞活化的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，抑制Hippo/YAP信號通路可減弱肝星狀細(xì)胞活化和肝纖維化[6]。WU等[7]研究表明，Wog可通過調(diào)節(jié)Hippo/YAP信號傳導(dǎo)誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌的細(xì)胞周期停滯和凋亡。目前，Wog對肝硬化大鼠肝纖維化的影響尚不清楚。本研究通過體內(nèi)構(gòu)建肝硬化大鼠模型，探究Wog對肝硬化大鼠肝纖維化及Hippo/YAP信號通路的影響。

1 材料與方法

1.1" 實驗動物

SD雄性大鼠，SPF級，體質(zhì)量240～270 g，購于華中科技大學(xué)動物實驗中心[生產(chǎn)許可證號：SCXK（鄂）2021—0009]。分籠飼養(yǎng)1周，期間自由飲水飲食。12 h光暗循環(huán)、溫度22～26 ℃、相對濕度50%～70%。動物實驗在成都紐瑞特醫(yī)療科技股份有限公司動物實驗中心進行，經(jīng)成都紐瑞特醫(yī)療科技股份有限公司動物實驗倫理委員會批準(zhǔn)（審批號：202206009）。

1.2" 主要試劑與儀器

Wog（上海佰利萊生物科技有限公司，批號：BLL-bzp20505）；四氯化碳（美國Sigma-Aldrich公司，批號：289116，純度≥99.5%）；復(fù)方鱉甲軟肝片（內(nèi)蒙古福瑞醫(yī)療科技股份有限公司，國藥準(zhǔn)字Z19991011）；Ⅲ型前膠原（type Ⅲ procollagen，PCⅢ）ELISA試劑盒（上海信裕生物科技有限公司，批號：XY-PCⅢ-H）；透明質(zhì)酸（hyaluronic acid;hyaluronan，HA）ELISA試劑盒（批號：EK-R38773）、層粘連蛋白（laminin，LN） ELISA試劑盒（批號：EK-R37021）均購自上海酶研生物科技有限公司；HE染色試劑盒（批號：J-SG1120-10）、Masson染色試劑盒（批號：J-SG1340-100）均購自上海研謹(jǐn)生物科技有限公司；谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，AST）（批號：YDLC-16409）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，ALT）（批號：YDLC-16414）均購自上海羽哚生物科技有限公司；兔源一抗Ⅰ型膠原（collagen-Ⅰ，COL-Ⅰ）（批號：ab270993）、α-平滑肌肌動蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）（批號：ab5694）、大腫瘤抑制因子1（large tumor suppressor gene 1，LATS1）（批號：ab243656）、p-LATS1（批號：ab111344）、p-YAP（批號：ab76252）、TGF-β1（批號：ab215715）、Ⅲ型膠原（collagen-Ⅲ，COL-Ⅲ）（批號：ab7778）、YAP（批號：ab81183）、3-磷酸甘油醛脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）（批號：ab9485）、辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗IgG（批號：ab6721）均購自美國Abcam公司。

酶標(biāo)儀、凝膠成像系統(tǒng)（美國賽默飛公司，型號：Multiskan FC、iBright）；離心機（上海奧陸生物科技有限公司，型號：5415D）；光學(xué)顯微鏡（德國徠卡顯微系統(tǒng)公司，型號：Leica DM750）。

1.3" 方法

1.3.1" 模型構(gòu)建、分組及干預(yù)" 參考文獻(xiàn)[8]方法構(gòu)建肝硬化大鼠模型。每周腹腔注射四氯化碳溶液2次（5 mL/kg），共注射16次。大鼠血清肝功能指標(biāo)AST、ALT水平顯著升高，且肝組織病理檢查發(fā)現(xiàn)有假小葉生成，視為造模成功[8]。將造模成功的大鼠分為5組：模型組、陽性對照組和Wog低、中、高劑量組，每組12只；另選12只大鼠每周腹腔注射2次等量生理鹽水，作為空白對照組。陽性對照組大鼠灌胃0.8 g/kg復(fù)方鱉甲軟肝片溶液[8]+腹腔注射等量生理鹽水；Wog低、中、高劑量組大鼠根據(jù)參考文獻(xiàn)[5]和前期預(yù)實驗結(jié)果經(jīng)腹腔注射7、14、28 mg/kg Wog溶液+灌胃等量生理鹽水；空白對照組、模型組大鼠腹腔注射等量生理鹽水+灌胃等量生理鹽水。所有給藥大鼠均為造模后給藥，均每天干預(yù)1次，連續(xù)4周。

1.3.2" 血清肝功能指標(biāo)檢測" 給藥結(jié)束后，采取每組6只大鼠的腹主動脈血，4 ℃以3 000 r/min離心10 min（離心半徑10 cm），收集上清液。根據(jù)說明書檢測AST、ALT水平。

1.3.3" 血清纖維化指標(biāo)檢測" 取“1.3.2”剩余血清，檢測每組6只大鼠血清PCⅢ、HA、LN纖維化指標(biāo)，具體操作步驟嚴(yán)格根據(jù)ELISA說明書進行。

1.3.4" HE及Masson染色" 處死所有大鼠，分離肝組織。多聚甲醛固定大鼠肝組織（每組隨機取6只），石蠟包埋并切成4 μm的切片。脫蠟和脫水后進行HE、Masson染色，乙醇脫水、二甲苯透明，中性膠封層后鏡下觀察肝組織病理改變。根據(jù)肝纖維化Ishak評分標(biāo)準(zhǔn)判斷肝組織纖維化程度[9]。采用Image-Pro Plus 6.0 軟件分析肝組織膠原體積分?jǐn)?shù)（collagen volume fraction，CVF），CVF（%）=藍(lán)色膠原面積/肝組織總面積×100%。

1.3.5" 免疫組織化學(xué)染色法檢測COL-Ⅰ、COL-Ⅲ表達(dá)" 將肝組織切片置入檸檬酸鈉溶液中進行抗原修復(fù)，3%過氧化溶液處理20 min，去除內(nèi)源性過氧化物酶，與COL-I、COL-Ⅲ一抗（1∶500）4 ℃孵育過夜，并與辣根過氧化物酶偶聯(lián)的抗山羊IgG二抗（1∶1 000）37 ℃孵育60 min，經(jīng)二氨基聯(lián)苯胺（diaminob？鄄enzidine，DAB）染色，中性膠封層后鏡檢。使用Imagepro Plus6.0分析陽性細(xì)胞率。

1.3.6" Western blot檢測肝組織α-SMA、TGF-β1及Hippo-YAP通路蛋白表達(dá)" 用液氮將肝組織充分研磨后加入預(yù)冷的RIPA裂解緩沖液，以12 000 r/min離心15 min（離心半徑10 cm）。收集上清液并用于蛋白質(zhì)印跡分析。使用BCA蛋白質(zhì)檢測試劑盒定量蛋白質(zhì)濃度。在12% SDS-PAGE中分離，并轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯膜上，脫脂牛奶封閉。在4 ℃下與α-SMA（1∶1 000）、TGF-β1（1∶2 000）、LATS1（1∶1 000）、p-LATS1（1∶2 000）、p-YAP（1∶1 000）、YAP（1∶1 000）、GAPDH（1∶2 000）一抗孵育過夜。將膜洗滌并在室溫下與加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗IgG（1∶2 000）孵育1 h。使用化學(xué)發(fā)光試劑檢測蛋白質(zhì)條帶，并使用ImageJ軟件分析灰度值，內(nèi)參為GAPDH。

1.4" 統(tǒng)計學(xué)分析

采用Graphpad Prism 9.0軟件分析實驗數(shù)據(jù)。計量資料以“ｘ±s”表示。多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用SNK-q檢驗。以Plt;0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1" Wog對肝硬化模型大鼠AST、ALT水平的影響

與空白對照組比較，模型組AST、ALT水平升高（Plt;0.05）；與模型組比較，Wog低、中、高劑量組及陽性對照組AST、ALT水平降低（Plt;0.05）；且Wog各劑量組AST、ALT水平隨劑量升高而降低（Plt;0.05）。詳見表1。

2.2" Wog對肝硬化模型大鼠纖維化指標(biāo)影響

與空白對照組比較，模型組PCⅢ、HA、LN升高（Plt;0.05）；與模型組比較，Wog低、中、高劑量組及陽性對照組PCⅢ、HA、LN降低（Plt;0.05）；且Wog各劑量組PCⅢ、HA、LN隨劑量升高而降低（Plt;0.05）。詳見表2。

2.3" Wog對肝硬化模型大鼠肝組織病理損傷的影響

空白對照組肝臟組織完整，未見病理性損傷；與空白對照組比較，模型組大鼠肝細(xì)胞排列松散混亂、細(xì)胞腫脹，可見大量炎癥浸潤及纖維增生，有假小葉形成，肝硬化病理現(xiàn)象明顯；與模型組比較，Wog低、中、高劑量組及陽性對照組大鼠肝組織病理損傷減輕，炎癥浸潤、纖維增生均有不同程度降低，假小葉逐漸消失，其中Wog高劑量組及陽性對照組對肝硬化病理改變的改善程度最為明顯。詳見圖1。

2.4" Wog對肝硬化模型大鼠肝組織纖維化的影響

空白對照組大鼠肝組織中幾乎無纖維化組織；與空白對照組比較，模型組大鼠肝組織纖維化程度加重，可見大量纖維化組織，Ishak評分、CVF均升高（Plt;0.05）；與模型組比較，Wog低、中、高劑量組及陽性對照組大鼠肝組織纖維化程度明顯改善，纖維化組織減少，Ishak評分、CVF均降低（Plt;0.05）；且Wog各劑量組Ishak評分、CVF隨劑量升高而降低（Plt;0.05）。詳見圖2、表3。

2.5" Wog對肝硬化模型大鼠肝組織中膠原蛋白表達(dá)的影響

與空白對照組比較，模型組膠原蛋白COL-Ⅰ、COL-Ⅲ表達(dá)升高（Plt;0.05）；與模型組比較，Wog低、中、高劑量組及陽性對照組膠原蛋白COL-Ⅰ、COL-Ⅲ表達(dá)降低（Plt;0.05）；且Wog各劑量組COL-Ⅰ、COL-Ⅲ表達(dá)隨劑量升高而降低（Plt;0.05）。詳見表4、圖3。

2.6" Wog對肝硬化模型大鼠α-SMA、TGF-β1、p-LATS1/LATS1、p-YAP/YAP蛋白表達(dá)的影響

與空白對照組比較，模型組α-SMA、TGF-β1表達(dá)升高（Plt;0.05），p-LATS1/LATS1、p-YAP/YAP表達(dá)降低（Plt;0.05）；與模型組比較，Wog低、中、高劑量組及陽性對照組α-SMA、TGF-β1表達(dá)降低（Plt;0.05），p-LATS1/LATS1、p-YAP/YAP表達(dá)升高（Plt;0.05）；且Wog各劑量組α-SMA、TGF-β1表達(dá)隨劑量升高而降低（Plt;0.05），p-LATS1/LATS1、p-YAP/YAP表達(dá)隨劑量升高而升高（Plt;0.05）。詳見圖4、表5。

3 討論

肝纖維化是肝損傷后維持肝臟完整性的適應(yīng)性反應(yīng)，病毒感染、酒精性與非酒精性脂肪性肝病、自身免疫性疾病等多種原因均可導(dǎo)致肝纖維化[10]。肝硬化具有死亡率高的特點，肝纖維化是肝硬化的主要病因，其特征是肝星狀細(xì)胞活化和細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積（主要是COL-Ⅰ、COL-Ⅲ），在肝纖維化過程中，靜止肝星狀細(xì)胞被激活并分化為肌成纖維細(xì)胞，其特征為α-SMA和Coll-Ⅰ表達(dá)上調(diào)[11]。肝纖維化持續(xù)發(fā)展，會增加肝細(xì)胞癌發(fā)生的風(fēng)險。因此，研究延緩肝纖維化進程的作用機制有利于開發(fā)改善肝硬化等慢性肝病的藥物。

近年來，中藥因其廣泛的藥理作用和更多的臨床應(yīng)用而受到越來越多的關(guān)注。Wog是一種黃酮類化合物，是中藥黃芩的主要活性成分之一。研究表明，Wog通過降低COL-Ⅰ、COL-Ⅲ表達(dá)可以減輕糖尿病腎病大鼠腎組織的纖維化[12]。另有研究表明，Wog可以抑制TGF-β1誘導(dǎo)的α-SMA和COL-Ⅰ水平，從而抑制腎小管上皮細(xì)胞的纖維化[13]。然而，Wog對肝硬化的作用機制尚不清楚。復(fù)方鱉甲軟肝片是臨床上用于治療肝硬化的常用藥物，對肝纖維化有明顯的治療作用，且常被用做肝硬化藥物開發(fā)的陽性藥物，故本研究以復(fù)方鱉甲軟肝片作為陽性對照來觀察Wog的療效[8，14]。本研究發(fā)現(xiàn)，不同劑量Wog均可顯著降低COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGF-β1、α-SMA表達(dá)，且高劑量的效果最好，與陽性藥的作用趨于一致。COL-Ⅰ與COL-Ⅲ是主要的間質(zhì)膠原蛋白，與纖維化進展密切相關(guān)。TGF-β1在纖維化疾病中被誘導(dǎo)和激活，可參與多種生物學(xué)過程，如成纖維細(xì)胞增殖、膠原蛋白合成等；α-SMA是肝星狀細(xì)胞活化的標(biāo)志物[15]。PCⅢ、HA、LN是肝纖維化的生物學(xué)診斷指標(biāo)，其表達(dá)水平與肝纖維化程度密切相關(guān)[16]。故推測Wog可能通過抑制肝星狀細(xì)胞的活化，起到減輕肝硬化大鼠肝纖維化的作用。通過Masson染色觀察大鼠肝纖維化程度發(fā)現(xiàn)，Wog干預(yù)后大鼠肝組織Ishak評分、CVF均顯著降低，提示W(wǎng)og可作為改善肝硬化大鼠肝纖維化的潛在藥物。

Hippo途徑及其下游效應(yīng)蛋白YAP首次在果蠅中發(fā)現(xiàn)，已被證明參與肺臟、肝臟、腎臟等多種器官纖維化疾病的進展[17]。Hippo途徑調(diào)節(jié)哺乳動物ste20樣激酶（mammalian sterile 20-like kinase，MST）1/2和LATS1/2激酶級聯(lián)反應(yīng)，其中，磷酸化后激活的LATS1/2可在Ser-127或Ser-381位點磷酸化YAP，使YAP易位到細(xì)胞質(zhì)，導(dǎo)致蛋白質(zhì)降解[18]。最近研究表明，YAP激活是體內(nèi)和體外纖維化肝星狀細(xì)胞激活的關(guān)鍵驅(qū)動因素，并且阻斷Hippo途徑和YAP激活可防止靜止肝星狀細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞[19-20]。人臍帶來源間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞可通過調(diào)節(jié)Hippo/YAP信號通路，改善四氯化碳誘導(dǎo)的肝硬化小鼠的肝功能，緩解小鼠肝硬化[21]。本研究中，肝硬化大鼠肝組織中p-LATS1/LATS1、p-YAP/YAP表達(dá)顯著降低，而不同劑量Wog均可顯著升高p-LATS1/LATS1、p-YAP/YAP表達(dá)，提示W(wǎng)og可通過抑制Hippo/YAP信號通路改善肝硬化大鼠肝纖維化。

綜上所述，Wog可改善肝硬化大鼠肝纖維化，其作用機制可能與抑制Hippo/YAP信號通路有關(guān)。本研究可為改善肝硬化肝纖維化進程提供新的藥物參考。Wog具有廣泛的生物活性，改善肝硬化肝纖維化的作用是否涉及到其他途徑仍有待進一步的研究。

參考文獻(xiàn)

[1] BAUMGARTNER K， COOPER J， SMITH A， et al. Liver di？鄄sease： Cirrhosis[J]. FP Essentials， 2021， 511： 36-43.

[2] ROEHLEN N， CROUCHET E， BAUMERT T F. Liver fibrosis： Mechanistic concepts and therapeutic perspectives[J]. Cells， 2020， 9（4）： 875.

[3] TULI H S， RATH P， CHAUHAN A， et al. Wogonin， as a potent anticancer compound： From chemistry to cellular interactions[J]. Experimental Biology and Medicine， 2023， 248（9）： 820-828.

[4] ZHENG Z C， ZHU W， LEI L， et al. Wogonin ameliorates renal inflammation and fibrosis by inhibiting NF-κB and TGF-β1/Smad3 signaling pathways in diabetic nephropathy[J]. Drug Design， Development and Therapy， 2020， 14： 4135-4148.

[5] DU X S， LI H D， YANG X J， et al. Wogonin attenuates liver fibrosis via regulating hepatic stellate cell activation and apoptosis[J]. International Immunopharmacology， 2019， 75： 105671.

[6] LI Y L， KANG X M， ZHOU Z W， et al. The m6A methyltransferase Mettl3 deficiency attenuates hepatic stellate cell activation and liver fibrosis[J]. Molecular Therapy， 2022， 30（12）： 3714-3728.

[7] WU K Y， TENG M， ZHOU W， et al. Wogonin induces cell cycle arrest and apoptosis of hepatocellular carcinoma cells by activating hippo signaling[J]. Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry， 2022， 22（8）： 1551-1560.

[8] 劉" 露， 劉占奎， 吳" 雪， 等. 狼毒大戟調(diào)節(jié)AGE-RAGE信號通路對肝硬化大鼠炎癥反應(yīng)和纖維化的影響[J]. 中國老年學(xué)雜志， 2023， 43（15）： 3800-3804.

[9] 翟浩宇， 曹" 歡， 楊" 柳， 等. 血紅素加氧酶1（HO-1）修飾的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對肝硬化大鼠T淋巴細(xì)胞亞群的影響[J]. 中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志， 2020， 40（6）： 444-452.

[10] HAMMERICH L， TACKE F. Hepatic inflammatory responses in liver fibrosis[J]. Nature Reviews Gastroenterology amp; Hepatology， 2023， 20（10）： 633-646.

[11] HUANG D Q， TERRAULT N A， TACKE F， et al. Global epidemiology of cirrhosis-aetiology， trends and predictions[J]. Nature Reviews Gastroenterology amp; Hepatology， 2023， 20（6）： 388-398.

[12] 張旭東， 任桂靈， 陳慧慧， 等. 漢黃芩素調(diào)控TLR4/MAPK/NF-κB信號通路對糖尿病腎病大鼠腎纖維化的影響[J]. 中國藥理學(xué)通報， 2023， 39（10）： 1840-1846.

[13] MENG X M， REN G L， GAO L， et al. Anti-fibrotic effect of wogonin in renal tubular epithelial cells via Smad3-dependent mechanisms[J]. European Journal of Pharmacology， 2016， 789： 134-143.

[14] 馮志剛， 李" 濤， 趙冰清， 等. 復(fù)方鱉甲軟肝片聯(lián)合恩替卡韋對乙肝肝硬化失代償期患者療效、肝功能、免疫功能影響研究[J]. 中華中醫(yī)藥學(xué)刊， 2022， 40（1）： 184-187.

[15] XIAO Z， JI Q， FU Y D， et al. Amygdalin ameliorates liver fibrosis through inhibiting activation of TGF-β/smad signaling[J]. Chinese Journal of Integrative Medicine， 2023， 29（4）： 316-324.

[16] LI H， LIANG C， KUANG D L， et al. The impact of drug-elu？鄄ting bead （vs. conventional） transarterial chemoembolization on he？鄄patic fibrosis in treating intermediate or advanced hepatocellular carcinoma[J]. Cancer Biology amp; Therapy， 2023， 24（1）： 2166335.

[17] MIA M M， SINGH M K. New insights into hippo/YAP signa？鄄ling in fibrotic diseases[J]. Cells， 2022， 11（13）： 2065.

[18] SHEN H Y， HUANG X， ZHAO Y H， et al. The Hippo pathway links adipocyte plasticity to adipose tissue fibrosis[J]. Nature Communications， 2022， 13（1）： 6030.

[19] KITSUGI K， NORITAKE H， MATSUMOTO M， et al. Arg-Gly-Asp-binding integrins activate hepatic stellate cells via the hippo signaling pathway[J]. Cellular Signalling， 2022， 99： 110437.

[20] XIANG D J， ZOU J， ZHU X Y， et al. Physalin D attenuates hepatic stellate cell activation and liver fibrosis by blocking TGF-β/Smad and YAP signaling[J]. Phytomedicine， 2020， 78： 153294.

[21] YAO L C， HU X， YUAN M Q， et al. Human umbilical cord-derived mesenchymal stromal cells alleviate liver cirrhosis through the Hippo/YAP/Id1 pathway and macrophage-dependent mechanism[J]. International Immunopharmacology， 2023， 123： 110456.