經(jīng)典名方沙參麥冬湯顆粒制備工藝及質(zhì)量標準研究

〔摘要〕 目的 制備經(jīng)典名方沙參麥冬湯顆粒，并建立沙參麥冬湯顆粒的質(zhì)量標準。方法 以熵權(quán)法及正交實驗優(yōu)選沙參麥冬湯回流提取工藝，與古法煎煮工藝進行對比，并進一步篩選顆粒的成型工藝。采用高效液相色譜法（high performance liquid chromatography， HPLC）建立沙參麥冬湯顆粒的指紋圖譜和甘草苷、甘草酸的含量測定方法，并考察基準樣品（煎液、凍干粉）、顆粒劑生產(chǎn)各環(huán)節(jié)（提取液、中間體、成品）指紋圖譜的相似度和甘草苷的轉(zhuǎn)移率。采用薄層色譜法（thin layer chromatography， TLC）對方中麥冬、桑葉、天花粉、白扁豆、甘草5味藥材進行鑒別。結(jié)果 優(yōu)化的回流提取工藝為浸泡0 h，提取兩次，加水量分別為10、8倍，提取時間分別為2.0、1.5 h；成型工藝為以90%乙醇為潤濕劑，加入20%的糊精制軟材，經(jīng)16目篩擠壓制粒，60 ℃下干燥，過80篩整粒制備沙參麥冬湯顆粒。10批沙參麥冬湯顆粒、基準樣品與顆粒生產(chǎn)各環(huán)節(jié)的指紋譜圖相似度均大于0.90；基準煎液、凍干粉、提取液、中間體、成品的甘草苷轉(zhuǎn)移率分別為75.60%、75.24%、91.67%、90.22%、73.57%。5味中藥的TLC特征斑點清晰，且陰性無干擾。結(jié)論 指紋圖譜相似度結(jié)果表明，各批次、各生產(chǎn)環(huán)節(jié)沙參麥冬湯顆粒的質(zhì)量相對穩(wěn)定，且與基準樣品保持一致。經(jīng)回流提取、濃縮、干燥、制粒后，甘草苷的轉(zhuǎn)移率有所下降，顆粒的甘草苷轉(zhuǎn)移率與原方湯劑的較為接近。本研究所建立的沙參麥冬湯顆粒制備工藝穩(wěn)定可靠，質(zhì)量標準檢測方法簡便可行，重復(fù)性好，以期為沙參麥冬湯顆粒的規(guī)模生產(chǎn)及其質(zhì)量控制提供參考。

〔關(guān)鍵詞〕 經(jīng)典名方；沙參麥冬湯；顆粒劑；指紋圖譜；制備工藝；質(zhì)量標準

〔中圖分類號〕R283.6" " " " "〔文獻標志碼〕A" " " " " 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.07.006

Preparation technology and quality standards of the classic formula， Shashen Maidong Granule

PENG Zhirong1，2， WANG Xuyi1， OUYANG Wei1， LEI Yujing1， LI Shuang1， XIA Xinhua1*， YAN Hong1*

1. Schoool of Pharmacy，Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 2. The First Hospital of Hunan Chinese Medical College （Hunan Province Directly Affiliated TCM Hospital）， Zhuzhou， Hunan 412000， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To prepare the classic formula Shashen Maidong Granule （SSMDG） and establish its quality standards. Methods The reflux extraction process of Shashen Maidong Decoction was optimized by entropy weight method and orthogonal experiment， compared with the traditional decoction process， and the molding process of granules was further screened. High performance liquid chromatography （HPLC） was used to establish the fingerprint of SSMDG and the content determination method of liquiritin and acid glycyrrhizinate. The similarity of fingerprint and transfer rate of liquiritin in the reference sample （decoction， freeze-dried powder） and each link of granule production （extract， intermediate， finished product） were investigated. Thin layer chromatography （TLC） was used to identify Maidong （Ophiopogonis Radix）， Sangye （Mori Folium）， Tianhuafen （Trichosanthis Radix）， Baibiandou （Lablab Semen Album）， and Gancao （Glycyrrhizae Radix Et Rhizoma）. Results The optimized reflux extraction process involved soaking for 0 h， extracting twice， adding 10 and 8 times of water， and extracting for 2.0 h and 1.5 h， respectively. The molding process was as follows： 90% ethanol was used as wetting agent， 20% dextrin for soft material， extruded and granulated by 16 mesh sieve， dried at 60 ℃， and granulated by 80 mesh sieve to prepare SSMDG. The similarity of fingerprints of 10 batches of SSMDG， reference samples， and each link of granule production was greater than 0.90. The transfer rates of liquiritin in the standard decoction， freeze-dried powder， extract， intermediate， and finished product were 75.60%， 75.24%， 91.67%， 90.22%， and 73.57%， respectively. The TLC characteristic spots of 5 Chinese medicines were clear and negative without interference. Conclusion The results of fingerprint similarity showed that the quality of SSMDG in each batch and each production link was relatively stable and consistent with the reference sample. After reflux extraction， concentration， drying， and granulation， the transfer rate of liquiritin decreased， and the transfer rate of liquiritin in granules was close to that of the original decoction. The preparation process of SSMDG established in this study is stable and reliable， and the quality standard detection method is simple， feasible， and reproducible， hoping to provide reference for the scale production and quality control of SSMDG.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 classic formula; Shashen Maidong Granule; granules; fingerprint; preparation technology; quality standard

沙參麥冬湯載于清朝名醫(yī)吳瑭所著《溫病條辨·上焦》，具有清養(yǎng)肺胃、生津潤燥之功效，為治療肺胃陰傷的名方。其收錄于國家中醫(yī)藥管理局2018年頒布的100首經(jīng)典名方，為第75方[1]，由北沙參、麥冬、玉竹、天花粉、白扁豆、桑葉、甘草7味藥材組方而成。北沙參、麥冬歸肺、胃經(jīng)，具有養(yǎng)陰、潤肺、生津之功效，為方中君藥[2-3]；玉竹、天花粉亦歸肺、胃經(jīng)，有清熱、生津之功效，為臣藥[4-5]；白扁豆健脾補氣、桑葉輕宣燥熱，為佐藥[6-7]；甘草調(diào)和諸藥列為使藥。

作為中醫(yī)治療疾病的主要劑型，湯劑組方靈活、可隨證加減用藥，且起效較為迅速，但存在臨用前需煎煮制備、口感欠佳、攜帶不便等缺點[8-9]。顆粒劑沖服既保存了湯劑吸收快等優(yōu)點，又方便制劑儲存、攜帶和服用，口感也更好[10]。中藥經(jīng)典名方顆粒作為經(jīng)典名方的傳承和創(chuàng)新，臨床應(yīng)用前景廣闊。本課題開展了經(jīng)典名方沙參麥冬湯顆粒劑的制備工藝及質(zhì)量標準研究，旨在為沙參麥冬湯現(xiàn)代制劑的開發(fā)提供參考。

1 材料

1.1" 儀器

安捷倫1200高效液相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司）；XB 220A型電子天平（廣州廣電計量檢測股份有限公司）；BMMW-V-M-9型微波真空干燥器（河南勃達微波設(shè)備有限責任公司）；標準篩（浙江上虞市道墟五四儀器沙篩廠）；SXKW數(shù)顯控溫電熱套（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）；RE-2000B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；SB-5200D型超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2" 試藥

北沙參為傘形科植物珊瑚菜Glehnia littoralis Fr. Schmidt ex Miq.的干燥根，麥冬為百合科植物麥冬Ophiopogon japonicus（L.f） Ker-Gawl.的干燥根，天花粉為葫蘆科植物栝樓Trichosanthes kirilowii Maxim.的干燥根，玉竹為百合科植物玉竹Polygonatum odoratum （Mill.） Druce.的干燥根，白扁豆為豆科植物扁豆Dolichos lablab L.的干燥成熟種子，桑葉為桑科植物桑Morus alba L.的葉，甘草為豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根及根莖，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室主任劉塔斯教授鑒定，均符合2020年版《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）標準，藥材的產(chǎn)地、采收期以及炮制方法詳見表1。甘草酸銨對照品（批號：110731-202021）、蘆丁對照品（批號：100080-201811）、甘草苷對照品（批號：111610-201908），均購自中國食品藥品檢定研究院；磷酸（批號：20200603，國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；乙腈（批號：21125090，美國天地公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1" 沙參麥冬湯基準樣品的制備及其指紋圖譜的建立

本研究借鑒《溫病條辨》[11]中的記載以及度量衡考據(jù)，前期已完成沙參麥冬湯原方基準煎液及凍干粉的制備，確定的基準煎液制法為：稱取北沙參、麥冬各11.19 g，桑葉、天花粉、白扁豆各5.60 g，玉竹7.46 g，甘草3.73 g，加水1 000 mL，武火煮沸后轉(zhuǎn)文火熬煮，至濃縮液體積約400 mL，過濾即得沙參麥冬湯煎液。建立了15批沙參麥冬湯的HPLC指紋圖譜[12]，相似度均大于0.90，表明樣品及其所用飲片的整體質(zhì)量相對穩(wěn)定。

2.2" 沙參麥冬湯的甘草苷含量測定

本方君藥為北沙參、麥冬的成分均難以使用高效液相色譜法進行檢測。玉竹、天花粉及白扁豆的有效成分不適用于高效液相檢測[13-14]，桑葉中蘆丁含量較低，故選擇方中含量較高的甘草中主要有效成分甘草苷含量作為評價指標。

2.2.1" 色譜條件" 色譜柱為Zorbax C18（250 mm×4.6 mm，5.0 μm），流動相為乙腈（A）-0.2%磷酸水（B），柱溫為30 ℃，體積流量為1.0 mL/min，進樣量為20 μL；沙參麥冬湯的甘草苷含量測定梯度洗脫程序為0～5 min，5%～15% A；5～15 min，15%～23% A；15～20 min，23%～35% A；20～25 min，35%～45% A。檢測波長程序為0～5 min，354 nm；5～25 min，230 nm。

2.2.2" 對照品溶液、供試品溶液的制備及含量測定

精密稱定甘草苷對照品11.095 6 mg于10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度線，精密移取1 mL，甲醇定容至10 mL，即得濃度為0.103 3 mg/mL的甘草苷對照品溶液。精密移取基準煎液2 mL至5 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度線即得供試品溶液。注入HPLC色譜儀測定甘草苷含量，并按下式計算甘草苷轉(zhuǎn)移率。甘草苷轉(zhuǎn)移率=供試液甘草苷含量/甘草飲片甘草苷含量×100%。

2.3" 沙參麥冬湯的提取工藝研究

2.3.1" 提取工藝的單因素考察" 采用回流提取法，以共有峰總面積、甘草苷轉(zhuǎn)移率及浸膏得率為評價指標，對提取工藝中的浸泡時間（A）、加水量（B）及提取時間（C）進行單因素考察，考察因素水平詳見表2。

運用熵權(quán)法計算綜合評分[15]，篩選正交實驗設(shè)計因素水平。各評價指標熵值越小，則熵權(quán)系數(shù)越大，指標傳遞的信息量越多，其權(quán)重值也越大。設(shè)給m個評價指標，n個評價對象的原始數(shù)據(jù)的矩陣為A=（aij）mn，aij為第j個指標下第i個項目的評價值，按照公式1對其歸一化得到R=（Xij）mn。Xij表示為第i次試驗時第j個評價指標的取值，i=1，2，3，…，m；j=1，2，3，…，n。

Pi（0≤Pi≤1）為某個信息的概率，需將矩陣（Xij）mn按公式（2）做歸一化處理，則可視為評價指標的概率矩陣（Pij）mn。

Pij表示第i次試驗在第j個評價指標下的概率。根據(jù)公式（3）、（4）確定各個評價指標的信息熵值Hj及權(quán)重系數(shù)Wj，結(jié)果見表3。

單因素實驗結(jié)果表明，浸泡時間0 h得分最高，1 h得分最低，故選擇0、0.5、1 h進行正交設(shè)計；加水量6（4）倍量水得分最低，10（8）倍量水得分最高，故選擇6（4）、8（6）、10（8）倍量水進行正交設(shè)計；提取時間1.0（0.5） h得分最低，2.0（1.5） h得分最高，選擇1.0（0.5） h、1.5（1.0） h及2.0（1.5） h進行正交設(shè)計。

2.3.2" 沙參麥冬湯提取工藝的正交優(yōu)化" 對提取工藝單因素考察的優(yōu)選因素水平進行正交試驗，采用與“2.3.1”項相同的評價指標與賦權(quán)方式。正交因素水平詳見表4，正交實驗安排及結(jié)果見表5，正交實驗方差分析詳見表6。

由方差分析可知，浸泡時間及加水量對甘草苷的轉(zhuǎn)移率影響顯著，加水量及提取時間對浸膏得率影響顯著，而浸泡時間、加水量及提取時間對共有峰的總峰面積影響并不顯著。從方差分析可知，共有峰總峰面積影響因素Bgt;Agt;C，甘草苷轉(zhuǎn)移率影響因素Bgt;Agt;C，浸膏得率影響因素Cgt;Bgt;A，從綜合評分來看，影響提取效果的因素Bgt;Agt;C，綜上，確定優(yōu)選工藝為A1B3C3，即浸泡0 h，第1次加10倍量水提取2 h，第2次加8倍量水提取1.5 h，合并兩次提取液，70 ℃減壓旋蒸至相對密度1.25，得沙參麥冬湯提取液。

2.3.3" 驗證性實驗" 稱取2倍處方量沙參麥冬湯藥材，平行3份，按A1B3C3提取方案進行實驗，測得平均共有峰總面積為12 574.67 mAU*s，RSD=1.63%；平均甘草苷轉(zhuǎn)移率為91.67%，RSD=0.43%；平均浸膏得率為44.81%，RSD=0.94%，結(jié)果表明該提取工藝穩(wěn)定可行。

2.3.4" 古法煎煮與現(xiàn)代提取工藝比較" 沙參麥冬湯經(jīng)由現(xiàn)代工藝回流提取后，將其與古法煎煮所得凍干粉以指紋圖譜共有峰總面積、甘草苷轉(zhuǎn)移率、浸膏得率為指標進行比較，詳見表7。結(jié)果表明，現(xiàn)代提取工藝的指紋圖譜共有峰總面積范圍、甘草苷轉(zhuǎn)移率范圍、浸膏得率范圍均與古法煎煮工藝有所重合，可視為等同于古法煎煮工藝。

2.4" 沙參麥冬湯顆粒的成型工藝研究

按“2.3.2”項優(yōu)選的工藝條件制備沙參麥冬湯提取液，將提取液濃縮至密度為1.25的濃縮液，經(jīng)由50 ℃微波真空干燥11 min得沙參麥冬浸膏粉。以45%用量的90%乙醇為潤濕劑，以制軟材情況、制粒情況、顆粒性狀、顆粒收率、溶化性及休止角等為評價指標，采用單因素試驗法篩選稀釋劑的種類及用量。

2.4.1" 單一稀釋劑品種及用量篩選" 分別加入30%，20%，10%的稀釋劑（淀粉、糊精、乳糖），以45%用量的90%乙醇為潤濕劑，制軟材，擠壓過16目篩網(wǎng)，60 ℃下干燥15 min，過80目篩整粒，詳見表8。

單一稀釋劑的成型結(jié)果表明，20%糊精的顆粒收率最高，流動性較好，而乳糖制得的顆粒略有黏性，且流動性差，并進一步考察糊精與淀粉的混合配比。

2.4.2" 混合稀釋劑配比篩選" 考察糊精與淀粉的不同配比，以45%用量90%乙醇為潤濕劑，按20%的稀釋劑加入量制軟材，擠壓過16目篩網(wǎng)，60 ℃下干燥15 min，過80目篩整粒。結(jié)果表明，糊精單用優(yōu)于糊精、淀粉的混合稀釋劑，詳見表9。

2.5" 沙參麥冬湯顆粒的薄層色譜研究

本研究質(zhì)量標準部分分別建立了方中麥冬、桑葉、天花粉、白扁豆及甘草五味藥材的薄層色譜法，沙參麥冬湯顆粒劑的指紋圖譜及有效成分甘草苷、甘草酸的高效液相色譜法，可較全面地控制沙參麥冬湯顆粒劑的整體質(zhì)量[16]。

2.5.1" 麥冬" 分別稱取全方顆粒和麥冬陰性顆粒4.0 g，加水15 mL，稱取麥冬對照藥材4.0 g，加水30 mL，分別加入鹽酸 0.5 mL，置水浴中加熱回流10 min，放冷。分別加入20 mL三氯甲烷振搖1 h，取三氯甲烷部分并蒸干，加乙醇1 mL溶解，制得供試品溶液、麥冬陰性對照溶液和麥冬對照藥材溶液。將上述3種溶液分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-丙酮（4∶1）為展開劑展開，取出晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰，365 nm紫外光檢視。

2.5.2" 桑葉" 分別稱取全方顆粒、桑葉陰性顆粒及桑葉對照藥材2.0 g，照2020年版《中國藥典》一部“桑葉”鑒別項下制備供試品溶液、桑葉陰性對照溶液及桑葉對照藥材溶液。將上述3種溶液分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（8∶2∶1）的上層溶液為展開劑，置于用展開劑預(yù)飽和10 min的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干，312 nm紫外光檢視。

2.5.3" 天花粉" 分別稱取全方顆粒、天花粉陰性顆粒及天花粉對照藥材2.0 g，照2020年版《中國藥典》一部“天花粉”鑒別項下制備天花粉供試品溶液、天花粉陰性溶液及天花粉對照藥材溶液。稱取適量瓜氨酸對照品，加入50%乙醇溶液，制成1 mg/mL的瓜氨酸對照品溶液。將上述4種溶液分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（10∶3∶1）為展開劑，展開完成后取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。

2.5.4" 甘草" 分別稱取全方顆粒、甘草陰性顆粒及甘草對照藥材2.0 g，照2020年版《中國藥典》一部“甘草”鑒別項下制備供試品溶液、甘草陰性對照溶液及甘草對照藥材溶液。稱取適量甘草苷及甘草酸銨對照品，加甲醇分別制成1 mg/mL的溶液，作為甘草苷及甘草酸銨對照品溶液。將上述5種溶液溶液分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15∶1∶1∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰，365 nm紫外光檢視。

2.5.5" 白扁豆" 分別稱取全方顆粒、白扁豆陰性顆粒及白扁豆對照藥材3.0 g，加25 mL乙醇80 ℃加熱回流30 min，放冷，濾過，濾液蒸干，加甲醇2 mL溶解即得供試品溶液、白扁豆陰性對照溶液及白扁豆對照藥材溶液。白扁豆分別取甲苯10 mL、乙酸乙酯2 mL、88%甲酸0.25 mL與甲苯10 mL、乙酸乙酯2 mL、98%甲酸0.25 mL，置于同一展開缸的兩個展開槽內(nèi)，飽和展開缸15 min，再將薄層板置于展開缸內(nèi)飽和10 min，以甲苯10 mL，乙酸乙酯2 mL及98%甲酸0.25 mL為展開劑，點硅膠G板，展開，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液作為顯色劑，105 ℃加熱至斑點清晰，取出薄層板，置于312 nm紫外光檢視。

2.5.6" 薄層色譜結(jié)果" 麥冬、天花粉、桑葉、白扁豆及甘草5味藥材的薄層色譜圖詳見圖1。結(jié)果表明，以上五味藥材，在供試品色譜中與對照藥材或?qū)φ掌飞V相應(yīng)的位置上，均顯相同顏色的斑點且陰性無干擾。

2.6" 沙參麥冬湯顆粒指紋圖譜

2.6.1" 色譜條件" 色譜柱為Zorbax C18（250 mm×4.6 mm，5.0 μm），流動相為乙腈-0.2%磷酸水，柱溫為30 ℃，體積流量為1.0 mL/min，進樣量為20 μL，梯度洗脫程序為0～70 min，設(shè)置5 min時間間隔，乙腈比例為5%～15%、15%～23%、23%～35%、35%～45%、45%～55%、55%～60%、60%～80%、80%～100%。檢測波長程序為0～5 min，354 nm；5～30 min，230 nm，30～40 min，203 nm；41～50 min，230 nm；50～70 min，203 nm。

2.6.2" 供試品溶液的制備" 精密稱定顆粒劑0.2 g，置于100 mL錐形瓶中，加入70%甲醇30 mL，密塞，稱重，超聲45 min，取出放冷，70%甲醇補足減失重量，過膜，得供試品溶液。

2.6.3" 精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗" 將供試品溶液，連續(xù)測定6次，以甘草苷為參照峰，測得各共有峰相對保留時間及相對峰面積的RSD值均小于3%，相似度均大于0.990，表明該方法精密度良好。平行制備6份供試品溶液，以甘草苷為參照峰，測得各共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD值均小于3%，相似度均大于0.990，表明該方法重復(fù)性良好。將供試品溶液分別于0、2、4、8、12、24 h定時進樣，以甘草苷為參照峰，測得各共有峰相對保留時間和相對峰面積的RSD值均小于3%，相似度均大于0.990，表明該方法穩(wěn)定性良好。

2.6.4" 沙參麥冬湯顆粒的共有峰總峰面積測定" 取3批沙參麥冬湯顆粒，按“2.6.2”項制備供試品溶液，測定記錄共有峰總峰面積。3批顆粒劑共有峰總峰面積平均面積為2 015.475，3批顆粒劑共有峰總峰面積的RSD為0.37%，無明顯差異，說明該制備工藝穩(wěn)定可行。

2.6.5" 10批沙參麥冬湯顆粒的相似度評價" 記錄10批沙參麥冬湯顆粒的指紋圖譜，并以甘草苷為參照峰，采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2012A版》[17]對10批顆粒指紋圖譜進行相似度分析。結(jié)果表明，10批顆粒劑相似度均大于0.990，表明各批次制得的顆粒質(zhì)量相對穩(wěn)定，詳見圖2。

2.7" 沙參麥冬湯顆粒基準樣品與各個生產(chǎn)環(huán)節(jié)指紋圖譜相似度評價

通過對沙參麥冬湯顆粒的基準煎液、凍干粉、提取液、中間體（浸膏粉）和成品（顆粒劑）之間的相似度進行評價，得基準樣品與顆粒劑生產(chǎn)各環(huán)節(jié)樣品的指紋圖譜，結(jié)果詳見圖3。以基準煎液（1.000）為參照，凍干粉（0.973）、提取液（0.916）、中間體（浸膏粉）（0.947）、成品（顆粒劑）（0.967）的相似度結(jié)果均大于0.90。指紋圖譜的相似度結(jié)果表明，沙參麥冬湯顆粒各生產(chǎn)環(huán)節(jié)的質(zhì)量與基準樣品可保持一致性。

2.8" 沙參麥冬湯顆粒甘草苷含量測定

2.8.1" 供試品溶液制備、甘草陰性對照溶液的制備 精密稱定顆粒劑0.2 g，置于100 mL錐形瓶中，加入70%甲醇30 mL，密塞，稱重，超聲45 min，取出放冷，70%甲醇補足減失重量，過膜，得供試品溶液。取缺甘草沙參麥冬湯顆粒0.2 g，精密稱定，按上述方法制備甘草陰性對照溶液。

2.8.2" 專屬性試驗" 取70%空白甲醇溶液、甘草苷對照品溶液、甘草陰性對照溶液及供試品溶液，按“2.2.1”色譜條件進行檢測，詳見圖4，結(jié)果表明甘草苷色譜峰峰形較對稱，分離度1.95，陰性對照無干擾，該方法能夠用于甘草苷的含量測定。

2.8.3" 線性考察、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收率實驗" 取甘草苷對照品溶液，分別精密取2.500、1.665、1.250、1.000、0.850、0.715 mL移至10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度線，搖勻，進樣檢測，甘草苷峰面積與濃度的回歸方程為：Y=43 889X+19.018，r=0.999 9，可知甘草苷在0.148 0～0.516 0 μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

取供試品溶液，連續(xù)測定6次，記錄甘草苷峰面積，RSD為0.65%，表明儀器精密度良好。平行制備6份供試品溶液，進樣測定，記錄甘草苷峰面積，RSD為0.76%，表明該方法重復(fù)性良好。將供試品溶液分別于0、2、4、8、12、24 h定時進樣，記錄甘草苷峰面積，RSD為0.74%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。精密稱取含量為1.432 6 mg/g的顆粒0.1 g，加入甘草苷對照品溶液（0.103 3 mg/mL）1.450 mL于100 mL錐形瓶中，加入70%甲醇30 mL，密塞，稱重，超聲45 min，補足減失的重量，平行6份，進樣檢測，測得平均加樣回收率為99.30%，RSD為2.52%。

2.8.4" 沙參麥冬湯顆粒的甘草苷含量測定" 取3批沙參麥冬湯顆粒，按“2.8.1”項下操作，制備供試品溶液，進樣檢測，測定甘草苷的含量，結(jié)果詳見表10，3批顆粒劑甘草苷平均含量1.432 5 mg/g，RSD為0.09%，說明該制備工藝穩(wěn)定可行。

2.8.5" 沙參麥冬湯基準樣品與顆粒生產(chǎn)各環(huán)節(jié)甘草苷轉(zhuǎn)移率對比" 基準樣品與顆粒劑生產(chǎn)各環(huán)節(jié)甘草苷轉(zhuǎn)移率結(jié)果詳見表11。基準樣品煎液及其凍干粉的甘草苷轉(zhuǎn)移率基本保持一致，表明冷凍干燥工藝并未對甘草苷造成破壞。現(xiàn)代工藝經(jīng)回流提取、濃縮、干燥、制粒后，甘草苷的轉(zhuǎn)移率有所下降，顆粒的甘草苷轉(zhuǎn)移率與原方湯劑的較為接近，可為沙參麥冬湯開發(fā)成現(xiàn)代制劑提供參考依據(jù)。

2.9" 沙參麥冬湯顆粒甘草酸含量測定

2.9.1" 色譜條件" 色譜柱為Zorbax C18（250 mm×4.6 mm，5.0 μm），流動相為乙腈（A）-0.2%磷酸水（B），柱溫為30 ℃，體積流量為1.0 mL/min，進樣量為20 μL。沙參麥冬湯顆粒的甘草酸含量測定梯度洗脫程序為0～5 min，5%～15% A；5～15 min，15%～23% A；15～20 min，23%～35% A；20～25 min，35%～45% A；25～40 min，45%～55% A。檢測波長程序為0～5 min，354 nm；5～30 min，230 nm；30～40 min，203 nm。

2.9.2" 對照品溶液、供試品溶液的制備" 精密稱定甘草酸銨對照品9.25 mg于100 mL容量瓶中，甲醇定容，即得濃度為0.092 5 mg/mL的甘草酸銨對照品溶液。精密稱定顆粒0.5 g，置于100 mL錐形瓶中，加入70%甲醇30 mL，密塞，稱重，超聲45 min，取出放冷，70%甲醇補足減失重量，過膜，得供試品溶液。取缺甘草沙參麥冬湯顆粒0.5 g，按上述方法制備甘草陰性對照溶液。測定甘草酸銨含量，按“甘草酸重量=甘草酸銨重量/1.020 7”計算甘草酸含量。

2.9.3" 專屬性試驗" 取70%空白甲醇溶液、甘草酸銨對照品溶液、甘草陰性對照溶液及供試品溶液，按甘草酸含量測定色譜條件進行檢測，見圖5，結(jié)果表明甘草酸銨色譜峰峰形較對稱，分離度4.05，陰性對照無干擾，該方法可用于甘草酸的含量測定。

2.9.4" 線性考察、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、加樣回收率實驗" 取甘草酸銨對照品溶液（0.737 mg/mL），精密移取5.000、3.750、2.500、1.250、0.625 mL至5 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度線，搖勻，進樣檢測，甘草酸銨峰面積與濃度的回歸方程為：Y=1 899.2X-6.752 3，r=0.995 8，可知甘草酸銨在0.92～7.37 μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

取供試品溶液，連續(xù)測定6次，記錄甘草酸銨峰面積，RSD為1.04%，表明儀器精密度良好。平行制備6份供試品溶液，進樣測定，記錄甘草酸銨峰面積，RSD為2.34%，表明該方法重復(fù)性良好。將供試品溶液分別于0、2、4、8、12、24 h定時進樣，記錄甘草酸銨峰面積，RSD為1.32%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。精密稱取含量為3.117 6 mg/g的顆粒0.1 g，加入甘草酸銨對照品溶液（0.092 5 mg/mL） 3.50 mL于50 mL錐形瓶中，加入6.5 mL的70%甲醇，密塞，稱重，超聲45 min，補足減失的重量，平行6份，進樣檢測，測得平均加樣回收率為98.21%，RSD為1.28%。

2.9.5" 沙參麥冬湯顆粒的甘草酸含量測定" 取3批沙參麥冬湯顆粒，按“2.9.1”項下操作，制備供試品溶液，進樣檢測，測定甘草酸的含量，結(jié)果見表12，3批顆粒劑甘草酸平均含量3.166 9 mg/g，RSD為2.29%，說明該制備工藝穩(wěn)定可行。

3 討論

經(jīng)典名方作為中醫(yī)理論的載體，其有著豐富的文化底蘊及臨床經(jīng)驗，是中醫(yī)藥傳承發(fā)展的基礎(chǔ)。經(jīng)典名方大部分劑型為湯劑，作為傳統(tǒng)中藥劑型湯劑存在需煎煮制備、口感欠佳、使用不便等缺點。本研究將經(jīng)典名方沙參麥冬湯制成顆粒劑，并開展了其制備工藝與質(zhì)量標準的研究。制備工藝的干燥環(huán)節(jié)，因處方中多糖類成分過多、藥液黏性大，傳統(tǒng)的真空干燥耗時長且干燥效果不理想，嘗試采用噴霧干燥，浸膏粉黏壁嚴重，浸膏得率過低。微波真空干燥熱傳導(dǎo)速度快，干燥周期短[18]，所得浸膏粉性狀良好，故選擇該法作為干燥方法。成型工藝研究中，考慮到浸膏粉黏性大，故未加入黏合劑而采用90%乙醇進行濕法制粒。對比了不同種類的稀釋劑及用量，結(jié)果表明，加入20%糊精易制粒，制得的顆粒收率高、流動性好。為了對沙參麥冬湯顆粒進行有效、可控、全面地質(zhì)量評價，采用了薄層色譜法對方中的各味藥材進行了定性鑒別。麥冬、桑葉、天花粉、白扁豆及甘草5味中藥特征斑點清晰，且陰性無干擾，可用于沙參麥冬湯顆粒的質(zhì)量控制。北沙參的薄層色譜無特征斑點，玉竹薄層色譜的特征斑點有陰性干擾。

本研究以指紋圖譜中共有峰總峰面積作為評價指標，可較全面控制復(fù)方整體質(zhì)量。本方君藥為北沙參及麥冬，由于北沙參專屬性不強，難以進行檢測，而麥冬在2020版《中國藥典》中是以紫外測其魯斯可皂苷元含量作為其總皂苷量，不適用于高效液相，其他文獻以高效液相測定麥冬皂苷D含量作為指標，但麥冬皂苷D為末端吸收波長[19]，在全方中受干擾較大，亦難以檢測。玉竹、天花粉及白扁豆有效成分不適用于高效液相檢測，桑葉中蘆丁含量較低，故本實驗選擇方中含量較高的甘草苷（甘草主要成分）含量作為評價指標。浸膏得率對于顆粒劑制備有較大影響，與療效亦密切相關(guān)，故亦為評價指標。

經(jīng)典名方的現(xiàn)代制劑開發(fā)須建立在與傳統(tǒng)制劑等質(zhì)的基礎(chǔ)上[20-21]，其制備全過程的質(zhì)量控制以及各指標與基準樣品的一致性至關(guān)重要，因此，對沙參麥冬湯顆粒生產(chǎn)各環(huán)節(jié)的指紋圖譜進行了相似度評價及甘草苷轉(zhuǎn)移率的對比，與基準樣品進行比較，本研究所制得的顆粒劑基本與原方保持一致，符合國家規(guī)定的經(jīng)典名方開發(fā)制劑的要求。本研究所制得的沙參麥冬湯顆粒成型性良好，制備工藝及質(zhì)量穩(wěn)定可靠，為后續(xù)沙參麥冬湯開發(fā)成現(xiàn)代制劑以及大規(guī)模生產(chǎn)提供了參考。

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