祛風(fēng)止癢方超聲霧化對過敏性結(jié)膜炎模型兔炎癥因子IL-3、IL-5、GM-CSF、TSLP及相關(guān)蛋白表達的影響

〔摘要〕 目的 觀察祛風(fēng)止癢方超聲霧化對過敏性結(jié)膜炎（allergic conjunctivitis， AC）模型兔結(jié)膜組織中Janus酪氨酸激酶2/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子5（Janus kinase2/signal transducer and activator of transcription5， JAK2/STAT5）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路關(guān)鍵細胞因子白細胞介素-3（interleukin-3， IL-3）、白細胞介素-5（interleukin-5， IL-5）、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony-stimulating factor， GM-CSF）及胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素（thymic stromal lymphopoietin， TSLP）表達的影響。方法 選取健康成年新西蘭長耳大白兔36只，按照隨機數(shù)字表法分為對照組、模型組、奧洛他定組、祛風(fēng)止癢組，每組9只。對照組不予處理，其余組分別于實驗第0、7天予靜脈注射含卵清蛋白（ovalbumin， OVA）和佐劑氫氧化鋁的混合物致敏，此后每天采用OVA、磷酸鹽平衡生理鹽水混合物局部每天滴眼1次，連續(xù)14 d，以加強致敏，建立AC模型。造模成功后，奧洛他定組用鹽酸奧洛他定滴眼液滴雙眼，祛風(fēng)止癢組用祛風(fēng)止癢方超聲霧化治療，連續(xù)給藥14 d。造模期間裂隙燈下觀察兔眼前節(jié)臨床表現(xiàn)，并采用Magone計分法行眼部癥狀臨床評分。末次給藥24 h后，以摘眼球法采血并取兔瞼結(jié)膜組織，ELISA檢測血清IL-3、IL-5、GM-CSF及結(jié)膜組織TSLP含量，Western blot檢測結(jié)膜組織JAK2、STAT5蛋白表達水平。結(jié)果 模型組Magone評分明顯高于對照組（Plt;0.05），說明AC模型制備成功。與對照組比較，模型組兔眼部可見明顯的結(jié)膜充血、分泌物及流淚表現(xiàn)；與模型組比較，奧洛他定組及祛風(fēng)止癢組兔眼部結(jié)膜僅見少量充血、分泌物，流淚癥狀減輕。與對照組比較，模型組血清IL-3、IL-5、GM-CSF及結(jié)膜組織TSLP含量均升高（Plt;0.05），結(jié)膜組織中JAK2、STAT5蛋白表達水平均升高（Plt;0.05）；與模型組比較，奧洛他定組及祛風(fēng)止癢組血清IL-3、IL-5、GM-CSF及結(jié)膜組織TSLP含量均降低（Plt;0.05），結(jié)膜組織中JAK2、STAT5蛋白表達水平均下降（Plt;0.05）；與奧洛他定組比較，祛風(fēng)止癢組血清IL-3、IL-5、GM-CSF及結(jié)膜組織TSLP含量差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)膜組織中JAK2、STAT5蛋白表達水平均升高（Plt;0.05）。結(jié)論 祛風(fēng)止癢方超聲霧化對OVA誘導(dǎo)的AC樣癥狀有明顯療效，其作用機制可能與抑制JAK2/STAT5信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中關(guān)鍵細胞因子，進而減輕炎癥反應(yīng)有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 祛風(fēng)止癢方；超聲霧化；過敏性結(jié)膜炎；JAK2/STAT5信號；白細胞介素-3；白細胞介素-5；粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子；胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素

〔中圖分類號〕R285.5" " " " " 〔文獻標志碼〕A" " " " " 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.11.005

Effects of ultrasonic nebulization of Qufeng Zhiyang Formula on the expressions of inflammatory factors IL-3， IL-5， GM-CSF， TSLP， and related proteins in rabbit models of allergic conjunctivitis

DENG Jie1， LIAO Yuanping1， YAN Jiazhao2， YU Jingsheng1，2*

1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 2. The First Hospital of Hunan

University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410007， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To observe the effects of ultrasonic nebulization of Qufeng Zhiyang Formula （QFZYF） on the expressions of key cytokines in the Janus kinase 2/signal transducer and activator of transcription 5 （JAK2/STAT5） signal transduction pathway， including interleukin-3 （IL-3）， interleukin-5 （IL-5）， granulocyte-macrophage colony-stimulating factor （GM-CSF）， and thymic stromal lymphopoietin （TSLP）， in the conjunctival tissue of rabbit models of allergic conjunctivitis （AC）. Methods Thirty-six healthy adult New Zealand white rabbits were selected and divided into control group， model group， olopatadine group， and QFZYF group according to the random number table method， with nine rabbits in each group. The control group received no treatment. The other groups were sensitized on days 0 and 7 by intravenous injection of a mixture containing ovalbumin （OVA） and aluminum hydroxide adjuvant; subsequently， a mixture of OVA and phosphate-buffered saline was instilled into the eyes once daily for 14 consecutive days to enhance sensitization and establish the AC model. After successful modeling， the olopatadine group was treated with olopatadine hydrochloride ophthalmic solution in both eyes， while the QFZYF group received ultrasonic nebulization therapy with QFZYF， for 14 consecutive days. During the modeling period， the anterior segment of the rabbit eye was observed under a slit lamp， and clinical scores for ocular symptoms were assessed using the Magone scoring system. Twenty-four hours after the last administration， blood was collected by enucleation， and conjunctival tissue from the rabbit eyelid was obtained. The levels of serum IL-3， IL-5， GM-CSF， and conjunctival TSLP were measured by ELISA， and the protein expression levels of JAK2 and STAT5 in conjunctival tissue were determined by Western blot. Results The Magone scores in the model group were significantly higher than those in the control group （Plt;0.05）， indicating the successful establishment of the AC model. Compared with the control group， the rabbits in the model group exhibited obvious conjunctival hyperemia， secretions， and tearing in their eyes. In contrast， the rabbits in the olopatadine and QFZYF groups showed only mild conjunctival hyperemia and a small amount of secretions， with reduced tearing symptoms compared to the model group. Compared with the control group， the levels of serum IL-3， IL-5， GM-CSF， and conjunctival TSLP were elevated in the model group （Plt;0.05）， and the protein expression levels of JAK2 and STAT5 in conjunctival tissue also increased （Plt;0.05）. Compared with the model group， the levels of serum IL-3， IL-5， GM-CSF， and conjunctival TSLP decreased in both the olopatadine and QFZYF groups （Plt;0.05）， and the protein expression levels of JAK2 and STAT5 in conjunctival tissue were also reduced （Plt;0.05）. However， there were no statistically significant differences in the levels of serum IL-3， IL-5， GM-CSF， and conjunctival TSLP between the olopatadine group and the QFZYF group （Pgt;0.05）， although the protein expression levels of JAK2 and STAT5 in conjunctival tissue were higher in the QFZYF group （Plt;0.05）. Conclusion Ultrasonic nebulization of QFZYF has significant therapeutic effects on OVA-induced AC-like symptoms. Its mechanism of action may be related to inhibiting key cytokines in the JAK2/STAT5 signal transduction pathway， thereby reducing the inflammatory response.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 Qufeng Zhiyang Formula; ultrasonic nebulization; allergic conjunctivitis; JAK2/STAT5 signaling; interleukin-3; interleukin-5; granulocyte-macrophage colony-stimulating factor; thymic stromal lymphopoietin

過敏性結(jié)膜炎（allergic conjunctivitis，AC）是因結(jié)膜黏膜對環(huán)境過敏原發(fā)生過敏反應(yīng)而引起的眼部疾病，以眼部瘙癢、異物感、分泌物增多、結(jié)膜充血或水腫為主要臨床特征[1-2]。AC可分為季節(jié)性AC、常年性AC、春季角結(jié)膜炎、特應(yīng)性角結(jié)膜炎和巨乳頭狀結(jié)膜炎。AC的急慢性病理過程主要表現(xiàn)為過敏原與肥大細胞中IgE受體結(jié)合，促使肥大細胞的脫顆?；虺掷m(xù)激活，從而導(dǎo)致炎癥介質(zhì)釋放[3]。近年來，越來越多研究聚焦于Janus酪氨酸激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子（Janus kinase/signal transducer and activator of transcription， JAK/STAT）信號通路與AC的關(guān)系，JAK-STAT信號通路與AC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[4-5]。而白細胞介素（interleukin，IL）-3、IL-5、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony-stimulating factor，GM-CSF）及胸腺基質(zhì)淋巴細胞生成素（thymic stromal lymphopoietin，TSLP）是AC發(fā)病機制中的重要調(diào)控因子，四者通過JAK2-STAT5信號通路傳導(dǎo)信號[6-9]，這一過程可能是引起AC發(fā)病的重要因素。

AC屬于中醫(yī)學(xué)“時復(fù)目癢”“癢若蟲行證”范疇，與風(fēng)、濕、熱密切相關(guān)[10]。喻京生教授在《審視瑤函論·一字散》中“驅(qū)風(fēng)一字散”的基礎(chǔ)上，結(jié)合自身多年治療AC臨床經(jīng)驗，創(chuàng)立祛風(fēng)止癢方。全方由防風(fēng)、川芎、荊芥、白鮮皮、薄荷、苦參、冰片、千里光、地膚子9味藥物組成，具有祛風(fēng)止癢、清熱祛濕的功效。故本研究通過建立AC模型，著眼于JAK2-STAT5信號通路，探究祛風(fēng)止癢方對AC的治療作用及其分子機制，研究結(jié)果報道如下。

1 材料與方法

1.1" 實驗動物

健康成年新西蘭長耳大白兔36只，雌雄各半，體質(zhì)量1.5～2.0 kg，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供[動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2019-0015]。實驗開始前，對36只新西蘭長耳大白兔雙眼進行常規(guī)檢查以排除眼部病變及全身疾病，經(jīng)檢查無疾患。動物造模前適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，恒溫恒濕，自由攝食、飲水。本研究實驗動物及實驗條件符合國家科學(xué)技術(shù)委員會的相關(guān)規(guī)定，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實驗倫理委員會批準（倫理審批號：ZUFY20230720）。

1.2" 主要試劑、儀器與藥品

兔抗IL-3、IL-5、TSLP、GM-CSF ELISA試劑盒（批號：RX120014SR、RX1200329R、KQ120755、RX1200012R）均購自泉州市睿信生物科技有限公司；JAK2抗體、STAT5抗體（艾方生物科技有限公司，批號：AF300324、AF300117）；GAPDH抗體（武漢三鷹生物技術(shù)有限公司，批號：10494-1-AP）；辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔二抗（北京博奧森生物技術(shù)有限公司，批號：bs-0295G-HRP）；RIPA裂解液（上海碧云天生物技術(shù)有限公司，批號：P0013B）；BCA蛋白濃度測定試劑盒（北京索萊寶科技有限公司，批號：PC0020）；脫脂奶粉（美國BD公司，批號：232100）；致敏用卵清蛋白（ovalbumin，OVA）（美國Sigma公司，批號：A5503）；磷酸鹽平衡生理鹽水（phosphate balanced solution，PBS）（武漢普諾賽生命科技有限公司，批號：PB180327）；氫氧化鋁（上海麥克林生化科技有限公司，批號：A800852-50）。

粵華超聲霧化儀器（廣東粵華醫(yī)療器械廠有限公司，型號：WH-2000）；2～200 μL精密移液器（德國艾本德公司，型號：3120000259）；酶標儀（美國伯騰儀器有限公司，型號：Synergy H4）；KHB ST-36ET洗板機（上?？迫A實驗系統(tǒng)有限公司，型號：ST-36WT）；電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海躍進醫(yī)療器械有限公司，型號：HDPN-88）。

祛風(fēng)止癢方組成：防風(fēng)10 g，荊芥10 g，川芎10 g，白鮮皮10 g，千里光10 g，地膚子10 g，苦參6 g，薄荷（后下）6 g，冰片（后下）3 g。文火煎煮400 mL收汁冷卻，10層紗布過濾，袋裝密封冷藏備用。每次用注射器將20 mL祛風(fēng)止癢方煎液注入霧化器容器中，用霧化管連接塑料噴嘴。噴霧口正對兔雙眼（兔被兔盒固定），開瞼器撐開雙眼眼瞼接受治療，通過超聲振動使藥液形成霧化分子，到達球結(jié)膜，噴霧口和角膜距離為2～3 cm，開機定時20 min，每天1次。鹽酸奧洛他定滴眼液（比利時愛爾康公司，國藥準字：H20130954，規(guī)格：5 mL/瓶）。

1.3" AC模型建立

根據(jù)隨機數(shù)字表法取9只新西蘭長耳大白兔為對照組，剩余27只參照文獻方法[11]，分別于實驗第0、7天給予實驗兔靜脈注射含OVA（1.8 mg/kg）和佐劑氫氧化鋁（90 mg/kg）的混合物致敏，每只兔每次靜脈注射致敏原2 mL。第8～21天用100 μL含OVA的激發(fā)過敏原（4 mg/mL）溶于PBS（pH=7.2）滴入雙眼，以加強致敏，共激發(fā)14 d。裂隙燈下觀察兔眼前節(jié)，根據(jù)兔眼部癥狀評價模型，可觀察到炎癥表現(xiàn)。造模完成后送回動物房飼養(yǎng)，禁水、禁食12 h。對照組不干預(yù)，飼養(yǎng)過程完全同造模動物一致。

1.4" 動物分組與給藥

將造模成功的27只AC兔隨機分為模型組、奧洛他定組和祛風(fēng)止癢組，另將未做處理的兔設(shè)為對照組，每組9只。對照組及模型組不干預(yù)；奧洛他定組用0.1%鹽酸奧洛他定滴眼液滴雙眼，2次/d，每次1滴；祛風(fēng)止癢組用祛風(fēng)止癢方霧化治療，每天1次，每次20 min。奧洛他定組及祛風(fēng)止癢組連續(xù)給藥14 d。

1.5" 標本采集與檢測

1.5.1" 兔眼部癥狀觀察及評分方法" 在造模11 d進行眼部癥狀評分，固定兔的頭部，拍攝眼部照片。參考MAGONE等[12]評分標準，采用隨機雙盲法對兔眼部結(jié)膜充血、結(jié)膜水腫、分泌物3個指標分別進行AC炎癥評分，根據(jù)無、輕度、中度、重度分別記為0、1、2、3分。

1.5.2" 兔結(jié)膜及眼瞼組織的取材" 末次給藥24 h后，過量麻醉處死動物。沿兔外眥部分離上下眼瞼，顯微鏡下進一步去除眼瞼周圍多余的肌肉、毛發(fā)組織，分離出結(jié)膜及眼瞼組織，放入液氮速凍，轉(zhuǎn)移至-80 ℃條件下凍存?zhèn)溆?。以摘眼球法采血，室溫靜置2 h后于4 ℃、3 000 r/min離心10 min（離心半徑20 cm），吸取上層血清，放入EP管中，置于-80 ℃條件下凍存。

1.6" ELISA檢測兔血清IL-3、IL-5、GM-CSF及結(jié)膜組織TSLP含量

采用ELISA法檢測兔血清IL-3、IL-5、GM-CSF及結(jié)膜組織TSLP含量，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.7" Western blot檢測結(jié)膜組織JAK2、STAT5蛋白表達水平

從兔瞼結(jié)膜組織中提取蛋白，使用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，經(jīng)凝膠、電泳和轉(zhuǎn)膜后，用5%脫脂奶粉室溫封閉2 h，洗膜后分別加入JAK2、STAT5一抗（兔抗，稀釋比例1∶1 000），以及內(nèi)參蛋白β-actin一抗（兔抗，稀釋比例1∶1 000），4 ℃孵育過夜。洗滌3次再加入二抗（山羊抗兔，稀釋比例1∶10 000），室溫孵育1 h，洗滌3次后，化學(xué)發(fā)光顯影并拍照。用Image J軟件對蛋白條帶行灰度分析，目標條帶蛋白水平=目標條帶灰度值/β-actin灰度值。

1.8" 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 27.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析。計量資料采用“ｘ±s”表示，符合正態(tài)分布且方差齊的計量資料，采用方差分析進行多組變量間的相互比較，兩兩比較采用LSD檢驗。不符合正態(tài)分布或方差不齊的計量資料采用Kruskal-Wallis H檢驗。當(dāng)Plt;0.05時，認為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1" AC兔眼前節(jié)變化及Magone評分比較

裂隙燈下觀察兔眼前節(jié)，對照組無明顯炎癥反應(yīng)，眼部睜開自然，眼瞼正常，無溢淚、分泌物，不畏光。模型組造模第11天，出現(xiàn)較明顯的炎癥反應(yīng)，包括結(jié)膜充血、輕度水腫等，眼部睜開稍費力，分泌物呈稀黏液狀；造模第21天，嚴重者可見結(jié)膜明顯充血、瞼裂變小、流淚，分泌物稠黏或成顆粒狀。詳見圖1。

與對照組比較，模型組Magone評分升高（Plt;0.05）；與模型組比較，奧洛他定組及祛風(fēng)止癢組Magone評分下降（Plt;0.05）；奧洛他定組與祛風(fēng)止癢組組間Magone評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。詳見圖2。

2.2" 祛風(fēng)止癢方對AC兔血清IL-3、IL-5、GM-CSF及結(jié)膜組織TSLP含量的影響

與對照組比較，模型組血清IL-3、IL-5、GM-CSF及結(jié)膜組織TSLP含量均升高（Plt;0.05）；與模型組比較，奧洛他定組及祛風(fēng)止癢組血清IL-3、IL-5、GM-CSF及結(jié)膜組織TSLP含量均降低（Plt;0.05）；奧洛他定組與祛風(fēng)止癢組組間血清IL-3、IL-5、GM-CSF及結(jié)膜組織TSLP含量差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（Pgt;0.05）。詳見表1。

2.3" 祛風(fēng)止癢方對AC兔結(jié)膜組織JAK2、STAT5蛋白表達水平的影響

與對照組比較，模型組JAK2、STAT5蛋白表達水平均升高（Plt;0.05）；與模型組比較，奧洛他定組及祛風(fēng)止癢組JAK2、STAT5蛋白表達水平均降低（Plt;0.05）；與奧洛他定組比較，祛風(fēng)止癢組JAK2、STAT5蛋白表達水平均升高（P＜0.05）。詳見表2、圖3。

3 討論

AC是宿主體質(zhì)和環(huán)境因素共同作用下引起免疫失調(diào)而導(dǎo)致結(jié)膜功能障礙的眼部疾病，是一種急性、間歇性或慢性眼表炎癥反應(yīng)[13-15]。根據(jù)研究報道，當(dāng)前一線用藥以合理分級使用抗組胺藥、肥大細胞穩(wěn)定劑和糖皮質(zhì)激素為主，然而不能完全滿足臨床需要，亟須探索新的治療靶點及方案[16]。

AC屬中醫(yī)學(xué)“時復(fù)目癢”“癢若蟲行證”等范疇，歷代醫(yī)家多將其發(fā)病歸于風(fēng)熱外襲、肝血不足致虛風(fēng)內(nèi)動或脾胃濕熱又復(fù)感風(fēng)邪[17]，其中風(fēng)熱外襲是AC最突出的病機。風(fēng)盛、熱盛皆能致腫、致癢，故致胞瞼紅腫、白睛紅赤、目癢難忍。祛風(fēng)止癢方是喻京生教授根據(jù)《審視瑤函·論一字散》中“驅(qū)風(fēng)一字散”加減所制成的中藥復(fù)方。AC多因肺衛(wèi)不固，風(fēng)熱外侵導(dǎo)致，治以祛風(fēng)清熱、祛濕止癢。方中防風(fēng)、川芎、荊芥共為君藥。《本草綱目·風(fēng)濕病癥》載防風(fēng)：“三十六般風(fēng)，去上焦風(fēng)邪，頭目滯氣，經(jīng)絡(luò)留濕，一身骨節(jié)痛。除風(fēng)去濕仙藥。”防風(fēng)合川芎、荊芥，共行祛風(fēng)解表之效。再取白鮮皮、苦參為清熱燥濕之主藥，為臣，其中白鮮皮清熱燥濕，兼有祛風(fēng)止癢之功；苦參燥濕殺蟲，二者相伍外可驅(qū)散熱邪、內(nèi)可清利水濕。薄荷辛涼解表、清利頭目；冰片辛香走竄，能通諸竅而明目；千里光苦寒，能治療風(fēng)熱上攻所導(dǎo)致的目赤腫痛；地膚子祛風(fēng)止癢。以上共為佐藥。

中藥超聲霧化是將傳統(tǒng)中藥熏蒸與現(xiàn)代超聲霧化相結(jié)合而衍生的中醫(yī)外治法，本實驗進行眼表超聲霧化局部短期治療，在劉玲[18]的研究中，其安全性已被驗證。

AC的發(fā)病機制與免疫球蛋白IgE介導(dǎo)的肥大細胞活化及炎癥介質(zhì)的級聯(lián)反應(yīng)密切相關(guān)[19]。此外，Th1/Th2型免疫應(yīng)答反應(yīng)在過敏性炎癥過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用[20]。IL-3與IL-5分別由活化的T細胞和Th2型細胞因子產(chǎn)生；GM-CSF可由自反應(yīng)性T細胞產(chǎn)生。三者具有促進IgE產(chǎn)生、肥大細胞分化以及嗜酸性粒細胞生長、遷移和活化的特點，在炎癥和自身免疫等疾病中發(fā)揮重要作用。TSLP可影響T細胞、Th2細胞的增殖，以及肥大細胞、先天淋巴樣細胞和趨化因子的釋放。本研究結(jié)果顯示，祛風(fēng)止癢方超聲霧化可降低靜脈血清IL-3、IL-5、GM-CSF及結(jié)膜組織TSLP含量，表明祛風(fēng)止癢方可有效干預(yù)Th1/Th2型免疫反應(yīng)。

JAK/STAT是免疫細胞因子受體、炎性信號傳導(dǎo)的重要信號通路[21]，可通過直接介導(dǎo)關(guān)鍵細胞因子與外周感覺神經(jīng)元結(jié)合引起瘙癢，引發(fā)Th2免疫反應(yīng)，導(dǎo)致過敏性疾病[22]。轉(zhuǎn)錄因子STAT5是酪氨酸激酶JAK2的下游物質(zhì)，在信號傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活過程中起重要作用。在發(fā)生結(jié)膜過敏反應(yīng)時，GM-CSF刺激中性粒細胞前體和成熟中性粒細胞產(chǎn)生、增殖，人體內(nèi)的中性粒細胞、嗜酸性粒細胞增多，其與受體結(jié)合能激活釋放IL-3、IL-5等炎癥因子，這些炎癥因子與酪氨酸激酶相關(guān)受體結(jié)合后，可誘導(dǎo)激活結(jié)合于受體亞基上的JAK2，活化的酪氨酸提供停泊位點，使STAT5與受體結(jié)合并在JAK2的作用下被磷酸化活化，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)[23]。另外，研究表明，TSLP在人和小鼠細胞中通過相同的JAK-STAT通路發(fā)出信號[24]，TSLP誘導(dǎo)STAT5磷酸化需要JAK2關(guān)鍵激酶。

目前，公認的研究人類AC發(fā)病機制及藥物治療的動物模型為使用OVA誘導(dǎo)的AC模型[25]。本實驗通過構(gòu)建AC模型發(fā)現(xiàn)，造模第11天，模型組眼部癥狀評分較對照組顯著增加，表明模型建立成功。模型組兔血清IL-3、IL-5、GM-CSF及結(jié)膜組織TSLP含量均較對照組增加。經(jīng)祛風(fēng)止癢方超聲霧化治療后，通過裂隙燈觀察實驗兔眼表炎癥變化，以及檢測結(jié)膜組織中JAK2/STAT5通路相關(guān)蛋白的表達量，均證實祛風(fēng)止癢方超聲霧化的治療發(fā)揮了一定療效。與對照組比較，模型組IL-3、IL-5、GM-CSF、TSLP、JAK2、STAT5的表達均增加；與模型組比較，奧洛他定組與祛風(fēng)止癢組上述指標表達均減少。結(jié)果表明，奧洛他定組及祛風(fēng)止癢組均可有效減輕AC模型兔的炎癥表現(xiàn)。

綜上所述，本實驗從炎癥反應(yīng)角度初步證明祛風(fēng)止癢方可能通過減少炎癥因子生成和釋放，降低JAK2、STAT5蛋白磷酸化水平，進而下調(diào)JAK2/STAT5信號通路表達，抑制結(jié)膜炎癥反應(yīng)，發(fā)揮治療AC的作用。

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