潤目湯熏蒸對水液缺乏型干眼兔淚液分泌、角膜淚腺形態及炎癥相關蛋白表達水平的影響

〔摘要〕 目的 觀察潤目湯中藥熏蒸對水液缺乏型干眼兔淚液分泌、角膜淚腺形態及炎癥相關蛋白表達水平的影響。方法 取健康新西蘭大白兔30只，隨機分為5組（空白對照組、蒸餾水組、陽性對照組、聯合治療組和中藥熏蒸組），每組6只。空白對照組不予處理，其余各組用1%硫酸阿托品眼用凝膠連續滴眼3 d。造模成功后（實驗第4天開始），空白對照組在正常環境中常規喂養。蒸餾水組給予中藥熏蒸治療儀加熱蒸餾水熏蒸眼部對照處理；陽性對照組予以玻璃酸鈉滴眼液滴眼，1次1滴，4次/d；聯合治療組采用潤目湯熏蒸和玻璃酸鈉滴眼液聯合滴眼治療；中藥熏蒸組采用中藥熏蒸治療儀加熱潤目湯水煎液熏蒸眼部，1次/d，15 min/次。同時各組均滴1%硫酸阿托品滴眼液以維持模型，直至實驗結束。在實驗第0、3、7、10、13天分別進行淚液分泌試驗（Schirmer Ⅰ test， SⅠT）、角膜熒光素鈉染色（corneal fluorescein staining， CFS）評分；第3、13天進行角膜共聚焦顯微鏡檢查；第13天處死動物。在光鏡下觀察角膜上皮形態學變化，電鏡下觀察角膜上皮及淚腺組織形態學變化；采用Western blot檢測角膜組織中白細胞介素-1α（interleukin-1α， IL-1α）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）的表達。結果 與空白對照組比較，在第7、10天，蒸餾水組和聯合治療組SⅠT降低（Plt;0.01），各組CFS評分升高（Plt;0.05）；在第13天，蒸餾水組SⅠT降低（Plt;0.01），蒸餾水組和陽性對照組CFS評分升高（Plt;0.05）。與蒸餾水組比較，在第7天，陽性對照組和中藥熏蒸組SⅠT升高（Plt;0.01），聯合治療組CFS評分降低（Plt;0.05）；在第10、13天，陽性對照組、中藥熏蒸組SⅠT升高（Plt;0.01）、CFS評分降低（Plt;0.01）。與陽性對照組比較，在第7天，聯合治療組SⅠT降低（Plt;0.05）；在第10天，聯合治療組CFS升高（Plt;0.05）。與聯合治療組比較，在第7、10天，中藥熏蒸組SⅠT升高（Plt;0.05）。與空白對照組比較，陽性對照組、中藥熏蒸組和聯合治療組兔角膜前基質神經密度有所恢復，細胞形態也接近空白對照組；未見明顯的角膜上皮組織損傷，基底細胞排列整齊，形態與空白對照組接近。聯合治療組淚腺上皮細胞胞漿分泌豐富、角膜完整有序，最接近于空白對照組。與空白對照組比較，蒸餾水組IL-1α和TNF-α表達量升高（Plt;0.01）;與蒸餾水組比較，陽性對照組、中藥熏蒸組和聯合治療組兔角膜中IL-1α表達量下降（Plt;0.01），中藥熏蒸組和聯合治療組TNF-α表達量下降（Plt;0.01）。與陽性對照組比較，中藥熏蒸組和聯合治療組TNF-α表達量下降（Plt;0.05）。結論 潤目湯熏蒸可促進淚液分泌，減少角膜上皮與淚腺組織損傷，降低IL-1α、TNF-α表達，抑制局部炎癥反應。

〔關鍵詞〕 潤目湯；中藥熏蒸；水液缺乏型干眼；炎癥因子；白細胞介素-1α；腫瘤壞死因子-α

〔中圖分類號〕R285.5" " " " "〔文獻標志碼〕A" " " " " 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.11.008

Effects of Runmu Decoction steaming on tear secretion， corneal and lacrimal gland morphology and expressions of inflammation-related proteins in rabbits with aqueous-deficient dry eye

XIE Sijian1， MA Xiaoya1， TANG Yifei2， DU Jiaqi3， FENG Xian4， LAI Juan1， WU Jingtao1，

JIANG Shangping5， PENG Qinghua1*

1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 2. Xi'an Jiaotong University， Xi'an， Shaanxi

710049， China; 3. The Third Xiangya Hospital of Central South University， Changsha， Hunan 410013， China; 4. School of Medicine， Xiamen University， Xiamen， Fujian 361023， China; 5. Ningxiang Hospital of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410000， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To observe the effects of Runmu Decoction steaming on tear secretion， corneal and lacrimal gland morphology， and expression levels of inflammation-related proteins in rabbits with aqueous-deficient dry eye. Methods Thirty healthy New Zealand white rabbits were randomized into blank control group， distilled water group， positive control group， combined treatment group， and Chinese medicine steaming group， with six rabbits in each group. The blank control group received no treatment， while the remaining groups were treated with 1% atropine sulfate ophthalmic gel in the eyes for 3 consecutive days. After successful modeling （starting from the 4th day of the experiment）， the blank control group was fed routinely in a normal environment. The distilled water group was given distilled water that had been heated by a Chinese medicine steaming apparatus for steaming the eyes as a control treatment. The positive control group was treated with sodium hyaluronate eye drops， one drop each time， four times a day. The combined treatment group was treated with both steaming with Runmu Decoction and sodium hyaluronate eye drops. The Chinese medicine steaming group was treated with Runmu Decoction that had been heated for steaming the eyes using the Chinese medicine steaming apparatus for 15 minutes each time， once a day. Meanwhile， 1% atropine sulfate eye drops were administered to all groups to maintain the model until the end of the experiment. Schirmer I test （SIT） and corneal fluorescein sodium staining （CFS） scoring were conducted on the 0th， 3rd， 7th， 10th， and 13th days of the experiment. Corneal confocal microscopy was performed on the 3rd and 13th days. The animals were sacrificed on the 13th day. The morphological changes of the corneal epithelium were observed using a light microscope， and the histomorphological changes of the corneal epithelium and lacrimal glands were observed using an electron microscope. The expression levels of interleukin-1α （IL-1α） and tumor necrosis factor-α （TNF-α） in the corneal tissue were measured by Western blot. Results Compared with the blank control group， on the 7th and 10th days， the SIT values of the distilled water and combined treatment groups decreased （Plt;0.01）， and the CFS scores of all groups increased （Plt;0.05）. On the 13th day， the SIT value of the distilled water group decreased （Plt;0.01）， and the CFS scores of the distilled water and positive control groups increased （Plt;0.05）. Compared with the distilled water group， on the 7th day， the SIT values of the positive control and Chinese medicine steaming groups increased （Plt;0.01）， and the CFS score of the combined treatment group decreased （Plt;0.05）. On the 10th and 13th days， the SIT values of the positive control and Chinese medicine steaming groups increased （Plt;0.01）， while their CFS scores decreased （Plt;0.01）. Compared with the positive control group， on the 7th day， the SIT value of the combined treatment group decreased （Plt;0.05）; on the 10th day， its CFS score increased （Plt;0.05）. Compared with the combined treatment group， on the 7th and 10th days， the SIT value of the Chinese medicine steaming group increased （Plt;0.05）. Compared with the blank control group， the density of corneal anterior stroma nerves in the positive control， Chinese medicine steaming， and combined treatment groups recovered to some extent， and the cell morphology was also close to that of the blank control group. No obvious corneal epithelial tissue damage was observed， and the basal cells were neatly arranged， with the morphology similar to that of the blank control group. The abundant cytoplasmic secretion of the lacrimal glands and intact， orderly corneas of the combined treatment group were the closest to those of the blank control group. Compared with the blank control group， the expression levels of IL-1α and TNF-α in the distilled water group increased （Plt;0.01）. Compared with the distilled water group， the expression level of IL-1α in the corneas of the positive control， Chinese medicine steaming， and combined treatment groups decreased （Plt;0.01）， and that of TNF-α in the Chinese medicine steaming and combined treatment groups decreased （Plt;0.01）. Compared with the positive control group， the expression level of TNF-α in the Chinese medicine steaming and combined treatment groups decreased （Plt;0.05）. Conclusion Steaming with Runmu Decoction can promote tear secretion， reduce the damage to corneal epithelium and lacrimal gland tissue， lower the expressions of IL-1α and TNF-α， and thereby inhibit the local inflammatory reaction.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 Runmu Decoction; Chinese medicine steaming; aqueous-deficient dry eye; inflammatory factors; interleukin-1α; tumor necrosis factor-α

干眼，是由于淚液的量、質或流體動力學異常引起淚膜不穩定和（或）眼表微環境失衡，從而導致眼部不適癥狀及視功能障礙的慢性眼表疾病[1]。干眼常見癥狀包括眼干、眼澀、異物感、畏光、對環境刺激敏感等，很大程度上影響人們的生活質量[2]。干眼還可造成視力下降，繼發感染、角膜潰瘍或穿孔等，可能導致患者出現焦躁不安、抑郁等負面情緒[3]。因此，干眼的治療顯得尤為重要。國內外流行病學報告顯示，全世界干眼的發病率為5%～50%，中國成年人的患病率約為21%，呈逐年上升趨勢[4-5]。西醫治療干眼多選用人工淚液替代療法、抗炎治療、激素替代治療、手術等方法。中醫學認為，干眼屬“白澀證”“神水將枯”“燥證”等范疇，《審視瑤函·內障》謂其“視珠外神水枯澀，而不潤瑩”。中醫療法主要為運用辨證論治方法，調理臟腑氣血，疏通經絡，促進眼周血液循環，包括針刺、中藥內治、中藥外治、針藥結合等。其中，中藥熏蒸是中醫眼科治療干眼的常用外治方法，在促進淚液分泌，緩解眼睛干澀、疼痛，減輕異物及燒灼感等方面效果較為顯著，且具有不良反應少、患者依從性高等優點[6-8]。

炎癥反應是干眼的重要病理機制[9-11]。水樣液缺乏型干眼的主要機制為眼表上皮細胞（角膜上皮和結膜上皮）高滲激活眼表炎癥級聯反應[如激活促絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase， MAPK）和核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）]信號通路，使炎癥細胞因子[如白細胞介素-1α（interleukin-1α，IL-1α）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）]水平升高，加重角膜、結膜炎癥反應，誘發干眼[12-14]。

本研究擬從角膜淚腺形態及炎癥相關蛋白表達水平方面，觀察潤目湯熏蒸法對干眼的影響，并探討其作用機制，為尋求更安全有效的干眼治療方法提供實驗依據。

1 材料

1.1" 實驗動物

3～4月齡健康新西蘭大白兔，雌雄各半，體質量1.5～2.0 kg，常規喂養。動物質量合格證編號：1107301911000007，由湖南太平生物科技有限公司提供，許可證號：SCXK（湘）2015-0004。動物飼養于湖南中醫藥大學實驗動物中心，相對濕度為50%～55%，溫度為21～26 ℃，1籠1兔，普通級兔用飼料自由取食、自由飲水，保持環境干凈、整潔、安靜。本研究經湖南中醫藥大學倫理委員會審查通過，審批號：LLBH-201907230014。

1.2" 藥物

1%硫酸阿托品眼用凝膠（規格：2.5 g/支，沈陽興齊眼藥股份有限公司，國藥準字：H20022295，批號：180801）；玻璃酸鈉滴眼液（0.1%，規格：10 mL，德國烏斯法瑪藥品有限公司，進口藥品注冊證號：H20150150，批號：307662）；熏蒸藥潤目湯由麥冬、當歸、地骨皮、白蒺藜、菊花、桑葉、玫瑰花、鬼針草、冰片組成，中藥均采購于湖南中醫藥大學第一附屬醫院中藥房，參照臨床中醫眼科的熏蒸藥物煎煮方法，利用常壓煎藥機技術[15]，統一規范煎煮而成。

1.3" 主要試劑與儀器

Schirmer試驗濾紙（天津晶明新技術開發有限公司，批號：20150040）；熒光素鈉（廣州明興制藥廠，批號：XY19118）；4%多聚甲醛溶液（武漢賽維爾生物科技有限公司，批號：CR1802175）；2.5%戊二醛固定液（電鏡專用）（飛凈生物科技有限公司，批號：20180918）；小鼠IL-1α單克隆抗體（批號：20010）、小鼠TNF-α單克隆抗體（批號：20161）均購自美國ProMab Biotechnologies公司；β-肌動蛋白（β-actin）單克隆抗體（美國Cell Signaling Technology公司，批號：4790）。

共聚焦顯微鏡自動掃描儀（德國海德堡公司，型號：HRT3）；中藥熏蒸治療儀（河南華康宏力醫療器械有限公司，型號：HKHL-XZ-110）；手持裂隙燈（蘇州六六視覺科技股份有限公司，型號：YZ3）；多功能電泳儀、垂直電泳槽及制膠組件（北京君意東方電泳設備有限公司，型號：JY-600HE、JY-SCZ2+）；多功能熒光成像儀（武漢晶中生物科技有限公司，型號：Odyssey CLX）。

2 方法

2.1" 模型建立、分組及干預

從30只實驗動物中，隨機選取24只，從實驗第1天開始予以1%硫酸阿托品眼用凝膠，每天滴雙眼4次（8：00、12：00、16：00、20：00），每次1滴。實驗第3天進行模型鑒定。采用淚液分泌試驗（Schirmer Ⅰtest， SⅠT）、角膜熒光素鈉染色（corneal fluorescein staining， CFS）評分作為鑒定模型是否建立成功的標準[16-18]。造模成功后，將其分為陽性對照組、中藥熏蒸組、聯合治療組、蒸餾水組，每組6只；另取6只大白兔作為空白對照組。各治療組在造模成功后仍同時滴用1%硫酸阿托品眼用凝膠，每天滴雙眼4次，以維持模型，直至實驗結束。

空白對照組在正常環境中常規喂養。其余組于造模成功后開始給藥，陽性對照組予以玻璃酸鈉滴眼液滴眼，1次1滴，4次/d；中藥熏蒸組采用中藥熏蒸治療儀加熱潤目湯水煎液熏蒸眼部，1次/d，15 min/次；聯合治療組同時采用潤目湯熏蒸和玻璃酸鈉滴眼液滴眼治療，方法同前；蒸餾水組給予中藥熏蒸治療儀加熱蒸餾水熏蒸眼部對照處理。

2.2" 取材

活體檢測之后，麻醉法處死各組動物。每組取1只兔角膜、淚腺固定在4%多聚甲醛中，用于光鏡觀察；每組取1只兔淚腺固定在2.5%戊二醛中，用于電鏡觀察；每組取3只兔角膜，液氮速凍后，-80 ℃保存，用于Western blot法檢測IL-1α與TNF-α表達水平。

2.3" 檢測指標

2.3.1" SⅠT檢測" 各組在干預第0、3、7、10、13天，使用淚液檢測濾紙條檢測淚液分泌量。將紙條一端折彎5 mm，置于下瞼內側1/3結膜囊內，其余部分懸垂于皮膚表面。手動令兔眼閉合5 min后讀取、記錄濾紙濕潤長度（不包括反折部分的長度），測量單位為mm。對每只眼重復測試3次，取其平均值為最終結果。每組檢查均由同一人完成，每次檢查時間、地點、照明亮度、濕度及溫度相同。

2.3.2" CFS評分檢測" 各組在干預第0、3、7、10、13天，將兔固定在保定盒中，用2%液態熒光素滴至結膜囊。手動令兔瞬目使熒光素均勻分布于眼表，固定眼瞼后用裂隙燈對每只眼進行測試，觀察兔角膜上皮是否染色，染色陽性提示角膜上皮細胞的完整性被破壞。熒光素染色評分采用12分法[19]：將角膜分為4個象限，每個象限0～3分。無染色為0分；1～30個點狀著色為1分；大于30個點狀著色但染色為融合為2分；出現角膜點狀著色融合、絲狀物及潰瘍等為3分。選取清晰度良好的照片進行評分，取平均值為最終結果。

2.3.3" 角膜活體共聚焦顯微鏡觀察" 將干眼兔的下頜及前額固定于顯微鏡檢查托架上，用25%烏拉坦麻醉，在物鏡表面涂上唯地息透明凝膠，篩選角膜各層圖像存盤，分別在實驗第3、13天時檢查角膜前基質神經密度和角膜基質細胞形態。

2.3.4" 角膜及淚腺的光鏡觀察" 將兔處死后，取角膜和淚腺組織在4%多聚甲醛溶液中固定24 h，石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察各上皮細胞層和基質層形態。

2.3.5" 淚腺的電鏡觀察" 取部分兔淚腺組織，于2.5%戊二醛固定24 h后，透射電鏡觀察分泌泡形態和超微結構。

2.3.6" IL-1α與TNF-α表達水平檢測" 各組干預后，取兔角膜組織用裂解液裂解，BCA試劑盒分別檢測各組蛋白濃度，按最低濃度配平，加入上樣緩沖液，再置于100 ℃金屬浴加熱10 min，使蛋白充分變性。經電泳、轉膜、封閉后，將膜與一抗IL-1α（1∶1 000）、TNF-α（1∶1 000）和β-actin（1∶8 000）抗體置于4 ℃孵育過夜。用TBST洗膜5次后，將二抗（1∶10 000）與膜置于室溫搖床上孵育1 h。ECL顯影曝光，用Quantity One灰度分析軟件進行圖像定量分析，測定目的蛋白的相對光密度值（integrated optical density， IOD）。以β-actin為內參蛋白，計算目的蛋白IOD與內參蛋白IOD的比值，以此表示蛋白相對含量。

2.4" 統計學分析

采用SPSS 26.0統計學軟件對數據進行分析，實驗數據為計量資料，均采用“ｘ±s”表示。服從正態分布的多組間均數比較采用單因素方差分析，方差齊者進一步兩兩比較采用LSD法，方差不齊者用Dunnet T3檢驗。以Plt;0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1" 各組淚液指標檢測結果

3.1.1" 各組SⅠT比較" 實驗第0天，各組SⅠT差異均無統計學意義（Pgt;0.05）。與空白對照組比較，實驗第3天其余各組SⅠT明顯降低（Plt;0.01），表明模型建立成功。與空白對照組比較，在第7、10天，蒸餾水組、聯合治療組SⅠT降低（Plt;0.01），在第13天，蒸餾水組SⅠT降低（Plt;0.01）。與蒸餾水組比較，在第7天，陽性對照組和中藥熏蒸組SⅠT升高（Plt;0.01）；在第10、13天，陽性對照組、聯合治療組、中藥熏蒸組SⅠT升高（Plt;0.01）。與陽性對照組比較，在第7天，聯合治療組SⅠT降低（Plt;0.05）。與聯合治療組比較，在第7、10天，中藥熏蒸組SⅠT升高（Plt;0.05，Plt;0.01）。詳見表1。

3.1.2" 各組CFS評分比較" 實驗第0天，各組CFS評分差異無統計學意義（Pgt;0.05）。實驗第3天，與空白對照組比較，其余各組CFS評分升高（Plt;0.01），表明模型建立成功。與空白對照組比較，在第7、10天，蒸餾水組、陽性對照組、聯合治療組、中藥熏蒸組CFS評分升高（Plt;0.05，Plt;0.01）；在第13天，蒸餾水組和陽性對照組CFS評分升高（Plt;0.05，Plt;0.01）。與蒸餾水組比較，在第7天，聯合治療組CFS評分降低（Plt;0.05）；第10、13天，陽性對照組和中藥熏蒸組CFS評分降低（Plt;0.01）；第13天，聯合治療組CFS評分降低（Plt;0.01）。與陽性對照組比較，在第10天，聯合治療組CFS評分升高（Plt;0.05）。詳見表2。

由中藥熏蒸組典型大白兔CFS圖片示例可知，中藥熏蒸組在第3天染色最明顯，提示用阿托品造模后的眼表損傷。第7天眼表染色區域顏色變淺，第10天未見明顯染色區域，第13天已無染色區域，提示其眼表損傷已基本恢復。詳見圖1。

3.2" 各組形態學觀察結果

3.2.1" 角膜共聚焦顯微鏡觀察" 空白對照組角膜基質可觀察到粗大、分叉較多的基質神經；蒸餾水組兔角膜中基底下神經纖維密度降低，且角膜基質細胞異形性明顯，說明可能存在高反光的脫屑細胞增多；陽性對照組、聯合治療組和中藥熏蒸組兔角膜前基質神經密度有所恢復，細胞形態也接近空白對照組。詳見圖2。

3.2.2" 角膜光鏡觀察" 空白對照組角膜上皮細胞排列整齊；蒸餾水組可見角膜上皮存在絲狀剝脫，且上皮組織損傷嚴重，基底細胞排列紊亂；而陽性對照組、聯合治療組以及中藥熏蒸組較少見上述損傷，形態與空白對照組接近。詳見圖3。

3.2.3" 淚腺光鏡觀察" 空白對照組淚腺未見腺泡萎縮或腺泡纖維化，未見腺泡周圍纖維化，細胞核周圍和血管周圍未見多形核細胞或淋巴細胞浸潤；蒸餾水組腺泡細胞大小、形態不規則，腺泡細胞存在萎縮，細胞呈聚集狀，部分細胞邊界不清，細胞核形態異常；陽性對照組可見少量腺泡細胞萎縮和纖維化；中藥熏蒸組僅有極少量腺泡細胞萎縮融合；聯合治療組腺泡細胞排列較為整齊緊密，腔內黏液增多，較蒸餾水組改善，最為接近空白對照組。詳見圖4。

3.2.4" 淚腺電鏡觀察" 空白對照組分泌泡數量多、密度大；蒸餾水組分泌泡減少且萎縮，炎癥情況嚴重；陽性對照組分泌泡數量接近蒸餾水組，內質網疏松；中藥熏蒸組分泌泡有融合，相較于蒸餾水組增多，較蒸餾水組改善；聯合治療組分泌泡相比空白對照組增多，排列整齊、緊密，較蒸餾水組顯著改善，最接近空白對照組。詳見圖5。

3.3" "各組兔角膜IL-1α、TNF-α表達量比較

與空白對照組比較，蒸餾水組IL-1α、TNF-α表達量增加（Plt;0.01）。與蒸餾水組比較，陽性對照組、聯合治療組和中藥熏蒸組IL-1α表達量下降（Plt;0.01），聯合治療組和中藥熏蒸組TNF-α表達量下降（Plt;0.01）。與陽性對照組比較，聯合治療組和中藥熏蒸組TNF-α表達量下降（Plt;0.05）。詳見圖6、表3。

4 討論

目前，干眼按照淚液成分或功能可分類為水液缺乏型干眼、脂質異常干眼、淚液動力學異常干眼、黏蛋白異常型干眼和混合型干眼[1]。動物的水液缺乏型干眼模型一般通過局部滴用一定濃度的阿托品制備[16-18]，阿托品通過阻斷乙酰膽堿與M受體結合，抑制副交感神經，導致淚液分泌減少，形成水液缺乏型干眼[19-21]。干眼歸屬于中醫學“白澀癥”“神水將枯”“燥證”等范疇，最早記載見于明代傅仁宇所著的《審視瑤函·白痛》，其載“不腫不赤，爽快不得，沙澀昏朦，名曰白澀”。《證治準繩·雜病·七竅門》描述其“神珠外神水干澀而不瑩潤”，治療上提出“治惟滋陰養水，略帶抑火，以培其本”的原則。六淫邪氣外襲、情志不暢、嗜食肥甘厚膩、熱病后期均可影響臟腑功能，導致氣血津液的生成、輸布失常，從而使目竅受累，引發干眼[14-16]。而久居干燥穢濁之室，勞心勞力，用眼過度，則多表現為陰津耗傷、肺陰虧虛，致使白睛失于濡養。本研究采用經驗方“潤目湯”進行中藥熏蒸，其功效為滋陰潤肺、祛風明目。本方當歸、麥冬為君藥，滋陰養血；臣藥白蒺藜、菊花、桑葉，清肝明目；加玫瑰花、鬼針草以增滋陰清熱、清肝明目之功；借冰片芳香走竄之力，共奏滋陰清熱明目之效。已有研究證明，中藥熏蒸不需要通過機體全身代謝循環而直接作用于眼部，療效更為迅速[22]，其利用現代化的熏蒸設備發揮熱效應的作用，擴張眼部毛細血管，促進血液循環，還在局部發揮中藥藥性，增加藥物在結膜囊中的濃度，共同達到促進淚液分泌、調節炎癥介質消散的目的[22-24]。

炎癥反應是水液缺乏型干眼的關鍵病理機制，已有研究發現，干眼患者中IL-1α和TNF-α等細胞因子水平的高表達可能抑制神經遞質的釋放，導致眼表感覺神經活動減弱，從而使淚液分泌減弱[13-14]。TNF-α是包括炎癥反應在內的許多生理和病理過程中發揮作用的關鍵因子，其高表達可引發眼表的一系列炎癥反應，誘發干眼的發生和發展。

基于上述證據，本研究通過設立5個實驗組，比較不同治法對角膜上皮和淚腺形態學的影響，及對角膜和淚腺組織IL-1α和TNF-α蛋白表達的影響，從而評估潤目湯對干眼的療效。由實驗結果可知，本研究的中藥熏蒸療法在增加淚液分泌方面效果最為顯著，在促進角膜生長愈合方面效果較好，但需經過一定治療周期方能顯現；玻璃酸鈉滴眼液、中藥熏蒸和聯合治療這3種方法均可促進角膜、淚腺細胞生長，可恢復角膜前基質神經密度；單獨使用蒸餾水熏蒸反而會導致淚液分泌減少、角膜上皮細胞和基底細胞受損、淚腺炎癥情況加重，以及引起角膜基質細胞異形，影響淚膜穩定，加重干眼；除蒸餾水組以外，其他組兔角膜中IL-1、TNF-α表達量下降，以中藥熏蒸組下降較為顯著。

綜上所述，本研究發現，潤目湯熏蒸對水液缺乏型干眼兔有明顯療效，且優于玻璃酸鈉滴眼液和聯合治療的效果。潤目湯熏蒸能降低IL-1α和TNF-α水平，從而抑制局部炎癥反應，起到增加淚液分泌、延長淚膜破裂時間等作用，這可能是其治療干眼的有效機制之一。

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