12種生物源藥劑對蘋果斑點落葉病(Alternaria alternata)的防控效果

摘" 要" 為了強化蘋果斑點落葉病生物防控技術，選用12種生物源藥劑，通過菌絲生長速率法和孢子萌發法，對蘋果斑點落葉病病原菌（Alternaria alternata）進行室內毒力測定，并選取其中8種生物源藥劑進行田間防效試驗。室內毒力測定結果表明，12種生物源藥劑對A.alternata菌絲生長和孢子萌發均有不同程度的抑制作用，其中0.3%丁子香酚SL、1%蛇床子素EW、4%小檗堿硫酸鹽SC、3%中生菌素WP、1%申嗪霉素SC、10%多抗霉素WP和1.3%苦參堿AS對A.alternata菌絲生長均有較強的抑制效果，其EC50值為" 0.56～25.59" mg·L-1，對照化學藥劑70%甲基硫菌靈WP的EC50為13.90 mg·L-1；80%乙蒜素EC、" 0.3%丁子香酚SL、1%蛇床子素EW、1.3%苦參堿AS、1%申嗪霉素SC和10億/g哈茨木霉菌DP對" A.alternata分生孢子萌發均具有較強的抑制作用，其EC50值為7.75～89.29 mg·L-1，對照化學藥劑70%甲基硫菌靈WP的EC50值為217.43"" mg·L-1。田間藥效試驗結果表明，0.3%丁子香酚SL、1%蛇床子素EW、1%申嗪霉素SC、10%多抗霉素WP、3%中生菌素WP的防治效果最佳，防效為73.05%～" 79.17%，均優于或接近于對照化學藥劑70%甲基硫菌靈WP的防效74.35%。

關鍵詞" 蘋果；斑點落葉病；生物源藥劑；毒力測定；田間防效

doi：10.7606/j.issn.1004-1389.2024.08.017

https：//doi.org/10.7606/j.issn.1004-1389.2024.08.017

收稿日期：2023-11-15" 修回日期：2024-01-02

基金項目：甘肅省農科院重點研發計劃（2021GAAS07）。

第一作者：翟艷青，女，碩士研究生，研究方向為植物病害及其綜合防治。E-mail：2602641624@qq.com

通信作者：鄭" 果，男，研究員，主要從事植物病害及防控技術研究。E-mail：zhengguo@gsagr.ac.cn

李繼平，男，研究員，主要從事植物病害及防控技術研究。E-mail：gsljp@163.com

蘋果樹（Malus pumila Mill.）屬于薔薇科（Rosaceae）蘋果屬（Malus）植物。別名柰、柰子、平波、頻婆等，原產于歐洲中部、東南部，中西西亞和中國的新疆［1］。現在中國東北、華北、華東等地廣為栽培，栽培歷史已有5 000 a以上［2］，目前在陜西、山東、甘肅、山西、遼寧、河北、河南、新疆、云南、四川等省均有大面積栽培。截止2021年底，甘肅省蘋果種植面積達251.57千hm2，產量達438.36萬t，居全國第三位。隨著蘋果面積的不斷增加，蘋果病蟲害呈現逐年加重現象。蘋果斑點落葉病嚴重影響蘋果的生長發育以及品質和產量，對蘋果產業造成重大的經濟損失，是制約蘋果產業高質量發展的四大病害之一。該病在蘋果種植區普遍發生［3］，主要危害葉片，也危害嫩梢和果實。當前，該病的防治主要以化學藥劑為主［4-5］，生物藥劑防治相對較少［6-8］。長期使用化學藥劑，易引起農殘超標、蘋果品質下降、環境和水源污染［9-11］，并易產生抗藥性；生物藥劑具有環境兼容性好、安全性高、不易產生抗藥性。故本研究對甘肅省蘋果斑點落葉病主要病原菌（Alternaria alternata），在前期病原鑒定的基礎上，開展了12種生物源藥劑室內毒力測定和田間藥效試驗，旨在為蘋果斑點落葉病的生物防控提供依據。

1" 材料與方法

1.1" 試驗材料

1.1.1" 供試菌株" 蘋果斑點落葉病病菌（A.alternata）采自甘肅靜寧，通過柯赫氏法則及形態學和分子生物學鑒定，確定為蘋果斑點落葉病的主要致病菌。

1.1.2" 供試藥劑" 13種供試藥劑及生產企業如表1所示，在配制各種藥劑時，均使用無菌水稀釋。

1.2" 試驗方法

1.2.1" 各供試藥劑對A.alternata菌絲生長速率法測定" 采用菌絲生長速率法［12-13］測定，在無菌條件下，用蒸餾水將13種供試藥劑按不同劑量，配置成不同濃度（表2）。將配制好的藥劑分別加入99 mL、45 ℃ PDA培養基中，以不加藥劑但含等量蒸餾水的PDA培養基作為對照，將菌餅接種到含有不同濃度藥劑的PDA平板上，每個處理3個重復。置于25 ℃培養箱黑暗培養，" 5 d后用十字交叉法測量菌落直徑，計算不同濃度下菌絲生長抑制率。以藥劑濃度對數為自變量（x），抑菌率的幾率值為因變量（y）制作毒力曲線，求出毒力回歸方程y=ax+b，并計算各供試藥劑的EC50值比較大小；

菌絲生長抑制率=［（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對照菌落直徑-菌餅直徑）］×100%

1.2.2" 各供試藥劑對A.alternata孢子萌發抑制率測定" 采用孢子萌發抑制率［14-15］測定，在無菌條件下，用蒸餾水將13種供試藥劑稀釋成如表2所示的濃度，將配制好的藥劑分別加入19 mL、" 45 ℃ PDA培養基中，以不加藥劑但含等量蒸餾水的PDA培養基作為對照。待培養基冷卻后，滴入50 μL蘋果斑點落葉病病菌的孢子懸浮液，用無菌涂布器將孢子懸浮液均勻涂抹后，用打孔器（d=10 mm）打取菌餅置于無菌載玻片上，每種藥劑各濃度設3個重復，在25 ℃黑暗條件下保濕培養24 h后統計分生孢子萌發情況，計算分生孢子抑制率和校正抑制率。孢子萌發的標準為芽管超過分生孢子直徑（短）的一半。

萌發率=已萌發的孢子數/孢子總數×100%

抑制率=（對照組萌發率-處理組萌發率）/對照萌發率×100%

校正抑制率=［（處理組萌發率-對照組萌發率）/（1-對照組萌發率）］×100%

1.2.3" 不同供試藥劑對蘋果斑點落葉病的田間防控試驗" 試驗地概括：試驗設在甘肅省靜寧縣李店鎮郭家村蘋果園，海拔1 585 m，年平均氣溫9 ℃、無霜期159 d、日照時數2 238 h，2022年降水量為503 mm，降雨量偏少，降雨主要集中在10月份。土壤類型為黃綿土，pH 7.2，肥力中等。供試品種為‘紅富士’，樹齡為8～9 a，南北行向，行株距為5 m×4 m。

試驗方法：根據室內菌絲生長和孢子萌發試驗結果，選擇對A.alternata菌絲和孢子萌發均有較高抑制效果的8種生物源藥劑，開展田間防控試驗，以生產中普遍應用的70%甲基硫菌靈WP為對照化學藥劑。試驗共設9個處理，各藥劑使用濃度參照常規推薦最大用量，具體見表3。另設噴灑等量清水的處理為空白對照（CK），共10個處理。每處理重復3次，共30個小區。每小區2棵蘋果樹，隨機排列。分別于2023年6月20日、6月27日、7月4日連續3次用藥，每小區每次噴施配制藥水8 L。每次每小區用藥量見表3。

施藥前按照病害分級標準進行病情指數基數調查，在第3次用藥后14 d進行藥效調查。每棵樹分上、中、下部及東、西、南、北、中5個方位進行調查。每個枝條調查20個葉片，記載葉片的發病程度，并計算出病情指數與校正防效。

病情分級標準：0級，無病斑；1級，病斑面積占葉片面積的10%以下；3級，病斑面積占葉片面積的11%～25%；5級，病斑面積占葉片面積的26%～40%；7級，病斑面積占葉片面積的41%～65%；9級，病斑面積占葉片面積的65%以上。

病葉率=病葉數/調查總葉片數×100%

病情指數=100×∑（某級病葉數×相應級代表值）/（調查總葉數×9）

防治效果=［1-（對照區藥前病情指數×處理區藥后病情指數）/（對照區藥后病情指數×處理區藥前病情指數）］×100%

1.3" 數據分析

用Excel 2016、DPS 9.01數據處理系統等軟件求出毒力回歸方程、相關系數（r）、EC50值" （mg·L-1）及相對防效等，并采用Duncan’s新復極差法進行顯著性分析。

2" 結果與分析

2.1" 各供試藥劑對菌絲生長的抑制效果

13種供試藥劑（含對照化學藥劑）對A.alternata菌絲生長均有不同的抑制作用，各藥劑隨濃度的升高對病原菌菌絲生長的抑制作用逐漸增強，其中0.3%丁子香酚SL的活性最強，EC50值為0.56"" mg·L-1；其次為1%蛇床子素EW、4%小檗堿硫酸鹽SC、3%中生菌素WP、1%申嗪霉素SC、10%多抗霉素WP、1.3%苦參堿AS，EC50依次為5.13 mg·L-1、7.82 mg·L-1、9.81"" mg·L-1、19.50 mg·L-1、23.15 mg·L-1、" 25.59 mg·L-1。其余生物源藥劑的EC50值均高于50.10 mg·L-1。對照化學藥劑70%甲基硫菌靈WP的EC50值為13.90 mg·L-1。13種供試藥劑對菌絲生長的EC50值由小到大依次為0.3%丁子香酚SLlt;1%蛇床子素EWlt;4%小檗堿硫酸鹽SClt;3%中生菌素WPlt;70%甲基硫菌靈WPlt;1%申嗪霉素SClt;10%多抗霉素WPlt;1.3%苦參堿ASlt;80%乙蒜素EClt;4%嘧啶核苷類抗菌素ASlt;10億/g哈茨木霉菌DPlt;6%春雷霉素SLlt;5.0億/mL多粘類芽孢桿菌LD。

各供試藥劑EC50值均在95%置信限內，說明該結果可信度較高。毒力曲線的斜率越大，表明病原菌菌絲生長對該藥劑劑量變化的敏感性越強；斜率越小，則表明病原菌對該藥劑劑量變化的敏感性越弱。4%嘧啶核苷類抗菌素AS毒力曲線的斜率最大，為1.761 6±0.101 3；其次為3%中生菌素WP、1%申嗪霉素SC，斜率依次為" 1.474 5±0.081 1和1.380 7±0.120 3，說明該病原菌菌絲對這3種藥劑劑量變化比較敏感，其他9種藥劑毒力曲線的斜率較小，說明A.alternata對其劑量變化敏感性相對較低（表4）。

2.2" 不同供試藥劑對孢子萌發的抑制效果

13種供試藥劑對A.alternata分生孢子萌發均有不同程度的抑制作用。其中乙蒜素EC抑制效果最好，EC50為7.75" mg·L-1；其次是丁子香酚SL、蛇床子素EW、苦參堿AS、申嗪霉素SC，分生孢子萌發的EC50依次為34.01""" mg·L-1、61.01" mg·L-1、86.10""" mg·L-1和89.29" mg·L-1。其余供試藥劑對孢子萌發EC50均高于410.44" mg·L-1。對照化學藥劑70%甲基硫菌靈WP對孢子萌發EC50值為217.43""" mg·L-1。13種供試藥劑對A.alternata孢子萌發的EC50值由小到大依次為80%乙蒜素" EClt;0.3%丁子香酚SLlt;70%甲基硫菌靈WPlt;1%蛇床子素EWlt;1.3%苦參堿ASlt;1%申嗪霉素SClt;10億/g哈茨木霉菌DPlt;3%中生菌素WPlt;6%春雷霉素SLlt;10%多抗霉素WPlt;4%嘧啶核苷類抗菌素ASlt;5.0億/mL多粘類芽孢桿菌LDlt;4%小檗堿硫酸鹽SC。

各供試藥劑EC50值均在95%置信限內，說明該結果可信度較高。0.3%丁子香酚SL、1%蛇床子素EW毒力曲線的斜率最大，分別為2.618 1±0.473 7、2.542 3±0.135 0；其次是80%乙蒜素EC、1%申嗪霉素SC和10億/g哈茨木霉菌DP，斜率依次為2.057 7±0.268 7，2.024 4±" 0.654 5，1.971 3±0.399 9，說明A.alternata分生孢子對以上5種藥劑劑量變化比較敏感，其他8種藥劑毒力曲線的斜率較小，說明A.alternata分生孢子對其劑量變化敏感性相對較低（表5）。

2.3" 田間試驗

根據A.alternata菌絲生長速率法和孢子萌發法試驗結果，選擇0.3%丁子香酚SL、1%蛇床子素EW、1%申嗪霉素SC、10%多抗霉素WP、80%乙蒜素EC、3%中生菌素WP、1.3%苦參堿AS、10億/g哈茨木霉菌DP 8種效果較好的生物源藥劑和生產中普遍應用的對照化學藥劑70%甲基硫菌靈WP，進行田間防效試驗。

試驗結果顯示，8種生物源藥劑中，10%多抗霉素WP和0.3%丁子香酚SL對蘋果斑點落葉病的田間防效較高，分別為79.17%和77.07%，二者之間無顯著差異，10%多抗霉素WP的防效顯著高于其他供試藥劑。其次為1%蛇床子素EW、1%申嗪霉素SC、70%甲基硫菌靈WP，防效依次為75.64%、74.32%、74.35%，該3種供試藥劑與0.3%丁子香酚SL的防效之間無顯著差異，與3%中生菌素WP的防效亦無顯著差異，但顯著高于其余供試藥劑的防效。該結果表明，10%多抗霉素WP、0.3%丁子香酚SL、1%蛇床子素EW、1%申嗪霉素SC、3%中生菌素WP對蘋果斑點落葉病的田間防效，均高于或接近于70%甲基硫菌靈WP防效（表6）。

3" 結論與討論

本研究通過12種生物源藥劑室內毒力測定及8種生物源藥劑的田間防效試驗，得出10%多抗霉素WP、0.3%丁子香酚SL、1%蛇床子素EW、1%申嗪霉素SC、3%中生菌素WP對蘋果斑點落葉病具有較好的防控效果，可替代生產中普遍應用的70%甲基硫菌靈WP等化學藥劑。

王禮等［16］報道，1%蛇床子素EW對山桐子灰斑病（A.alternata）的EC50為1.57"" mg·L-1，與本研究的EC50值5.13" mg·L-1比較接近。但王禮等［16］報道哈茨木霉菌WP對A.alternata的EC50值22.79 mg·L-1，與本研究的EC50值98.62 mg·L-1差異較大；梁魁景等［8］報道多抗霉素WP和苦參堿AS對蘋果斑點落葉病（A.alternata）的EC50值分別為 "204.48 mg·L-1和239.59" mg·L-1，與本研究相應的EC50值" （23.15 mg·L-1和25.59 mg·L-1）相差較大；分析原因，不同寄主及不同生長環境中的A.alternata有可能對藥劑的毒力敏感度不同。

李瀟等［17］研究報道，申嗪霉素SC對蘋果斑點落葉病的防效達74.07%，與本研究申嗪霉素SC的防控效果74.32%近似。侯琿等［18］研究表明，多抗霉素WP對蘋果斑點落葉病有較好的防治效果；趙國康等［19］通過對比5種植物源藥劑離體葉片保護效果，發現丁子香酚SL離體葉片保護效果顯著高于乙蒜素EC，與本研究的結果基本一致。

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Prevention and Control Effect of Twelve Biological Pesticides on Apple Leaf Spot Disease （Alternaria alternata）

ZHAI Yanqing1，ZHENG Guo 1，2，LI Jiping 1，2，XU Binbin1，

ZHANG Ziqiang1，HUI Nana1，2 and WANG Li2

（1.College of Plant Protection，Gansu Agricultural University，Lanzhou" 730070，China;

2.Institute of Plant Protection，Gansu Academy of Agricultural Sciences，Lanzhou" 730070，China）

Abstract" To enhance the biological prevention and control technology for apple leaf spot disease，twelve biological pesticides were selected to detect their indoor toxicity against Alternaria alternata"" using both the mycelial growth rate method and spore germination method.Eight of these biological pesticides were selected for field control experiments.Laboratory toxicity tests showed that twelve biological pesticides exhibited different degrees of inhibition on mycelial growth and spore germination of A.alternata.Among them，0.3% eugenol SL，1% cetoseed EW，4% berberine sulfate SC，3% mesocin WP，1% Schonazinomycin SC，10% polyamycin WP and 1.3% matrine AS demonstrated significant inhibitory effects on the mycelial growth of A.alternata，with EC50 values ranging from 0.56" to 25.59" mg·L-1 .In comparison，the EC50 value of 70% methylthiomethim WP was 13.90""" mg·L-1.Furthermore，80% ethylallicin EC，0.3% eugenol SL，1% escocetin EW，1.3% matrine AS，1% schonazinomycin SC，and 1 billion/g Trichoderma harzianum DP showed strong inhibitory effects on conidial germination of A.alternata，with EC50 values ranging from 7.75" to 89.29" mg·L-1，and the EC50 values of 70% methylthiomycin WP was 217.43" mg·L-1.Field efficacy trials showed that the control effects of 0.3% eugenol SL，1% cetosinin EW，1% Schonazinomycin SC and 10% polyamycin WP ，3%"" Zhongshengmycin WP were the highest，with control effects ranging from"" 73.05% to 79.17%，all of which were better than or close to the control effect of 70% methylthiomycin WP （74.35%）.

Key words" Apple;Leaf spot disease; Biological pesticides; Toxicity test; Field efficacy

Received"" 2023-11-25""" Returned" 2024-01-02

Foundation item" Key Research and Development Project of Gansu Academy of Agricultural Sciences（No.2021GAAS07）.

First author" ZHAI Yanqing，female，master" student.Research area：plant disease and integrated control.E-mail：2602641624@qq.com

Corresponding"" author" ZHENG Guo，male，research fellow.Research area：plant disease，prevention and control technology.E-mail：zhengguo@gsagr.ac.cn

LI Jiping，male，research fellow.Research area：plant disease，prevention and control technology.E-mail：gsljp@163.com

（責任編輯：郭柏壽" Responsible editor：GUO Baishou）