高效液相色譜法測定葡萄酒中8種著色劑

摘 要：本文采用高效液相色譜法測定葡萄酒中8種著色劑。結果表明，方法的線性關系良好，檢出限均為0.01 mg·L-1，定量限均為0.03 mg·L-1，平均回收率在88.5%～115.2%，相對標準偏差在2.9%～6.3%。

關鍵詞：高效液相色譜法；葡萄酒；著色劑

Determination of 8 Colorants in Wine by High Performance Liquid Chromatography

DENG Peng， HU Yuhong， ZHAO Zhiliang

（Xinjiang Bing 24 Grape Wine Industry Co.， Ltd.， Heshuo 841200， China）

Abstract： In this paper， 8 kinds of colorants in wine were determined by high performance liquid chromatography. The results showed that the linear relationship was good. The limits of detection were 0.01 mg·L-1， the limits of quantitation were 0.03 mg·L-1， the average recoveries were 88.5%～115.2%， and the relative standard deviations were 2.9%～6.3%.

Keywords： high performance liquid chromatography; wine; colorant

葡萄酒作為一種備受喜愛的飲品，其品質和安全性受到廣泛關注[1]。在葡萄酒的生產和銷售過程中，可能存在違規添加著色劑的情況，這不僅違反了相關的食品安全法規，還可能對消費者的健康造成潛在威脅[2]。偶氮玉紅、專利藍、檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍、胭脂紅和日落黃是常見的合成著色劑，由于它們具有改善色澤、增加產品吸引力的作用，個別不法生產者可能會將其非法添加到葡萄酒中。準確測定葡萄酒中這些著色劑的含量對于確保葡萄酒的質量和安全至關重要[3]。傳統的分析方法在檢測這些著色劑時可能存在靈敏度不足、選擇性差或操作煩瑣等問題[4]。高效液相色譜法憑借其高分離效率、高靈敏度以及良好的重現性等優點，已成為分析食品中著色劑的重要方法[5]。它能夠有效地將葡萄酒復雜基質中的多種著色劑分離，并進行準確的定量分析[6]。本研究旨在建立一種高效、準確、靈敏的高效液相色譜法，用于同時測定葡萄酒中偶氮玉紅、專利藍、檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍、胭脂紅和日落黃這8種著色劑的含量，期望為葡萄酒的質量監控和食品安全監管提供可靠的技術支持，以保障消費者能夠飲用安全、合規的葡萄酒產品。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

葡萄酒，蘭州當地市場。

偶氮玉紅（純度≥98.0%），北京壇墨質檢科技有限公司；檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、誘惑紅（標準用量為1.00 mL，純度≥98.0%），北京海岸鴻蒙標準物質技術有限責任公司；乙酸銨（分析純），天津科密歐有限公司；甲醇（色譜純），美國賽默飛公司。

1.2 儀器與設備

高效液相色譜儀（型號：2695），美國Waters公司；光電二極管陣列檢測器（型號：2998），美國Waters公司；超純水機，四川卓越有限公司；渦旋混合器（型號：WirbelMixer），阿斯曼爾科技有限公司；電子天平（型號：ME 204/02），梅特勒-托利多有限公司；冷凍離心機（型號：H-2050R），湖南湘儀實驗室儀器有限公司；水系過濾器（型號：0.22 μm），青島鴻譜生物有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 標準溶液配制

（1）偶氮玉紅和專利藍的標準溶液。精確稱取0.1 g偶氮玉紅和專利藍的標準物質（按純度折算為100%質量），溶解于適量水中，并定容至100.0 mL容量瓶中，得到濃度為1.00 mg·mL-1的標準溶液[7]。

（2）混合標準中間液。精確吸取1.0 mL各著色劑標準溶液（濃度為1.00 mg·mL-1）于10 mL容量瓶中，并定容至刻度線，得到濃度為100.0 mg·L-1的混合標準中間液[8]。

（3）混合標準工作液。不同濃度為后續實驗提供多個標準點，便于構建標準曲線，實現定量分析[9]。精確吸取0.010、0.025、0.050、0.100、0.500、1.000 mL和2.500 mL混合標準中間液于5.0 mL容量瓶中，加水定容至刻度，得到濃度分別為0.2、0.5、1.0、2.0、10.0、20.0 mg·L-1和50.0 mg·L-1的混合標準工作液[10]。

1.3.2 樣品前處理

吸取葡萄酒樣品2.0 mL，加入乙酸銨緩沖溶液2.0 mL（濃度為0.025 mol·L-1，pH=9.0），渦旋混合2 min，8 000 r·min-1離心5 min，取上清液，過0.22 μm濾膜，將處理后的樣品送入儀器進行測定，以獲得葡萄酒中色素的定量數據[11]。

1.3.3 液相色譜條件

Zorbax SB-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱溫：35 ℃；流動相A：0.025 mol·L-1乙酸銨溶液；流動相B：甲醇；流速：1.0 mL·min-1；梯度洗脫程序：0～10 min，88%A；10～15 min，88%→68%A；15～20 min，68%→56%A；20～25 min，56%→20%A；25～30 min，20%→88%A[12]。

1.3.4 標準曲線繪制

將不同濃度的著色劑混合標準溶液進行上機測定，以每個濃度對應的色譜峰面積為縱坐標（y），濃度為橫坐標（x），繪制標準曲線[13]。以3倍信噪比為檢出限，10倍信噪比為定量限[14]。

1.3.5 回收率與精密度

稱取5 g空白葡萄酒樣品，向其中分別添加0.05、0.10、0.50 mg·L-1和1.00 mg·L-1的著色劑標準溶液[15]。按照1.3.2樣品前處理方法進行處理，計算每個濃度水平的平均回收率及相對標準偏差。試驗平行測定6次[16-17]。

2 結果與分析

2.1 標準曲線、相關系數及檢出限

由表1可知，在濃度為0.2～50.0 mg·L-1，8種葡萄酒著色劑線性關系良好，相關系數（R2）均≥0.998 7，檢出限為0.01 mg·L-1，定量限為

0.03 mg·L-1，能夠滿足分析需求。

2.2 回收率與精密度

由表2可知，8種葡萄酒著色劑在不同添加水平下的平均回收率為88.5%～115.2%，相對標準偏差（Relative Standard Deviation，RSD）為2.9%～6.3%。

3 結論

本研究建立了一種高效液相色譜法用于測定葡萄酒中的8種著色劑（偶氮玉紅、檸檬黃、新紅、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃和誘惑紅），該方法具有準確性高、精密度好以及靈敏度能滿足分析要求等優點。8種著色劑在0.2～50.0 mg·L-1線性關系良好，相關系數（R2）均≥0.998 7。在該濃度區間內，利用本實驗所建立的方法，各著色劑的色譜峰面積與濃度之間呈現出高度的線性相關，為準確的定量分析奠定了堅實的基礎。方法檢出限為0.01 mg·L-1，定量限為0.03 mg·L-1。表明該方法能夠有效地檢測出葡萄酒中極低濃度的著色劑，從而可以對葡萄酒中可能存在的微量非法添加著色劑進行精確的定性和定量分析，這對于確保葡萄酒的質量和安全性具有重要意義。8種著色劑在不同添加水平下的平均回收率為88.5%～115.2%。表明該方法在實際樣品分析中能夠準確地測定出樣品中著色劑的含量，在整個分析過程中，樣品處理、儀器測定等環節對測定結果的影響較小，保證了測定結果的準確性。相對標準偏差為2.9%～6.3%，說明本方法具有良好的精密度，能夠為葡萄酒中著色劑的日常檢測提供可靠的技術支持。綜上所述，本研究所建立的高效液相色譜法可作為一種有效的檢測手段，用于葡萄酒中8種著色劑的檢測，為葡萄酒的質量監控和食品安全監管提供可靠的技術保障。

參考文獻

[1]李響麗，范多青，李超，等.高效液相色譜法測定煙用接裝紙中水溶性著色劑[J].中國造紙，2023，42（12）：93-99.

[2]姚譽陽，徐曼，潘春燕，等.全自動固相萃取：高效液相色譜法測定現制飲料中7種合成著色劑[J].食品與機械，2024，40（3）：82-88.

[3]李麗鑫，肖智超，趙云龍，等.固相萃取-高效液相色譜法測定肉及肉制品中9種人工合成著色劑的研究[J].食品與發酵科技，2024，60（3）：112-116.

[4]王文輝.“金胺O”響應型熒光探針的制備及可視化檢測方法構建[D].揚州：揚州大學，2024.

[5]李青松，張雪梅.一種用于測定食品中合成著色劑含量的液相檢測方法[J].中國食品添加劑，2023，34（3）：

296-307.

[6]李廣，李琪，顧敏，等.高效液相色譜法同時檢測葡萄酒中11種人工合成著色劑[J].中國釀造，2024，43（7）：

246-250.

[7]曾豪威，周慶瓊，黃鐵城，等.固相萃取-超高效液相色譜法測定茶葉中11種合成著色劑[J/OL].分析試驗室，1-12[2024-12-13].http：//kns.cnki.net/kcms/detail/11.2017.TF.2024

0518.2103.004.html.

[8]楊芮，范欽杰，盧幫貴，等.高效液相色譜法測定醬鹵肉中11種磺酸基團著色劑[J].糧食與油脂，2024，37（7）：

133-137.

[9]聶磊，周耀斌.高效液相色譜-三重四極桿質譜測定指甲油中4種禁用分散型著色劑的含量[J].香料香精化妝品，2023（6）：179-183.

[10]趙星.化妝品中多種禁用著色劑的高效液相色譜測定方法研究[J].化纖與紡織技術，2024，53（3）：80-82.

[11]韋志超，于喆源，楊博，等.響應面優化QuEChERS-液相色譜串聯質譜法分析茶飲料中合成著色劑[J].甘肅科技，2023，39（10）：39-45.

[12]楊志杰，王丹，王德鋅，等.固相萃取-高效液相色譜法測定食品中8種合成著色劑[J].食品工業，2024，45（10）：323-328.

[13]趙昕，張靜，李東輝，等.高效液相色譜法同時檢測水果加工品中18種食品添加劑[J].食品安全質量檢測學報，2024，15（20）：297-306.

[14]嚴敏，顧娟紅，馮靈方，等.高效液相色譜法同時測定化妝品中7種著色劑[J].化學分析計量，2024，33（8）：

32-37.

[15]咸偉玥，劉瑩，王偉艷，等.液-液分配法快速分離提取飲料中11種合成著色劑的改進研究[J].中國檢驗檢測，2023，31（4）：36-39.

[16]曹張歡，蔣顯鋒，黃子靜，等.四類酒中食品添加劑檢測及基質效應的研究[J].中國食品，2023（16）：138-142.

[17]程畿，章雙雙，王恒，等.高效液相色譜法同時測定大黃魚中5種合成著色劑[J].海峽預防醫學雜志，2024，30（4）：8-11.

基金項目：河北省科學技術廳科技業務項目“葡萄酒品質提升關鍵技術研究與應用”。

作者簡介：鄧彭（1985—），男，新疆巴州人，碩士，工程師。研究方向：食品加工技術。