高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定休閑食品中8種添加劑

摘 要：建立高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定休閑食品中8種添加劑的快速檢測(cè)方法。采用高速離心和冷凍方式進(jìn)行樣品提取，用pH=8.5的甲醇-乙酸銨（0.02 mmol·L-1）作為流動(dòng)相，梯度洗脫，并進(jìn)行加標(biāo)樣品測(cè)定。結(jié)果表明，各目標(biāo)化合物在一定的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R2＞0.998；樣品平均加標(biāo)回收率在80.2%～99.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.7%～2.9%。本方法準(zhǔn)確性較好，能滿足日常監(jiān)管篩查檢測(cè)工作需要。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；添加劑；休閑食品

Simultaneous Determination of 8 Additives in Snack Foods by High Performance Liquid Chromatography

LU Guiying， CHENG Shuilian， HE Changhui

（Yiyang City Commodity Quality Supervision and Inspection Research Institute， Yiyang 413000， China）

Abstract： A rapid detection method for the simultaneous determination of 8 additives in snack foods by high performance liquid chromatography was established. Samples were extracted by high-speed centrifugation and freezing， and methanol-ammonium acetate （0.02 mmol·L-1） as the mobile phase， gradient elution， and spike sample determination. The results showed that the linear relationship between the target compounds was good in a certain concentration range， R2＞0.998， the average recovery rate of the samples was 80.2%～99.5%， and the relative standard deviation was 0.7%～2.9%. This method has good accuracy and can meet the needs of daily supervision screening and testing.

Keywords： high performance liquid chromatography; additive; snack foods

食品添加劑種類繁多，相關(guān)檢測(cè)人員的任務(wù)量較大，開(kāi)發(fā)快速、高通量的檢測(cè)方法成為目前食品添加劑的一個(gè)主要研究方向[1]。常見(jiàn)的食品添加劑檢測(cè)方法有光譜法[2]、氣相色譜法[3]、氣相色譜質(zhì)譜法[4]、液相色譜法[5]和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[6]等。其中，光譜法、氣相色譜法和氣相色譜質(zhì)譜法基于方法本身的局限性，適用的添加劑較少，無(wú)法滿足檢測(cè)需求；液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法基質(zhì)效應(yīng)明顯，且儀器昂貴，運(yùn)行成本較高，基層實(shí)驗(yàn)室難以承擔(dān)；液相色譜法是目前應(yīng)用最為廣泛的食品添加劑檢測(cè)方法之一，但其分析速度較慢、檢測(cè)項(xiàng)目單一，難以滿足快速檢測(cè)的需求；高效液相色譜法是一種高通量、快速定量分析方法，能節(jié)約試驗(yàn)成本和時(shí)間，極大地提高工作效率。基于此，本文采用高效液相色譜法進(jìn)行食品中8種添加劑的檢測(cè)，旨在實(shí)現(xiàn)對(duì)食品中多種添加劑的同時(shí)、快速和準(zhǔn)確檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

休閑食品：麻辣肉制品、麻辣魚制品、麻辣豆制品、麻辣蔬菜制品、麻辣魔芋制品，市售。

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：苯甲酸鈉、山梨酸鉀、糖精鈉、脫氫乙酸鈉、安賽蜜、檸檬黃、日落黃和胭脂紅，含量＞95%，德國(guó)Dr公司；甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）；乙酸銨溶液、甲醇-氨水提取液，自制。

LC-20AT高效液相色譜儀（配自動(dòng)進(jìn)樣器、PDA二極管陣列檢測(cè)器）；SH-Rxi-5MS色譜柱；EV321臺(tái)式離心機(jī)；ZWH-HLWLS1-20超純水處理系統(tǒng)；FA2004B分析天平；AUW-120D分析天平。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 溶液配制

混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.0 mg·mL-1）：分別準(zhǔn)確稱取8種添加劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)5.0～10.0 mg（精確到0.000 1 g），置于10 mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，于4 ℃冰箱保存。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別吸取適量上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用水逐漸稀釋并定容，配制成0.1～50.0 mg·mL-1的系列溶液，于4 ℃條件下保存。

1.2.2 試樣制備

（1）蔬菜原料樣品。用高速分散勻質(zhì)機(jī)勻漿（或者用粉碎機(jī)充分粉碎），準(zhǔn)確稱取2.00 g樣品于50 mL具塞離心管中，加入甲醇-氨水50 mL，渦旋混勻后超聲20 min，于10 000 r·min-1離心10 min。取適量上清液過(guò)0.22 μm濾膜至1 mL進(jìn)樣瓶中，待上機(jī)檢測(cè)。

（2）其他原料樣品。用高速分散勻質(zhì)機(jī)勻漿（或者用粉碎機(jī)充分粉碎），準(zhǔn)確稱取2.00 g樣品于50 mL具塞離心管中，加入甲醇-氨水50 mL，渦旋混勻后超聲30 min，于10 000 r·min-1離心10 min。放入冰箱中冷凍1 h，取出后取適量上清液過(guò)0.22 μm濾膜，待上機(jī)檢測(cè)。

（3）加標(biāo)樣品制備。準(zhǔn)確稱取各類具有代表性的樣品2.00 g于50 mL具塞離心管中，加入一定量的低濃度標(biāo)準(zhǔn)品，按上述方法處理樣品，待上機(jī)檢測(cè)。

1.2.3 色譜條件

C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；柱溫：35 ℃；流速：1.1 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL；流動(dòng)相A：乙酸銨溶液（0.02 mmol·L-1，pH值在8.0～8.5）；流動(dòng)相B：甲醇；洗脫方式：梯度洗脫；洗脫程序：0～11 min，7%B；11～13 min，7%→20%B，而后保持3 min；16～18 min，20%→7%B，而后保持2 min。

2 結(jié)果與分析

2.1 前處理方法優(yōu)化

休閑食品種類繁多，對(duì)于不同類型基質(zhì)，采用的前處理方法不同。亞鐵氰化鉀、乙酸鋅復(fù)合沉淀劑和硫酸鋅沉淀劑可以有效沉淀樣品中的蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)，但對(duì)色素的吸附作用也較大，可能導(dǎo)致回收率偏低。由于甲醇有沉淀蛋白質(zhì)的作用，故本文采用甲醇-氨水進(jìn)行樣品提取，以有效沉淀蛋白質(zhì)，同時(shí)采用高速離心、冷凍的方式，有效降低基質(zhì)中油脂等的影響，從而有效提升定量分析的準(zhǔn)確度和精確度。

2.2 儀器條件優(yōu)化

參考食品添加劑的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法，選擇甲醇-乙酸銨（0.02 mmol·L-1）作為流動(dòng)相，調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH值為8.0～8.5。經(jīng)多次實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，按1.2.3中色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，各目標(biāo)化合物均得到很好的分離，且峰形較好（圖1）。

2.3 方法準(zhǔn)確度考察

在已優(yōu)化的色譜條件下，對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行測(cè)定，以各添加劑的色譜峰面積為縱坐標(biāo)，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到各添加劑的回歸方程、線性關(guān)系見(jiàn)表1。在一定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，各目標(biāo)物質(zhì)的濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系，R2＞0.998；以3倍信噪比和10倍信噪比分別計(jì)算對(duì)應(yīng)目標(biāo)化合物的檢出限和定量限，得出該方法檢出限及定量限均滿足相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)要求。

2.4 加標(biāo)回收試驗(yàn)

選用有代表性的5種樣品（麻辣肉、麻辣魚、豆制品、蔬菜、魔芋制品）各一份，加入標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，制備成5類基質(zhì)加標(biāo)樣品，按照優(yōu)化的提取方法進(jìn)行提取、測(cè)定，計(jì)算各類基質(zhì)樣品中加標(biāo)回收率，平行測(cè)定5次計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（Relative Standard Deviation，RSD），結(jié)果見(jiàn)表2。可以看出，8種組分的加標(biāo)回收率在80.2%～99.5%，RSD在0.7%～2.9%，說(shuō)明該方法的準(zhǔn)確性和精密度較好，可滿足多種添加劑同時(shí)分析測(cè)定的要求。

2.5 實(shí)際樣品檢測(cè)

隨機(jī)采集50種市售樣品（肉制品10個(gè)、魚制品10個(gè)、豆制品10個(gè)、蔬菜制品10個(gè)、魔芋制品10個(gè)），采用本方法對(duì)8種添加劑進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表3。大多數(shù)樣品中添加劑的使用均符合《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）的要求，個(gè)別樣品存在超范圍超限量使用添加劑的現(xiàn)象。

3 結(jié)論

本研究建立了休閑食品中8種常用食品添加劑的高效液相色譜檢測(cè)方法，并通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線、加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)等進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果表明，該方法準(zhǔn)確度、靈敏度較高，分析速度快，可實(shí)現(xiàn)同時(shí)檢測(cè)多種添加劑，節(jié)省了樣品測(cè)量時(shí)間，大大提高了檢測(cè)效率，為休閑食品的日常快速篩查提供了參考依據(jù)。

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