同位素稀釋HPLC-MS法測定爆米花中7種真菌毒素

摘 要：目的：采用同位素稀釋超高效液相色譜-串聯質譜法建立了一種測定爆米花中黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2、伏馬毒素B1、伏馬毒素B2和伏馬毒素B3這7種真菌毒素的方法。方法：樣品用甲酸-水-乙腈（1∶29∶70，體積比）溶液提取，經稀釋、離心、過濾后，取上清液加入一定濃度13C標記的真菌毒素同位素內標溶液，上機測定。結果：7種真菌毒素的線性關系良好，相關系數＞0.999，檢出限為0.3～50.0 μg·kg-1，回收率為72.5%～120.0%，相對標準偏差為2.04%～9.73%。結論：該方法操作簡單、靈敏度高，能夠滿足同時測定爆米花中多種真菌毒素的要求。

關鍵詞：超高效液相色譜-串聯質譜；真菌毒素；爆米花

Determination of Seven Mycotoxins in Popcorn by Isotope Dilution HPLC-MS

WANG Haiping， LI Shuang， LI Hui*， WANG Weiguang， QIN Peng

（Rizhao Center for Disease Control and Prevention， Rizhao 276826， China）

Abstract： Objective： To establish a method for the determination of aflatoxin B1， aflatoxin B2， aflatoxin G1， aflatoxin G2， fumonitoxin B1， fumonitoxin B2 and fumonitoxin B3 in popcorn by isotope dilution ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Method： The samples were extracted from formic acid-water-acetonitrile （1∶29∶70， volume ratio） solution. After dilution， centrifugation and filtration， the supernatant was added into the internal standard solution of mycotoxin isotope labeled with a certain concentration of 13C. Result： The linear relationship of the seven mycotoxins was good， the correlation coefficient was greater than 0.999， the detection limit was 0.3～50.0 μg·kg-1， the recovery rate was 72.5% to 120.0%， and the relative standard deviation was 2.04% to 9.73%. Conclusion： The method is simple and sensitive， and can meet the requirements of simultaneous determination of fungal toxins in popcorn.

Keywords： ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; mycotoxins; popcorn

黃曲霉毒素、伏馬毒素是對人體健康危害極大的真菌毒素，多具有肝臟毒性、神經毒性、致癌性，并可能誘發免疫抑制類疾病[1-3]。爆米花作為一種很方便的零食，備受人們的喜愛。爆米花的食品安全問題越來越受到人們的關注。因此，建立爆米花中黃曲霉毒素、伏馬毒素的檢測方法非常必要。液相色譜串聯質譜法作為較先進的檢測技術，能提供化合物的分子結構信息，具有靈敏度高、能有效去除干擾等優勢[4-7]。本研究建立了適用于同時分析爆米花中黃曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFT B1）、黃曲霉毒素B2（Aflatoxin B2，AFT B2）、黃曲霉毒素G1（Aflatoxin G1，AFT G1）、黃曲霉毒素G2（Aflatoxin G2，AFT G2）、伏馬毒素B1（Fumonitoxin B1，FB1）、伏馬毒素B2（Fumonitoxin B2，FB2）和伏馬毒素B3（Fumonitoxin B3，FB3）的超高效液相色譜-串聯質譜法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2混合標準溶液，中國計量科學研究院；伏馬毒素B1、B2、B3混合標準溶液，青島普瑞邦生物工程有限公司；同位素內標13C17-黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2（13C17-AFT B1、13C17-AFT B2、13C17-AFT G1、13C17-AFT G2），Romer國際貿易（北京）有限公司；13C34-伏馬毒素B1、B2、B3（13C34-FB1、13C34-AFB2、13C34-AFB3），青島普瑞邦生物工程有限公司；甲酸和乙腈，均為色譜純，德國Merck公司；一級水。

1.2 儀器與設備

TSQ Altis超高效液相色譜-質譜聯用儀，美國Thermo公司；ME204電子天平（精度0.1 mg），瑞士梅特勒-托利多公司；CR21N低溫高速離心機，日本日立工機株式會社；Multi Reax混合器，德國海道夫公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 溶液配制

（1）標準儲備液。將黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2混合標準溶液用色譜級乙腈稀釋至0.5 μg·mL-1；將伏馬毒素B1、B2、B3混合標準溶液用色譜級乙腈稀釋至10 μg·mL-1。

（2）混合真菌毒素同位素內標工作液。將各同位素內標標準溶液用乙腈稀釋到所需濃度，其中13C17-黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2濃度為0.01 μg·mL-1，13C34-伏馬毒素B1、B2、B3濃度為0.5 μg·mL-1。

（3）系列標準工作溶液。移取適量標準儲備液，用20%乙腈-水溶液稀釋成不同濃度點的標準工作系列。其中，黃曲霉毒素B1、B2、G1和G2標準溶液的質量濃度為0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 μg·L-1和2.00 μg·L-1，伏馬毒素B1、B2、B3標準溶液的質量濃度為1.0、2.0、4.0、10.0、20.0 μg·L-1和40.0 μg·L-1。

1.3.2 樣品前處理

稱量5 g均質樣品于50 mL離心管中，加入20 mL甲酸-水-乙腈（1∶29∶70，體積比），渦旋振蕩30 min，以10 000 r·min-1離心5 min。分取0.5 mL上清于1.5 mL離心管中，加入1.0 mL水，旋渦混勻后，在4 ℃以10 000 r·min-1離心5 min，取上清液過0.22 μm濾膜。取180 μL處理好的樣品濾液于300 μL內插管中，加入20 μL同位素內標混合溶液，混勻。

1.3.3 儀器條件

（1）色譜條件。流動相A：0.2%甲酸水溶液；流動相B：乙腈；流速：0.3 mL·min-1；進樣體積：5 μL；色譜柱：Waters BEH C18（150 mm×2.1 mm，1.7 μm）；柱溫：40 ℃；梯度洗脫程序：0～1.0 min，流動相A維持在80%；1.0～4.0 min，流動相A從80%降低至60%；4.0～10.0 min，流動相A從60%降低至30%；10.0～11.8 min，流動相A從30%減至0%；11.8～15.0 min，流動相A從0%升至80%。

（2）質譜條件。錐孔電壓：3.0 kV；加熱器溫度：500 ℃；離子源溫度：150 ℃；脫溶劑氣：800 L·h-1。各真菌毒素及其同位素內標的質譜條件見表1。

2 結果與分析

2.1 標準曲線與檢出限

將上述系列標準工作溶液上機測定，記錄儀器響應值，以外標濃度與內標濃度比為橫坐標，以外標峰面積與內標峰面積比為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程與相關系數。以低濃度加標樣品基線噪音的3倍信噪比計算方法檢出限。由表2可知，7種真菌毒素在相應線性范圍內，相關系數均大于0.999。

2.2 加標回收率和精密度

取陰性爆米花樣品，分別向其中添加低、中、高3個濃度水平的混合標準溶液，實驗重復6次，計算回收率及相對標準偏差。由表3可知，7種真菌毒素的平均加標回收率在72.5%～120.0%，相對標準偏差在2.04%～9.73%。

3 結論

本研究建立了同位素稀釋-超高效液相色譜串聯質譜法同時測定爆米花中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2、伏馬毒素B1、B2、B3的檢測方法。該方法的線性關系、檢出限、精密度及準確度均符合標準要求，適用于對爆米花中7種真菌毒素的定量檢測。

參考文獻

[1]程龍，李云飛，吳思超，等.超高效液相色譜-四極桿飛行時間質譜測定三七中九種真菌毒素[J].湖北農業科學，2024，63（6）：187-192.

[2]陸智，李亞賢，劉鳳松，等.QuEChERS結合UPLC-MS/MS同時測定植物固體飲料中13種真菌毒素[J].食品工業科技，2024，45（21）：275-282.

[3]吉麗米娜·阿里木，楊雪麗，李方.我國花生及其制品中黃曲霉毒素B1污染及脫毒技術的研究進展[J].職業與健康，2024，40（19）：2732-2736.

[4]方嘉豪，潘項捷，尹峰，等.QuEChERS-超高效液相色譜-串聯質譜法同時測定薏苡仁中8種真菌毒素含量[J/OL].浙江理工大學學報（自然科學版），1-9[2025-01-12].http：//kns.cnki.net/kcms/detail/33.1338.TS.20241014.1056.040.html.

[5]孫忠偉，汪龍飛，鮑蕾.高效液相色譜-串聯質譜法同時定性和定量檢測牛奶中106種獸藥殘留[J].食品安全質量檢測學報，2024，15（24）：30-41.

[6]吳雪瑩，戴琴，付睿婕，等.高效液相色譜-質譜法測定6種玉米赤霉醇類真菌毒素[J].食品工業，2024，45（7）：296-301.

[7]孫莉，周玉，余義，等.LC-MS/MS測定糧食中黃曲霉毒素B1的方法[J].食品工業，2024，44（7）：125-129.

作者簡介：王海萍（1985—），女，山東日照人，碩士，主管技師。研究方向：食品衛生檢驗。

通信作者：李慧（1977—），女，山東日照人，本科，副主任技師。研究方向：食品衛生檢驗。E-mail： lengli009@163.com。