基于網絡藥理學和實驗驗證探討黃芪耐缺氧的作用機制

摘要：采用網絡藥理學探討黃芪耐缺氧的潛在作用機制。利用中藥系統藥理學數據庫與分析平臺（TraditionalChinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform， TCMSP）結合大量文獻獲取黃芪的主要化學成分及其靶點；通過在線人類孟德爾遺傳數據庫（Online" Mendelian Inheritance in Man， OMIM）、GeneCards、DrugBank 和Uniprot 數據庫篩選耐缺氧相關靶點；利用功能蛋白關聯（STRING）網絡進行蛋白質相互作用（Protein-Protein Interaction， PPI）分析篩選關鍵靶點；采用Metascape 數據庫分析其參與的生物過程及通路；利用分子對接和實驗進行驗證。結果顯示，黃芪有24 個主要有效成分，238 個作用靶點，整合多個數據庫得出耐缺氧靶點1 013 個，兩者相交靶點137 個。基因本體（Gene Ontology， GO）功能富集分析包含生物過程（Biological Process， BP）1 916個，細胞組成（Cellular Component， CC）102 個，分子功能（Molecular Function， MF）176 個，京都基因和基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes" and Genomes， KEGG）通路獲得199 條。篩選得到黃芪耐缺氧核心靶點有血管內皮生長因子A（vascular endothelial growth factor A， VEGFA）、缺氧誘導因子-1α（Hypoxia-inducible factor-1 alpha，HIF-1α）、白細胞介素-6（Interleukin-6， IL-6）等，反推黃芪潛在的活性成分有黃酮和皂苷類成分如槲皮素和黃芪甲苷等。分子對接驗證槲皮素、山柰酚、黃芪皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和黃芪甲苷與VEGFA、HIF-1α 均展現出良好的結合作用。酶聯免疫吸附試驗（Enzyme-Linked Immunosorbent" Assay， ELISA）確證黃芪可通過下調核心靶基因VEGFA的表達發揮抗缺氧作用，果蠅實驗進一步表明黃芪具有耐缺氧作用。本研究初步闡明黃芪中黃酮和皂苷類成分如黃芪甲苷、槲皮素等可通過調控關鍵靶點HIF-1α、VEGFA發揮抗缺氧的作用。研究結果有望為黃芪在典型作業環境（如高原低氧）中的開發應用提供依據。

關鍵詞：網絡藥理學；分子對接；黃芪；耐缺氧；血管內皮生長因子A

中圖分類號：R285.5 文獻標志碼：A 文章編號：0253-2395（2025）02-0226-12

0引言

在需氧生物中，氧張力是組織維持發育的最關鍵生理因素之一。氧氣在能量代謝中起著至關重要的作用，哺乳動物依賴氧氣以產生三磷酸腺苷（Adenosine Triphosphate， ATP），無論是在高海拔地區還是在貧血或肺部疾病的臨床環境中，都易產生缺氧情況［1］。缺氧是指組織中氧氣水平低或不足，與生理和病理狀況有關［2］。機體在缺氧時會產生各種反應，如眩暈、頭疼眼花、耳鳴如潮、四肢無力、心慌、氣急、氣短、呼吸急促和心臟跳動過速等，甚至出現呼吸衰竭，進而可能會危及生命。有研究顯示，輕度缺氧時，機體會通過提高氧氣利用效率和血液運輸能力來緩解缺氧帶來的不適感，如增加組織細胞內膜表面積或線粒體的數量等；然而，嚴重缺氧時，機體的代償反應難以正常進行，致使組織細胞和器官遭受嚴重損傷與功能異常，甚至出現死亡現象［3］。

黃芪，為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，其性味甘而微溫，歸肺、脾兩經，具有補氣升陽，利水消腫，生津養血等功效。黃芪主要活性成分有多糖、皂苷，黃酮等，具有清除自由基、保護細胞結構、抗凋亡和抗氧化的功效［4］。已有研究表明，在缺氧條件下，黃芪多糖可以抑制細胞自噬，促使血管內皮細胞增殖，從而推進新的血管生成［5］。此外，黃芪百合顆粒可以顯著增強肺功能，降低肺的干濕比，減少下游促炎細胞因子的釋放，減輕高原缺氧誘導的肺組織損傷［6］。黃芪總皂苷可通過抑制體內的氧化應激損傷，有效提高超氧化物歧化酶和過氧化氫酶兩種抗氧化酶水平，從而減輕缺氧性肺動脈高壓造成的肺損傷［7］。黃芪總黃酮在缺氧條件下可顯著刺激細胞增殖，促進血管舒張，抑制凋亡，從而舒張缺氧腎上腺素收縮的腸系膜動脈［8］。

缺氧環境可以誘導氧化應激、炎癥反應等，進而對機體組織器官造成損傷，而黃芪則可以減輕這一情況，但其耐缺氧的作用機制尚未清楚。本研究通過網絡藥理學，尋找黃芪中與耐缺氧相關的有效成分，并運用分子對接技術和動物實驗進行驗證，探討黃芪耐缺氧潛在的分子機制。

1網絡藥理學方法

1.1黃芪有效成分和潛在作用靶點的篩選

在中藥系統藥理學數據庫與分析平臺（Traditional Chinese Medicine Systems" PharmacologyDatabase and Analysis Platform， TCMSP）（http：//tcmspw.com/tcmsp.php）在線數據庫中，搜索黃芪，篩選同時滿足口服生物利用度（oralbioavailability，OB）≥30% 和類藥性（drug-likeness，DL）≥0.18 的有效成分，并結合文獻及課題組前期的實驗結果，收集黃芪的有效成分。

在TCMSP 數據庫中收集黃芪有效成分對應的靶點；在PubChem 數據庫中輸入有效成分的化學物質唯一的數字識別號碼（Chemical AbstractsService， CAS），將其轉換為簡化分子線性輸入系統編號（simplified molecular input line entry system，SMILES），隨后在Swiss Target Prediction數據庫中進行搜索，獲取其對應成分的靶點，將獲得的靶點去除重復后進行整合。

1.2耐缺氧相關靶點的收集

通過在線人類孟德爾遺傳數據庫（Online Mendelian Inheritance in Man， OMIM）（https：//omim.org/）等可以獲取疾病靶點的數據庫，以“anti-hypoxia、hypoxia tolerance”作為關鍵詞進行搜索，去除重復靶點進行整合。

1.3收集疾病和藥物共有靶點

將整理后的藥物和疾病蛋白靶點輸入到interactivenn（http：//www. interactivenn. net/）中獲得疾病和藥物共有靶點，并制作韋恩圖。

1.4構建“藥物-化合物-靶點”網絡圖

將藥物名稱、有效成分、靶點信息導入Cytoscape3.8.0 軟件中構建藥物- 有效成分- 靶點網絡。

1.5構建蛋白互作網絡圖和預測活性成分

在STRING 數據庫中（https：//cn.string-db.org/），對共有靶點基因進行蛋白質- 蛋白質相互作用（protein-protein interaction，PPI）分析，采用Cytoscape 3.8.0 軟件對結果進行可視化處理。依據網絡拓撲參數Degree 值篩選出核心靶點，與有效成分靶點進行映射，獲得活性成分。

1.6 GO富集分析和KEGG富集分析

運用Metascape數據庫（https：//metascape.org）對共有靶點進行基因本體（Gene Ontology，GO）分析和京都基因和基因組百科全書（KyotoEncyclopedia of Genes and Genomes， KEGG）通路富集分析，選定物種為“Homo sapiens”，Plt;0.05，獲取排名靠前的生物過程（Biological Process， BP），細胞組成（Cellular Component，CC），分子功能（Molecular" Function， MF）或通路。分析結果進行可視化處理。

1.7分子對接

在TCMSP數據庫搜索核心有效成分，下載3D 結構的mol2 文件；靶蛋白基因從PDB數據庫中下載核心靶點蛋白質結構獲得潛在作用靶點的sdf 文件，利用OpenBabel 2.4.1將黃芪有效成分和潛在作用靶點3D結構的sdf文件轉化為mol2格式。采用AutoDock Tools 1.5.6 軟件，分別將小分子及蛋白質結構進行加氫、去水等操作，設置為配體及受體并保存為pdbqt 文件。對接盒子的大小由配體和受體的大小及結合位點決定，設置合適的對接盒子大小后進行多次半柔性對接，選擇最低結合能時的模式進行分析，使用PyMOL 進行可視化。

2驗證實驗

2.1黃芪對缺氧小鼠耐缺氧相關蛋白表達的影響

2.1.1藥品制備

山西渾源黃芪（仿野生蒙古黃芪），購自山西北岳神耆生物科技有限公司，經山西大學中醫藥現代研究中心秦雪梅教授鑒定為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.） Bge.var. mongholicus（Bge.）Hsiao 的干燥根。

黃芪水提物制備：取黃芪適量，浸泡8 h，分別以10 倍和8 倍量的水，分兩次回流提取，每次提取2 h，最終濃縮為1 g·mL-1，冷凍在-20 ℃儲存，于給藥前稀釋至合適濃度。

2.1.2實驗動物分組及造模

選取雄性昆明小鼠，體質量18 g～20 g，共21 只（北京華阜康，許可證號：SCXK（京）2019-0008）。正式試驗前適應性飼養3 d，溫度：22 ℃～24 ℃ ；濕度30%～40%；給予自由飲食和交替12 h 光照，均在常氧環境中飼養。將小鼠隨機分為3 組，每組7 只：正常對照組（C）、模型組（M）、黃芪給藥組（HQ）。HQ 組每天進行灌胃給藥處理（860mg/kg·bw），C 組、M 組小鼠需灌胃相應的生理鹽水。常氧條件下灌胃預防性給藥14 d，第15 天動物放入高原低壓低氧模擬艙中，模擬海拔4 000 m，灌胃給藥21 d，每12 h 明暗交替；第36 d 在低氧環境進行90 min自由游泳實驗。游泳結束后撈出，毛巾擦干，將小鼠麻醉后，眼球取血，用EP 管收集血液后，放置于4 ℃ 冰箱中靜置2 h，用高速冷凍離心機以10 000 r/min 離心10 min，取上清液于EP 管中，放置于-80 ℃ 低溫冰箱中凍存備用。小鼠摘眼球取血完成后頸椎脫位處死，取小鼠肝臟液氮速凍后分裝，放置于-80 ℃ 低溫冰箱中凍存備用。上述實驗符合軍事醫學研究院實驗動物倫理委員會指導原則（福利倫理審查編號：IACUC of AMMS-04-2022-042）。

2.1.3 ELISA法檢測大鼠肝臟、血清中總VEGFA水平

取小鼠血清、肝臟組織，嚴格按照試劑盒說明書操作，采用酶聯免疫吸附試驗（Enzyme-Linked" Immunosorbent Assay， ELISA）法檢測血清和肝臟中血管內皮生長因子A（vascular endothelialgrowth factor A， VEGFA）水平。

2.2渾源黃芪對缺氧果蠅耐缺氧能力的影響

2.2.1黃芪凍干粉制備

取“2.1.1”項下黃芪水提物放置于真空冷凍干燥機內凍干，凍干后研磨為粉狀，放置干燥器內備用。

2.2.2培養基的制備

基礎培養基的配制步驟：稱取85g的玉米粉和70g的蔗糖，從1000mL純水中取出少量并攪拌溶解。將剩余的純水加入電飯鍋煮沸，取適量沸騰的純水將18g的酵母粉溶解，隨后向鍋中加入瓊脂并攪拌均勻，待重新沸騰后，加入玉米粉和蔗糖混合后的溶液，邊加邊攪拌以防粘鍋，等再次沸騰后，加入酵母粉溶液并攪拌均勻，將鍋調為保溫，最后加入5mL的丙酸，充分攪拌使之混勻。

用藥培養基的配制方法：將黃芪凍干粉加入已配好的基礎培養基中，并快速攪拌混勻使凍干粉完全溶解。制成含1.25mg/mL 的黃芪凍干粉的用藥培養基。

2.2.3實驗分組

收集72h內羽化的雄果蠅，隨機分為3組，C（空白組）、M（模型組）、HQ（黃芪給藥組），每組果蠅數不得少于100只，每管25只左右。在0d—14d的時候為基礎培養，每3天換一次培養基，在15d—20d的時候為給藥培養，按1.25mg/mL的給藥量培養6d，培養環境溫度大約為25℃，濕度大約為70%。最后一天給藥后2h，做常壓耐缺氧實驗和攀爬實驗，繼而觀察給藥后5d的死亡情況。

2.2.4常壓耐缺氧實驗

最后1d給藥后，將所有果蠅換至空EP管內，并用薄紗布封口，隨后將其放入充滿CO₂的塑料盒（先放入厭氧包0.5h使盒中氧氣被吸收完全）中密封2h，在無氧條件下果蠅會逐漸喪失正常的活動力，并倒在薄紗布處。實驗結束后，將果蠅轉移到基礎培養基中，使其恢復到正常狀態，記錄并統計果蠅5d內的死亡數。之后每隔3d換一次管。

2.2.5攀爬實驗

完成常壓耐缺氧實驗后，果蠅恢復4h～6h后，將果蠅放入透明塑料長管（透明塑料長管為19cm，小于1cm 記為1，此后每隔2cm 為一個擋位），讓其適應5min，輕拍管子震蕩使果蠅全部落于管底，開始計時2min，果蠅因負趨地性會向上攀爬，隨后記錄管中每段高度果蠅的數量，進行統計分析。攀爬試驗連續測量3次，每次間隔20min。

2.3統計學分析

采用Graph Pad 9.5.0（GraphPad Software，American）分析，數據用均值± 標準差表示，通過評估數據正態性以及方差齊性，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t 檢驗，Plt;0.05 表示有統計學意義。

3 結果

3.1黃芪有效成分和潛在作用靶點的收集

藥物有效成分經OB≥30% 和DL≥0.18條件篩選后，從TCMSP數據庫中查找到黃芪有效成分20個，靶點462個，其中3個有效成分需要通過PubChem 和SMILES 數據庫進行靶點搜索。在文獻和課題組前期的實驗結果中，查找到黃芪有效成分12個。刪去重復，共得到24個黃芪有效成分，如表1 所示。通過Uniprot 數據庫將整理后的有效成分靶點蛋白名轉換為基因名，刪除無法對應的靶點和重復值，進行整合得到238 個潛在的作用靶點。

3.2疾病靶點的獲取

通過GeneCards、OMIM、Uniprot 和Drug?Bank數據庫檢索獲得的耐缺氧相關靶點數量分別為3 705、30、36 和156 個，通過去重整合共得到1013個與耐缺氧相關的靶點。黃芪和耐缺氧靶點融合后獲得137個交集靶點，結果如圖1所示。

3.3共有靶點獲取及網絡“藥物-化合物-靶點”構建

使用Cytoscape 3.8.0軟件將黃芪的24個有效成分與248個構建藥物-化合物-靶點的拓撲網絡，由圖2所示可見，黃芪的一個有效成分可作用于多個靶點，同時一個靶點也可以和多個成分產生關聯，表明黃芪通過多成分、多靶點協同發揮耐缺氧作用。

3.4蛋白互作網絡圖及活性成分預測

利用STRING平臺構建藥物與疾病交集靶點的PPI網絡，共有137個節點，2922條邊，可視化后如圖3 所示。依據網絡拓撲參數Degree值，排名前10的靶點依次為蛋白激酶B（v-aktmurine thymoma viral" oncogene homolog 1，AKT1）、白細胞介素-6（Interleukin-6， IL-6）、腫瘤壞死因子（Tumor" Necrosis Factor， TNF）、腫瘤蛋白53（Tumor Protein 53， TP53）、VEGFA、胱天蛋白酶3（Caspase-3， CASP3）、白細胞介素-1β（Interleukin-1 beta， IL-1β）、表皮生長因子受體（Epidermal Growth Factor Receptor， EGFR）、缺氧誘導因子-1α（Hypoxia-inducible factor-1 alpha，HIF-1α）、前列腺素內過氧化物合成酶2（Prostaglandin-endoperoxide synthase 2， PTGS2），如表2 所示。將前10 個核心靶點與黃芪有效成分靶點進行映射，得到黃芪耐缺氧的潛在活性成分有：黃芪甲苷、槲皮素、山柰酚、黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ和黃芪皂苷Ⅲ。

3.5 GO富集分析

利用Metascape 平臺進行富集分析，共篩選與BP相關的有1916條，CC 102條，MF 176條；按P 值排序，分別選取BP、CC、MF 排名前10的GO條目作圖，結果見圖4；BP 主要涉及細胞對氮化合物、無機物質、化學應激反應、缺氧以及對激素的反應等；CC主要涉及膜囊泡、膜微區、質膜、囊腔、軸突等；MF 主要富集在DNA 結合轉錄因子結合、RNA聚合酶Ⅱ特異性DNA結合轉錄因子結合、蛋白激酶結合、轉錄因子結合、磷酸轉移酶活性等。

3.6 KEGG富集分析

KEGG通路分析得到199條黃芪耐缺氧的通路，選取排名前20 的通路作圖，結果如圖5所示，主要包括P13K-Akt 信號通路、IL-17 信號通路、TNF 信號通路、缺氧誘導因子-1信號通路等，提示上述通路可能是黃芪發揮耐缺氧作用的關鍵通路。

3.7分子對接驗證結果

根據網絡藥理學得到的核心靶點結合文獻調研發現，VEGFA、HIF-1α 與耐缺氧關系密切，選擇缺氧關鍵靶點VEGFA 和HIF-1α 與黃芪主要活性成分進行分子對接驗證。結合能反映小分子與靶蛋白的結合情況；結合能lt;0，說明小分子與靶蛋白可以結合，數值越小，結合的概率越高，驗證結果如表3 所示。結果顯示，VEGFA 與HIF-1α 和黃芪主要活性成分均有很好的結合作用，且VEGFA 與活性成分的結合作用強于HIF-1α 與活性成分的結合作用。同時，在篩選到的黃酮類成分中，槲皮素和VEGFA與HIF-1α 的結合作用強于山柰酚；在篩選到的皂苷類成分中，黃芪甲苷和VEGFA 與HIF-1α 的結合作用強于黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ、黃芪皂苷Ⅲ。部分活性成分與核心靶點的分子對接圖如圖6 所示。

3.8 ELISA檢測結果

研究表明，缺氧時HIF-1α高表達，同時其下游靶點VEGF水平顯著增加，因此在本研究中選擇VEGFA 進行后續實驗驗證。與空白組相比，模型組大鼠血清和肝臟中VEGFA含量均顯著升高（**Plt;0.01）；與模型組相比，黃芪給藥組血清和肝臟中VEGFA 含量均有不同程度降低（****Plt;0.001 或**Plt;0.01），如圖7 所示。結果提示，黃芪中活性成分可能通過降低VEGFA 含量發揮耐缺氧的作用。

3.9攀爬實驗結果

空白、模型和給藥組果蠅多居于下部，但組間沒有明顯的變化趨勢；與空白組相比，模型組果蠅中部占比高于空白組，多居于中下部，表明缺氧條件可使果蠅的攀爬能力降低；與模型組相比，黃芪給藥組的上部果蠅占比顯著高于模型組（*Plt;0.05），如圖8 所示，說明黃芪可緩解缺氧導致的攀爬能力減弱的情況。

3.10死亡率

與空白組相比，模型組在第5 天的死亡數急劇增加，表明造模成功；與模型組相比，黃芪給藥組果蠅在第5 天的死亡情況有所降低。如圖9 所示，說明黃芪可緩解由缺氧造成的死亡情況。

4討論與結論

在存在缺氧壓力的情況下，哺乳動物細胞會激活一系列下游途徑，主要包括缺氧誘導因子（HIF）、自噬、哺乳動物靶蛋白雷帕霉素等能量代謝途徑，以及內質網應激等細胞應激途徑［9-10］ 。缺氧不僅限制活動能力，還可引起心、肺、腦損傷，影響生命健康，因此開展有效提升耐缺氧能力的藥物研究具有重要意義。黃芪具有補氣的功效，含黃芪的藥方常用于治療缺氧損傷，但其耐缺氧的機制尚未明確。因此本研究運用網絡藥理學技術篩選黃芪發揮耐缺氧的活性成分、靶點及通路，并結合分子對接和動物實驗進行初步驗證，為黃芪在提高缺氧耐受能力的應用提供依據。

本研究預測性篩選出黃芪24個有效成分以及238個靶點，將黃芪的238個靶點與1013個耐缺氧相關靶點取交集，得出137個共有關鍵靶點，其中位于蛋白質- 蛋白質相互作用網絡中心的有VEGFA、HIF-1α、IL-6 等。缺氧誘導因子（HIF-1α）是一種氧依賴性轉錄激活因子［11］，HIF 可參與血管生成，血管張力，金屬轉運，糖酵解，線粒體功能，細胞生長和存活等生命過程，表明HIF 在氧穩態中的核心作用［12］。缺氧環境下，通心絡可以通過提高HIF蛋白表達水平，進而發揮抗凋亡作用，從而改善血管內皮細胞缺氧損傷［13］。在缺氧性肺動脈高壓期間，線粒體自噬在缺氧的肺組織中上調，缺氧線粒體自噬受體介導的線粒體自噬可通過活性氧-缺氧誘導因子1α（Reactive oxygen species-Hypoxia-inducible" factor 1α， ROS-HIF1α）通路并促進肺動脈平滑肌細胞增殖，最終導致肺血管重塑［14］。靶組織相應缺氧產生的VEGF，是血管發育和穩態的主要調節因子，VEGF 基因的轉錄受HIF 控制［15］。有研究表明，HIF-1α 和VEGFA 可參與缺血缺氧腦卒中血管再生，表現其強大的抗氧化活性［16］。另外，VEGFA 被證實對缺氧復氧成骨細胞損傷有明顯的保護作用［17］。缺氧會導致很多炎癥介質的釋放，且缺氧程度越重，炎癥介質釋放量增加。其中TNF- α、IL-6、IL-1β 是缺氧性組織損傷中的重要介質。有研究表明，知母皂苷B 通過抑制缺氧/復氧損傷星形膠質細胞的炎癥始動因子TNF- α 的表達，下調水通道蛋白4（Aquaporin-4， AQP-4）和IL-6、IL-1β、TNF- α 的分泌，減輕腦缺血/再灌注損傷的癥狀［18］。AKT1 是細胞存活和增殖的重要基因，過表達AKT1 的間充質肝細胞在缺氧/復氧條件下表現出更高的存活率和心臟分化，并有效改善了缺氧/復氧誘導的心肌細胞凋亡［19］。本研究發現，與空白組比較，模型組小鼠血清和肝臟中VEGFA 含量均顯著升高；與模型組相比，黃芪給藥組血清和肝臟中VEGFA 均有不同程度降低。果蠅實驗進一步表明，黃芪可緩解果蠅缺氧狀態。結果提示，黃芪中活性成分可改善小鼠缺氧狀態，可能與調控VEGFA有關。

KEGG富集分析發現多條與黃芪耐缺氧相關的信號通路，包括癌癥途徑、IL-17 信號通路、缺氧誘導因子-1信號通路等。此外，活性成分預測和分子對接驗證結果顯示黃酮和皂苷類成分與VEGFA 和HIF-1α 均有較好的結合作用，其中黃芪甲苷和槲皮素具有更好的結合作用。有研究報道，黃芪甲苷通過作用于HIF-1α相關通路，改善野百合堿引起的大鼠氧化應激進而減輕肺功能損傷［20］。亦有研究發現，黃芪甲苷可改善因長期缺氧誘發海馬神經元和空間學習與記憶的損傷，該作用與減輕氧化應激并抑制細胞凋亡密切相關［21］。另外，黃芪甲苷被報道刺激并穩定缺氧損傷的H9c2 心肌細胞中HIF-1α 的表達，從而增強H9c2 細胞的活力并減少細胞凋亡［22］。據報道，槲皮素可通過沉默調節蛋白1/跨膜BAX 抑制因子6（Silent InformationRegulator 1/ransmembrane BAX inhibitormotif containing 6， SIRT1/TMBIM6）通路調節線粒體自噬和內質網應激并抑制缺氧/復氧誘導的氧化應激損傷［23］。同時，在一項缺血缺氧性引起的退行性改變和炎癥的研究中，槲皮素被發現可減少氧化應激，上調HIF-1α 和VEGF的表達［24］。另外，在抗心肌細胞缺氧/復氧損傷的研究中，乳酸脫氫酶（Lactate" Dehydrogenase，LDH）含量可作為損傷程度判定的指標，槲皮素被證實能明顯降低細胞LDH的釋放，降低細胞內一氧化氮（NO）含量，從而改善缺氧復氧損傷后的細胞存活率，提示槲皮素可能通過NO相關通路對心肌細胞缺氧復氧損傷起到保護作用［25］。本研究中，分子對接結果發現，黃芪中皂苷類和黃酮類成分與HIF-1α 和VEGFA均具有較好的結合作用，推測黃芪皂苷類和黃酮類成分如甲苷、槲皮素等在耐缺氧中發揮關鍵作用，具體可能通過調控HIF/VEGF信號通路實現。

本研究采用體外分子對接及體內動物實驗對網絡藥理學預測結果進行了初步的驗證，雖已明確黃芪具有確切的耐缺氧作用，且黃芪皂苷類和黃酮類成分如甲苷、槲皮素等關鍵活性成分可能通過調控HIF-1α 和VEGFA 等發揮作用，然而這些活性成分能否提高實驗大鼠耐缺氧能力需要后期實驗支撐。另外，黃芪的多靶點調控作用仍需大量分子生物學實驗驗證。