柴胡桂枝湯抗抑郁的網(wǎng)絡(luò)藥理與孟德爾隨機(jī)化研究

摘要：本研究旨在綜合運用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、孟德爾隨機(jī)化分析及分子對接技術(shù)，深入探究柴胡桂枝湯在治療抑郁癥過程中的具體作用機(jī)制。首先，我們系統(tǒng)性地收集了柴胡桂枝湯的藥物靶點與抑郁癥的疾病靶點，通過交集靶點基因分析及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用篩選，以確定兩者共有的關(guān)鍵靶點。隨后，利用基因本體（Gene Ontology，GO）功能分析和京都基因和基因組百科全書（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）通路富集分析，深入解析這些靶點所涉及的生物途徑。為初步驗證篩選出的核心靶點，我們采用了分子對接技術(shù)。此外，還借助OpenGWAS（開放全基因組關(guān)聯(lián)研究）數(shù)據(jù)庫的孟德爾隨機(jī)化方法，對篩選結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步的驗證與深化。研究結(jié)果顯示，我們共識別出193 個柴胡桂枝湯的主要活性成分，并篩選出了30個潛在的作用靶點，這些靶點可能與柴胡桂枝湯治療抑郁癥的效果密切相關(guān)。分子對接技術(shù)的運用進(jìn)一步證實，F(xiàn)ormononetin（芒柄花素）、Isorhamnetin（異鼠李素）、QuercetinQuercetin（槲皮素）、StigmasterolStigmasterol（豆甾醇）和Wogonin Wogonin（漢黃芩素）等活性成分與TNF（Tumor Necrosis Factor，腫瘤壞死因子）、AKT1（AKT Serine/Threonine Kinase 1，AKT絲氨酸/蘇氨酸激酶1）、IL6（Interleukin-6，白細(xì)胞介素6）、IL1BIL1B（Interleukin-1 Beta，白細(xì)胞介素1β）和PTGS2（Prostaglandin-EndoperoxideSynthase 2，前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2）等靶點具有較好的親和力。在孟德爾隨機(jī)化分析中，我們針對AKT1和IL1B靶點，在全基因組關(guān)聯(lián)分析數(shù)據(jù)中分別發(fā)現(xiàn)了10個和17 個與抑郁癥相關(guān)的單核苷酸多態(tài)性（均Plt; 5×10^-5）。經(jīng)過嚴(yán)格篩選，我們保留了7個和15 個單核苷酸多態(tài)性用于最終的孟德爾隨機(jī)化分析。分析結(jié)果表明，AKT1 和IL1B極有可能是抑郁癥治療的關(guān)鍵靶點。本研究表明，柴胡桂枝湯通過作用于TNF、AKT1、IL6、IL1B和PTGS2等靶點，在治療抑郁癥方面發(fā)揮著重要作用。這一發(fā)現(xiàn)為柴胡桂枝湯在抑郁癥治療領(lǐng)域的臨床應(yīng)用提供了堅實的理論基礎(chǔ)和研究方向。

關(guān)鍵詞：柴胡桂枝湯；抑郁癥；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；孟德爾隨機(jī)化；分子對接

中圖分類號：R96 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：0253-2395（2025）02-0289-13

0引言

抑郁癥作為一種常見的心境障礙，其核心癥狀包括持續(xù)的情緒低落和愉悅感缺失，嚴(yán)重影響患者的日常生活和工作效率［1］。在全球范圍內(nèi)，抑郁癥的患病率逐年上升，給社會和家庭帶來了沉重的負(fù)擔(dān)［2］。盡管現(xiàn)代醫(yī)學(xué)在抑郁癥的治療上取得了一定的進(jìn)展，但仍存在諸多挑戰(zhàn)，如藥物副作用、療效個體差異等問題［3］。抑郁癥不僅嚴(yán)重影響患者的心理健康和生活質(zhì)量，還可能導(dǎo)致社交功能障礙、職業(yè)能力下降等后果。盡管現(xiàn)代醫(yī)學(xué)在抑郁癥治療方面取得了一定進(jìn)展，但現(xiàn)有藥物普遍存在副作用大、療效不穩(wěn)定等問題，因此，探索更為安全有效的治療手段顯得尤為重要。

柴胡桂枝湯作為傳統(tǒng)中醫(yī)藥的經(jīng)典方劑，在臨床治療抑郁癥方面顯示出廣泛的應(yīng)用潛力［4-9］。其多成分、多靶點的作用特點，與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對抑郁癥復(fù)雜病理機(jī)制的認(rèn)識相契合。然而，柴胡桂枝湯治療抑郁癥的具體分子機(jī)制尚不完全明確，限制了其在臨床應(yīng)用中的進(jìn)一步發(fā)展。

近年來，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、分子對接技術(shù)和孟德爾隨機(jī)化分析等生物信息學(xué)方法的發(fā)展，為深入研究中藥復(fù)方的作用機(jī)制提供了新的工具和途徑。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)能夠系統(tǒng)地揭示藥物成分與疾病靶點之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)［10-11］，分子對接技術(shù)可以預(yù)測藥物成分與靶點之間的結(jié)合親和力［12-13］，而孟德爾隨機(jī)化分析［14-18］則為因果關(guān)系的推斷提供了強(qiáng)有力的統(tǒng)計學(xué)證據(jù)。

本項研究綜合運用多種先進(jìn)方法，旨在深入探究柴胡桂枝湯在治療抑郁癥中的分子作用機(jī)制，以期為傳統(tǒng)中醫(yī)藥在抑郁癥治療領(lǐng)域的應(yīng)用提供堅實的科學(xué)基礎(chǔ)，并為開發(fā)新型抗抑郁藥物提供潛在的靶點和策略。通過系統(tǒng)地收集柴胡桂枝湯的藥物作用靶點以及抑郁癥的病理靶點，通過蛋白質(zhì)- 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)篩選，精確識別出兩者共有的關(guān)鍵作用靶點。進(jìn)一步利用基因本體（Gene Ontology， GO）功能分析和京都基因和基因組百科全書（Kyoto Encyclopediaof Genes and Genomes， KEGG）通路富集分析，深入解析這些靶點所涉及的生物學(xué)途徑，為初步篩選出的核心靶點提供了科學(xué)依據(jù)。為了驗證這些靶點的有效性，本研究采用了分子對接技術(shù)進(jìn)行初步驗證。同時，借助OpenGWAS 數(shù)據(jù)庫的孟德爾隨機(jī)化方法，對篩選結(jié)果進(jìn)行了進(jìn)一步的驗證與深化。本研究的發(fā)現(xiàn)將揭示柴胡桂枝湯治療抑郁癥的關(guān)鍵作用靶點和信號通路，為推動中醫(yī)藥的現(xiàn)代化和國際化進(jìn)程貢獻(xiàn)力量。

1材料與方法

1.1柴胡桂枝湯有效活性成分及作用靶點的收集

利用TCMSP 數(shù)據(jù)庫［19］（中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺，https：//old.tcmsp-e.com/tcmsp.php）的related targets 功能，系統(tǒng)地收集了柴胡桂枝湯各中藥成分的相關(guān)靶點，經(jīng)過篩選和去重后，最終得到253 個藥物潛在靶點，預(yù)測柴胡桂枝湯中柴胡、桂枝、黃芩、白芍、太子參、半夏、甘草、生姜、大棗九味中藥的化學(xué)成分。在檢索結(jié)果中以口服生物利用度（OB）≥30%、藥物相似性（DL）≥0.18 作為篩選條件，以確保所選成分的生物活性和藥物動力學(xué)特性，最后得到193 個有高度活性的關(guān)鍵化合物成分。

1.2抑郁癥相關(guān)疾病靶點的獲取

以“Depression”和“Depressive disorder”為疾病關(guān)鍵詞，在GeneCards 數(shù)據(jù)庫［7］（https：//www.genecards.org/）和OMIM 數(shù)據(jù)庫（https：//www.omim.org/）兩個數(shù)據(jù)庫中檢索與抑郁癥疾病相關(guān)的靶標(biāo)基因。之后將從兩個數(shù)據(jù)庫中獲得的疾病相關(guān)基因進(jìn)行合并去重，最終得到有關(guān)抑郁癥的疾病靶點。

1.3柴胡桂枝湯治療抑郁癥的核心靶點的篩選

通過Venny 2.1.0 在線平臺（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/）將所獲取的柴胡桂枝湯主要活性成分對應(yīng)的靶點和抑郁癥的疾病靶點取交集，最終得到柴胡桂枝湯治療抑郁癥的潛在作用靶點，并繪制韋恩圖。

1.4蛋白相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析

將上述柴胡桂枝湯治療抑郁癥的潛在作用靶點信息導(dǎo)入String 數(shù)據(jù)庫［20］（https：//stringdb.org/， Version 11.0），選擇“Multiple proteins”，再將“Organisms”設(shè)置為“Homo sapiens”，進(jìn)行蛋白質(zhì)- 蛋白質(zhì)的相互作用分析并獲得蛋白相互作用信息，保存為TSV 格式文件。之后將含有Node1、Node2 和Combined score 信息的文件導(dǎo)入Cytoscape 3.10.0 軟件進(jìn)行拓?fù)浞治觯苑治霭悬c之間的相互作用關(guān)系。

1.5富集分析

為了進(jìn)一步表征柴胡桂枝湯中主要活性成分治療抑郁癥的潛在靶點基因在基因功能和信號通路中的作用，本文通過David 數(shù)據(jù)庫（https：//david.ncifcrf.gov/home.jsp）對柴胡桂枝湯治療抑郁癥的潛在靶點進(jìn)行KEGG 信號通路富集分析和GO 功能富集分析。最后通過微生信在線作圖平臺（http：//www. bioinformatics.com.cn/）將富集分析的結(jié)果進(jìn)行可視化。

1.6“中藥-主要活性成分-交集靶點-信號通路-疾病”網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

為了篩選出最具代表性的信號通路，我們根據(jù)KEGG 通路富集分析的P 值進(jìn)行排序，并選擇P 值最小的前10 條通路進(jìn)行深入分析，收集與其對應(yīng)的靶點數(shù)據(jù)信息，并與柴胡桂枝湯主要活性成分和疾病的交集靶點的文件導(dǎo)入Cytoscape 3.10.0 軟件中以構(gòu)建“中藥-主要活性成分- 交集靶點- 信號通路- 疾病”網(wǎng)絡(luò)圖。并通過Network Analyzer 對各節(jié)點度值、介數(shù)中心性、接近中心性等網(wǎng)絡(luò)圖拓?fù)鋮?shù)進(jìn)行分析計算，進(jìn)一步獲得柴胡桂枝湯治療抑郁癥的重要活性成分和核心靶點。

1.7分子對接評估

將網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析計算所篩選得到的重要活性成分和核心靶點進(jìn)行分子對接，以驗證重要活性成分和核心靶點之間的潛在作用關(guān)系。采用PDB數(shù)據(jù)庫（https：//www.rcsb.org/）獲取目標(biāo)蛋白的“PDB”格式文件，并將導(dǎo)入PyMol軟件中進(jìn)行加氫、去水、調(diào)整電荷等處理。通過PubChem數(shù)據(jù)庫（https：//pubchem. ncbi. nlm.nih.gov/）獲取重要活性成分的三維結(jié)構(gòu)。最后將受體和配體信息導(dǎo)入AutoDocktools 1.5.7 中進(jìn)行分子對接，分子對接分析采用AutoDocktools1.5.7 軟件進(jìn)行，通過調(diào)整格點大小、能量評估參數(shù)等以確保對接結(jié)果的準(zhǔn)確性，并使用Pymol. 6.1 軟件對分子對接結(jié)果進(jìn)行可視化分析［8］。

1.8孟德爾隨機(jī)化分析

基于分子對接的分析結(jié)果，在 National Libraryof Medicine （https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/？term）數(shù)據(jù)庫分別輸入檢索詞“TNF”獲得腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor；GWAS ID：ENSG00000232810，樣品量14 236）的全基因組關(guān)聯(lián)分析（Genome-wide association analysis，GWAS）數(shù)據(jù)；“AKT1”獲得AKT 絲氨酸/蘇氨酸激酶1（AKT serine/threonine kinase 1 ；GWASID：ENSG00000142208，樣品量30 721）的全基因組關(guān)聯(lián)分析（Genome-wide association analysis，GWAS）數(shù)據(jù)；“IL6”獲得白細(xì)胞介素6（interleukin6；GWAS ID：ENSG00000136244，樣品量30 765）的全基因組關(guān)聯(lián)分析（Genome-wideassociation analysis，GWAS）數(shù)據(jù)；“IL1B”獲得白細(xì)胞介素1β（interleukin 1 beta；GWAS ID：ENSG00000125538，樣品量31 684）的全基因組關(guān)聯(lián)分析（Genome-wide association analysis，GWAS）數(shù)據(jù)；“PTGS2”獲得前列腺素- 內(nèi)過氧化物合酶2（prostaglandin-endoperoxide synthase ；GWAS ID：ENSG00000073756，樣品量31 470）的全基因組關(guān)聯(lián)分析（Genome-wide associationanalysis，GWAS）數(shù)據(jù)，并獲取抑郁癥（GWASID：ebi-a-GCST003769，樣品量180 866）的GWAS 數(shù)據(jù)。用MR Egger、加權(quán)中位數(shù)、逆方差加權(quán)（IVW）、眾數(shù)、加權(quán)眾數(shù)進(jìn)行雙樣本孟德爾隨機(jī)化因果性分析［21］。分析的工具變量為單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNPs），每個暴露因素（核心靶點基因）相關(guān)聯(lián)的工具變量的選取標(biāo)準(zhǔn)如下：①關(guān)聯(lián)性假設(shè)： SNP 與暴露因素之間是強(qiáng)相關(guān)的。②獨立性假設(shè)： SNP 與混雜因素之間是獨立的。③排他性假設(shè)： SNP 只能通過暴露因素對結(jié)局產(chǎn)生作用。

2結(jié)果

2. 1柴胡桂枝湯有效活性成分及作用靶點的收集

利用TCMSP 數(shù)據(jù)庫（中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺，https：//old.tcmsp-e.com/tcmsp.php）的related targets功能，系統(tǒng)地收集了柴胡桂枝湯各中藥成分的相關(guān)靶點，經(jīng)過篩選和去重后，最終得到253 個藥物潛在靶點。在TCMSP數(shù)據(jù)庫中對柴胡桂枝湯的化學(xué)成分進(jìn)行檢索，并結(jié)合OB值和DL 值對化學(xué)成分進(jìn)行篩選，最終篩選得到主要活性成分：柴胡17個，桂枝8個，黃芩36個，白芍13個，半夏13個，太子參8個，生姜5個，大棗29個，甘草92個，去重后得到193種化合物。

2. 2抑郁癥相關(guān)疾病靶點的篩選

利用GeneCards 數(shù)據(jù)庫和OMIM 數(shù)據(jù)庫分別收集到抑郁癥相關(guān)靶點11176和260個。去掉重復(fù)值后，得到2 730 個與抑郁癥相關(guān)的疾病靶點。

2. 3柴胡桂枝湯治療抑郁癥核心靶點的篩選

利用Venny 2.1.0將柴胡桂枝湯的253個藥物潛在靶點與抑郁癥疾病相關(guān)的2 730 個靶點取交集，完成韋恩圖的繪制，最終得到140個共同作用靶點（圖1）。

2. 4構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)圖

將上述柴胡桂枝湯治療抑郁癥的潛在作用靶點信息導(dǎo)入String數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行蛋白質(zhì)- 蛋白質(zhì)的相互作用分析，并保留Node1、Node2、Combined score的文件導(dǎo)入Cytoscape 3.10.0中進(jìn)行可視化PPI 網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建。結(jié)果如圖2 所示，PPI 網(wǎng)絡(luò)圖中共包含30 個節(jié)點，388 條邊，平均度值為70.1。選取度值排名前5 的靶點視為核心靶點，分別為TNF（Degree=96）、AKT1（Degree=95）、IL6（Degree=92）、IL1B（Degree=91）和PTGS2（Degree=86）。

2. 5 GO富集分析和KEGG富集分析

將140個交集靶點輸入至David 數(shù)據(jù)庫進(jìn)行GO 富集和KEGG 通路分析（錯誤發(fā)現(xiàn)率，F(xiàn)alseDiscovery Rate，F(xiàn)DRlt;0.01），并用微生信在線作圖平臺對分析結(jié)果進(jìn)行可視化。富集分析結(jié)果如下：

GO富集分析（圖3） 生物過程共有670 個結(jié)果，主要集中于RNA 聚合酶II 正調(diào)控轉(zhuǎn)錄（Positive regulation of transcription by RNA polymeraseII）、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)（Signal" transduction）、DNA模板轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控（Positive regulation of" DNAtemplatedtranscription）、基因表達(dá)的正向調(diào)控（Positive regulation of gene" expression）、對外來刺激的反應(yīng)（Response to xenobiotic stimulus）、凋亡過程（Apoptotic process）、RNA 聚合酶II 對轉(zhuǎn)錄的調(diào)控（Regulation of transcription by" RNApolymerase II）、正向調(diào)控MAPK 級聯(lián)（Positiveregulation of MAPK cascade）、RNA 聚合酶II 負(fù)調(diào)控轉(zhuǎn)錄（Negative regulation of transcription byRNA polymerase II）、凋亡過程負(fù)向調(diào)控（Negativeregulation of apoptotic process）等過程；細(xì)胞組成（Cellular Component， CC）共有84 個結(jié)果，主要集中于等離子體膜（Plasma membrane）、胞質(zhì)（Cytosol）、核（Nucleus）、細(xì)胞質(zhì)（Cytoplasm）、膜（Membrane）等方面；分子功能共有139 個結(jié)果，主要集中于蛋白質(zhì)結(jié)合（Proteinbinding）、同源蛋白質(zhì)結(jié)合（Identical protein binding）、酶結(jié)合（Enzyme binding）等功能。

KEGG富集分析（圖4） 按照顯著性進(jìn)行排序，柴胡桂枝湯治療抑郁癥主要涉及AGERAGE信號通路在糖尿病并發(fā)癥中的作用（AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications）、脂質(zhì)和動脈粥樣硬化（Lipid and atherosclerosis）、癌癥通路（Pathways" in cancer）、流體剪切應(yīng)力與動脈粥樣硬化（Fluid shear stressand atherosclerosis）、化學(xué)致癌-受體活化（Chemicalcarcinogenesis-receptor activation）、乙型肝炎（Hepatitis B）、IL-17 信號通路（IL-17 signalingpathway）、前列腺癌（Prostate cancer）、卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染（Kaposi sarcoma-associatedherpesvirus infection）、丙型肝炎（Hepatitis C）等信號通路。

2. 6 中藥-主要活性成分-交集靶點-信號通路-疾病”網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

如圖5 所示，網(wǎng)絡(luò)圖共包含352 個節(jié)點和1 192 條邊。網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)分析結(jié)果如表1所示，F(xiàn)ormononetin、Isorhamnetin、Quercetin、Stigmasterol和Wogonin 為柴胡桂枝湯治療抑郁癥的重要活性成分；TNF、AKT1、IL6、ILIβ 和PTGS2為柴胡桂枝湯治療抑郁癥的核心靶點。

2. 7分子對接結(jié)果

將篩選得到的排名前五的重要活性成分和核心靶點進(jìn)行分子對接，以驗證重要活性成分和核心靶點之間潛在的作用關(guān)系。結(jié)果如表2 所示，分子對接結(jié)果的結(jié)合能均小于-5 kcal/mol（1 kcal=4. 184 kJ），表明重要活性成分與核心靶點之間的結(jié)合活性較好，結(jié)果可靠，且從中選取分子對接結(jié)果氫鍵數(shù)大于1 的結(jié)合構(gòu)象進(jìn)行可視化展示（圖6）。其中，TNF 與柴胡桂枝湯中Formononetin 的結(jié)合和AKT1 與柴胡桂枝湯中Quercetin 的結(jié)合最為穩(wěn)定，結(jié)合能均為-9. 6 kcal/mol，表明柴胡桂枝湯可能通過TNF受體和AKT1 受體發(fā)揮治療抑郁癥的作用。

2. 8孟德爾隨機(jī)化分析

在AKT1 的GAWS 數(shù)據(jù)中，有10 個SNPs與抑郁癥相關(guān)（均Plt;5×10^-5）其中9 個SNPs 可用于抑郁癥GAWS 分析。在排除具有連鎖不平衡（r²lt;0.001，kb=10 000）的SNPs 后，仍有7 個SNPs 可用于孟德爾隨機(jī)化分析森林圖［圖7 （a）］和散點圖［（圖7（b）］，均顯示出KT1 對抑郁癥有負(fù)相關(guān)因果關(guān)系的趨勢，留一法圖（圖7 C）顯示因果關(guān)系穩(wěn)定。結(jié)果顯示，在MR Egger、加權(quán)中位數(shù)、逆方差加權(quán)（IVW）、眾數(shù)、加權(quán)眾數(shù)分析中，AKT1 對抑郁癥有負(fù)相關(guān)的因果關(guān)系，比值比（OR）為0.953 （95% CI：0. 915～0. 990，P=0. 021）（表3），支持AKT1對抑郁癥治療效應(yīng)。

在IL1β 的GAWS數(shù)據(jù)中，有19 個SNPs 與抑郁癥相關(guān)（均Plt;5×10^-5）其中17個SNPs 可用于抑郁癥GAWS分析。在排除具有連鎖不平衡（r²lt; 0.001，kb=10000）的SNPs 后，仍有15個SNPs 可用于孟德爾隨機(jī)化分析森林圖［圖8（a）］和散點圖［圖8（b）］均顯示出KT1 對抑郁癥有負(fù)相關(guān)因果關(guān)系的趨勢，留一法圖［圖8（c）］顯示因果關(guān)系穩(wěn)定。結(jié)果顯示，在MR Egger、加權(quán)中位數(shù)、逆方差加權(quán)（IVW）、眾數(shù)、加權(quán)眾數(shù)分析中，IL1β 對抑郁癥有正相關(guān)的因果關(guān)系，比值比（OR）1.026 （95% CI：1.001～1.051，P = 0.045）（表4），支持IL1B 對抑郁癥治療效應(yīng)。

3討論

抑郁癥是一種以持續(xù)性情緒低落和缺乏愉悅感為核心癥狀的心境障礙，它嚴(yán)重干擾患者的日常生活和工作能力。柴胡桂枝湯臨床應(yīng)用廣泛，為深入研究其治療抑郁癥的作用機(jī)制，本文通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)、分子對接技術(shù)和孟德爾隨機(jī)化分析［22］，系統(tǒng)研究了柴胡桂枝湯治療抑郁癥的分子機(jī)制，為傳統(tǒng)中醫(yī)藥治療抑郁癥提供了科學(xué)依據(jù)。研究結(jié)果表明，柴胡桂枝湯通過其多種活性成分作用于特定的生物靶點，如TNF（腫瘤壞死因子tumor necrosis factor）、AKT1（AKT 絲氨酸/蘇氨酸激酶1 AKT serine/threonine kinase 1）、IL6（白細(xì)胞介素6 interleukin6）、IL1β（白細(xì)胞介素1βinterleukin 1 beta）和PTGS2（前列腺素- 內(nèi)過氧化物合酶2 prostaglandin-endoperoxide synthase 2），進(jìn)而調(diào)節(jié)相關(guān)信號通路，發(fā)揮其抗抑郁作用。

首先，從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的角度分析，我們篩選出了柴胡桂枝湯的193 種主要活性成分，并確定了這些成分與抑郁癥相關(guān)靶點的交集，揭示了柴胡桂枝湯多成分、多靶點的治療特點。這一發(fā)現(xiàn)不僅驗證了中醫(yī)藥“整體觀念”和“辨證論治”的理論基礎(chǔ)，也為中藥復(fù)雜體系的研究提供了新的思路和方法。進(jìn)一步通過PPI 網(wǎng)絡(luò)分析，我們確定了TNF、AKT1、IL6、IL1β 和PTGS2 為核心靶點，這些靶點在細(xì)胞信號傳導(dǎo)、炎癥反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，揭示了柴胡桂枝湯治療抑郁癥的多途徑協(xié)同作用機(jī)制。

其次，經(jīng)過文獻(xiàn)查詢驗證芒柄花黃素（formononetin，F(xiàn)MN）可能通過抑制脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞活化，減輕海馬神經(jīng)炎癥，改善小鼠的抑郁樣行為［23］；槲皮素（Quercetin），植物甾醇（Stigmasterol）［24］，漢黃芩素（Wogonin）［25］有抗抑郁作用。Benedetti 等［26］評估了幾種促炎細(xì)胞因子（包括TNF）的外周水平檢查，作為評估抗抑郁治療成功的預(yù)測方法，認(rèn)為TNF 升高與較差的治療結(jié)局相關(guān)；Zhang 等［27］認(rèn)為AKT1 等靶點可以通過PI3K-Akt 信號通路、泛素介導(dǎo)的蛋白水解、雌激素信號通路、MAPK 信號通路、TGF- β 信號通路來作用于抑郁癥。分子對接技術(shù)的應(yīng)用為柴胡桂枝湯中活性成分與核心靶點之間的相互作用提供了直觀證據(jù)。結(jié)果顯示，F(xiàn)ormononetin、Isorhamnetin、Quercetin、Stigmasterol 和Wogonin等活性成分與核心靶點具有較好的親和力，進(jìn)一步驗證了網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的預(yù)測結(jié)果。特別是TNF 與Formononetin、AKT1 與Quercetin 的結(jié)合能最低，表明這些成分可能通過直接作用于這些靶點發(fā)揮抗抑郁作用。

最后，孟德爾隨機(jī)化分析為我們提供了因果推斷的有力證據(jù)。通過全基因組關(guān)聯(lián)研究數(shù)據(jù)，我們發(fā)現(xiàn)AKT1 和IL1β 與抑郁癥之間存在顯著的因果關(guān)系，其中AKT1 對抑郁癥有負(fù)相關(guān)的因果關(guān)系，而IL1β 則表現(xiàn)為正相關(guān)。這一發(fā)現(xiàn)不僅支持了網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對接技術(shù)的結(jié)果，也進(jìn)一步證實了AKT1 和IL1β 在抑郁癥發(fā)病和治療中的重要作用。通過孟德爾隨機(jī)化分析，我們能夠更準(zhǔn)確地理解這些靶點與抑郁癥之間的潛在關(guān)聯(lián)，為柴胡桂枝湯的臨床應(yīng)用提供了更加堅實的理論基礎(chǔ)。

綜上所述，本研究綜合運用多種生物信息學(xué)方法，深入探討了柴胡桂枝湯治療抑郁癥的分子機(jī)制，為中醫(yī)藥治療抑郁癥提供了新的科學(xué)證據(jù)和理論支持。未來，我們將繼續(xù)深入探索這些靶點的具體作用機(jī)制，以期開發(fā)出更加安全、有效的抗抑郁藥物。

盡管本研究揭示了柴胡桂枝湯治療抑郁癥的潛在分子機(jī)制，但仍存在一些局限性，如未考慮不同活性成分之間的協(xié)同作用、在不同人群中的適用性差異等。未來研究可進(jìn)一步探討這些問題，并加強(qiáng)對柴胡桂枝湯安全性的評估，特別是在長期和大規(guī)模應(yīng)用中的潛在風(fēng)險。