食品微生物檢驗中大腸桿菌快速檢測方式探究

關鍵詞：食品微生物檢驗，大腸桿菌，快速檢測方式，陽性檢出率

0引言

大腸桿菌是人體腸道內重要的正常菌群，當人體免疫力低下時，大腸桿菌可侵入腸道外組織，成為機會致病菌并引起腸道外感染[1]。在食品中可存在大腸桿菌，但具有一定要求，當超出標準后說明食品污染，不可進行食用，避免引起胃腸炎。若飲食不潔導致大腸桿菌感染，患者會出現惡心、腹瀉等癥狀，對患者身心健康有不良影響[2]。為減少此類情況出現，對食品進行微生物檢驗具有重要意義，但不同檢測方式可見不同效果。基于此，本研究選取2023年1月至2024年9月期間煙臺市某超市、農貿市場100份食品樣品為調查對象，探討食品微生物檢驗中大腸桿菌快速檢測方式。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2023年1月至2024年9月期間煙臺市某超市、農貿市場100份食品樣品，其中，蔬菜類有25份，乳制品有25份，水產品有25份，面制品有25份。

納入標準：（1）所選食品樣本均在保質期內；（2）未經污染的食品；（3）各項信息、標準均記錄完整食品。

排除標準：（1）變質食品；（2）過期食品。

1.2方法

對100份食品樣品分別進行免疫磁珠與斑點免疫層析法檢測、免疫磁珠與PCR快速檢測處理。

免疫磁珠與斑點免疫層析法檢測操作如下：（1）試劑配制。10%新生霉素mEC、山梨醇麥康凱瓊脂、頭孢拉定、亞碲酸鉀、PBS、Tween20。（2）增菌培養。取食品樣品25g，蔬菜類與面制品均需剪碎處理，將其放入225mL無菌稀釋液均質杯內，以8000r/min均質處理，以此獲得均質液。取5g樣品，將其接種到10%新生霉素mEC增菌液中，搖勻后放到恒溫搖床上，于37℃條件下振蕩培養6h。（3）斑點免疫層析法。使用專用棉拭子蘸取樣品增菌液，將其插入EHE檢測卡內的加樣孔內，等待10min，之后讀取檢測結果，結果判定如下：只在質控帶上出現紅色條帶表示不存在相關抗原，且實驗正確，在測試帶與質控帶各有一條紅色條帶表示存在相關抗原，若無紅色條帶出現說明實驗失敗。（4）免疫磁珠法。根據斑點免疫層析法的結果將樣品增菌液分為陽性與陰性兩組，每組均取1mL的增菌液分別放入EP管（1.5mL）中，且各加入20μL的免疫磁珠，進行振搖處理，時長30min；使用磁鐵板吸附沉淀免疫磁珠，將上清液吸除，并使用洗滌液反復洗滌兩次，之后再加入50μL的PBS懸浮、混勻處理，準備好兩塊加入頭孢拉定與亞碲酸鉀的山梨醇麥康凱瓊脂平板，將混勻液涂抹在平板上，之后放入37℃恒溫箱中培養，時長18h；培養后找出無色半透明可疑菌落與紅色菌落，將其接種到克氏雙塘培養基中，再次進行培養，找出符合雙糖的菌落并進行染色處理與生化反應處理，以此判斷是否存在大腸桿菌。

免疫磁珠與PCR快速檢測操作如下：（1）檢測設備與試劑。免疫磁珠分離設備、顯微鏡、基因采樣器、擴增基因儀器、大腸桿菌特異性引物與探針、DNA聚合酶。（2）免疫磁珠法。食品樣品處理方法與前種檢測方式一致，也實施免疫磁珠技術，以此獲得的大腸桿菌存于離心管內備用。（3）DNA提取。在離心管內加入適量裂解液，混勻處理；將蛋白酶K與硅藻土進行混勻，之后將其放到吸附柱內，根據細菌基因組DNA提取試劑盒的說明書操作，依次完成相關步驟，獲取純凈的基因組DNA。（4）PCR擴增。整個反應體系共50μL，其中包括DNA模板、引物、探針、DNA聚合酶、緩沖液等，之后進行PCR反應；預處理時的溫度為95℃，時長5min，共進行40個循環，且每個循環包括變性、退火、延伸三個環節，其對應溫度與時間分別為90℃與30s、55℃與30s、72℃與30s；在循環最后延伸步驟時應控制在72℃處理10min。（5）結果鑒定。循環結束后，取反應產物進行電泳并拍照，找出陽性菌落條帶并進行測序，最終獲取相關結果。

1.3觀察指標

（1）記錄不同檢測方式的檢測結果。

（2）計算不同檢測方式的陽性檢出率，計算公式為（陽性樣品數量/總樣品數量）×100%。

（3）統計免疫磁珠與PCR快速檢測不同食品類型的大腸桿菌檢測平均數量。

1.4統計學分析

選用SPSS23.0統計學軟件處理分析，計數資料實施χ2檢驗，計量資料實施t檢驗，P＜0.05，表明對比有統計學差異。

2結果

2.1對比不同檢測方式的檢測結果

檢測后，免疫磁珠與斑點免疫層析法檢測的結果中，檢出大腸桿菌樣品99份，未檢出大腸桿菌樣品1份；免疫磁珠與PCR快速檢測的結果中，檢出大腸桿菌樣品100份，未檢出大腸桿菌樣品0份。

2.2對比不同檢測方式的陽性檢出率

檢測后，兩種檢測方式的陽性檢出率相比未見對比意義（P＞0.05），詳細數據見表1。

2.3不同食品類型的大腸桿菌檢測平均數量

統計免疫磁珠與PCR快速檢測不同食品類型的大腸桿菌檢測平均數量具體數據見表2。

3討論

大腸桿菌為革蘭陰性桿菌，大多有周身鞭毛、菌毛，無芽孢，兼性厭氧，具有傳染性，主要傳播方式為糞－口途徑傳播[3]。此菌是引起腸道外感染、胃腸炎的主要致病菌，具體來源于食品與飲水。大腸桿菌是食品中常見微生物，具有一定食品標準，如：乳制品每100mL不超過10個、蔬菜每100g不超過10個、飲用水每100mL不超過1個，一旦超出相關標準，可引起食源性疾病[4]。因此，為提升食品安全，如何快速檢測食品中的大腸桿菌具有重要價值。免疫磁珠技術是近年來新興起的免疫學技術，主要基于免疫學的抗原－抗體反應原理，令抗體與大腸桿菌結合并吸附在磁珠上，于強大磁場作用下對細胞進行分群，以此獲得大腸桿菌，且具有操作簡便、耗時短的優勢[5]。斑點免疫層析法也是一種免疫學技術，主要以硝酸纖維素膜為載體，利用微孔膜的毛細血管作用，滴加在膜條一端的液體緩慢向另一端滲移，以此呈現檢測結果，以判斷有無大腸桿菌，且具有靈敏度高、檢測速度快、操作簡單。PCR法是一種酶促化學反應，主要通過特定引物與酶的作用，擴增目標DNA片段，以此檢測到食品樣品中的大腸桿菌，具有準確度高的優勢，但此法對設備與成本的要求較高。

通過分析免疫磁珠與斑點免疫層析法檢測、免疫磁珠與PCR快速檢測可知，二者均可起到較好的檢測效果，檢出食品中存在大腸桿菌。另外，為保障食品安全，還要求食品制作期間維持良好的衛生環境，包括環境清潔、定期消毒、工作人員保持良好手衛生、控制原料來源、規范食品加工操作、合理儲存和運輸等，以此維持食品良好衛生質量，確保食品安全。

本研究結果表明，免疫磁珠與斑點免疫層析法檢測的結果中檢出大腸桿菌、未檢出大腸桿菌分別有99份、1份；免疫磁珠與PCR快速檢測的結果中檢出大腸桿菌、未檢出大腸桿菌分別有100份、0份；不同檢測方式的陽性檢出率相比未見對比意義（P＞0.05）。在乳制品中大腸桿菌數量相對最多，因此，需加強對乳制品的大腸桿菌檢測工作，確保其在標準范圍內，降低由此引發食源性疾病的風險。在蔬菜與面制品中存在一定規模的大腸桿菌，在水產品中存在微量大腸桿菌，也需加強監測，持續關注食品安全。

綜上所述，在進行食品微生物檢驗時，應用不同檢測方式均可發揮檢測作用，能夠檢出大腸桿菌，判斷是否符合標準，各單位可根據自身情況選擇適合的檢測方式，更好地保障食品安全。