UBAP2L在結直腸癌中的表達及其意義

［摘要］目的探討泛素化相關蛋白2（UBAP2L）在結直腸癌（CRC）組織中的表達及其對CRC細胞增殖的影響。方法收集2015—2019年在青島大學附屬醫院接受手術治療的248例Ⅰ～Ⅲ期原發性CRC病人的癌和癌旁組織，采用免疫組化方法檢測UBAP2L的表達。構建UBAP2L過表達和敲除的CRC細胞系，應用CCK8試劑盒檢測UBAP2L對CRC細胞增殖的影響。結果CRC組織中UBAP2L的表達水平顯著高于癌旁組織，差異具有統計學意義（P=0.01）。UBAP2L表達與腫瘤部位、腫瘤浸潤程度有關（χ2=17.82、39.45，P＜0.05）。UBAP2L高表達病人無病生存期較低表達病人更短（χ2=7.32，P＜0.01）。敲除UBAP2L可以抑制CRC細胞增殖（F=38.97，P＜0.01）。結論UBAP2L在CRC組織中高表達。UBAP2L可能成為評估CRC發生發展的分子標志物，并有望成為CRC的分子治療靶點。

［關鍵詞］結直腸腫瘤；泛素化蛋白；病理學，臨床；免疫組織化學；細胞增殖［中圖分類號］R735.34;R341

［文獻標志碼］A［文章編號］20965532（2025）01001905" " " doi：10.11712/jms.20965532.2025.61.003[HT]

［開放科學（資源服務）標識碼（OSID）］

［網絡出版］https：//link.cnki.net/urlid/37.1517.r.20250224.1547.001;2025022510：32：14

[Abstract］ "Objective To investigate the expression of ubiquitinassociated protein 2like （UBAP2L） in colorectal cancer （CRC） tissue and its effect on the proliferation of CRC cells."Methods Cancer tissue samples and paracancerous tissue samples were collected from 248 patients with stage Ⅰ-Ⅲ primary CRC who underwent surgical treatment in The Affiliated Hospital of Qingdao University from 2015 to 2019， and immunohistochemistry was used to measure the expression of UBAP2L. The CRC cell line with UBAP2L overexpression or knockdown was established， and CCK8 assay was used to observe the effect of UBAP2L on the proliferation of colorectal cancer cells."Results The expression level of UBAP2L in CRC tissue was significantly higher than that in paracancerous tissue （P=0.01）. The expression of UBAP2L was associated with tumor location and tumor infiltration （χ2=17.82，39.45，Plt;0.05）. The patients with high UBAP2L expression had a shorter diseasefree vival than those with low expression （χ2=7.32，Plt;0.01）. UBAP2L knockdown could inhibit the proliferation of CRC cells （F=38.97，Plt;0.01）."Conclusion UBAP2L is highly expressed in colorectal cancer tissue. UBAP2L may become a molecular marker for evaluating the development and progression of colorectal cancer， and it is expected to become a molecular therapeutic target for CRC.

結直腸癌（CRC）是消化系統常見的惡性腫瘤，嚴重威脅人類健康[12]。研究CRC發生發展的分子機制，對CRC診治至關重要。泛素化相關蛋白2（UBAP2L）是泛素相關結構域家族的成員[3]，廣泛參與細胞分裂和增殖、細胞穩態、物質轉運和細胞應激等各種生命活動[4]。UBAP2L在乳腺癌、肝癌和肺癌等多種惡性腫瘤組織中呈現高表達，并且與腫瘤惡性程度及細胞增殖和轉移相關[57]。本文研究UBAP2L在CRC組織中的表達情況及其對CRC細胞增殖的影響，以期為CRC的臨床診療提供新的思路。

1材料與方法

1.1標本收集

收集2015—2019年在青島大學附屬醫院接受手術治療的248例Ⅰ～Ⅲ期原發性CRC病人的臨床病理資料和石蠟組織樣本，同時獲取距離腫瘤邊緣2 cm以上非腫瘤組織作為癌旁對照。所有病人術前均未接受放化療和靶向治療，且經病理明確診斷。通過隨訪收集病人的生存數據，隨訪截止時間為2024年6月。本研究經青島大學附屬醫院倫理委員會審批（批準號QYFY WZLL 29023）。

1.2實驗材料

所用人CRC細胞HT29、HCT116、SW480和RKO獲贈于青島大學附屬醫院中心實驗室；胎牛血清和細胞培養基（DMEM 和5′Macoy）購自美國GIBCO公司；UBAP2L抗體購自華美生物公司；βactin抗體購自Elabscience公司；羊抗兔二抗購自康為世紀生物科技有限公司；CCK8 檢測試劑盒購自日本同仁有限公司。

1.3實驗方法

1.3.1免疫組織化學檢測應用PV600法進行UBAP2L免疫組織化學染色，按照文獻方法進行操作[8]。由兩名病理醫師隨機選擇至少5個高倍視野評價UBAP2L染色情況。UBAP2L呈細胞質和細胞膜的彌漫性表達，評分標準參考相關文獻[8]。

1.3.2細胞培養HCT116細胞使用5′Macoy細胞培養基加體積分數0.20胎牛血清培養，其他細胞均用含有體積分數0.10胎牛血清的DMEM培養基培養。細胞孵育箱條件為37 ℃、含體積分數0.05 CO2的加濕環境。取處于對數生長期的細胞進行細胞實驗。

1.3.3UBAP2L過表達和敲除細胞系的構建

UBAP2L過表達和敲除慢病毒由漢恒基因公司進行構建。細胞貼壁且密度達到30%時，按說明書進行細胞轉染。培養72 h后，采用蛋白印跡（Western blot）法檢測轉染效率。

1.3.4Western blot檢測提取蛋白后用BCA法測定蛋白濃度。取等質量（20 μg）的蛋白進行SDSPAGE分離后，加入一抗UBAP2L（1∶1 000）和βactin（1∶1 000），置4 ℃冰箱中搖床孵育過夜，以TBST緩沖液洗3次，加入相應的二抗，室溫孵育60 min，洗膜后用ECL超敏化學發光法檢測目的條帶。實驗獨立重復3次。

1.3.5細胞增殖檢測取處于對數生長期的各組細胞，按照每孔1 000個細胞的密度接種到96孔板中，同時設置5個復孔，鋪4板細胞。細胞貼壁后，分別在24、48、72 h 3個時間點加入100 μL CCK8檢測液（10 μL CCK8增強型試劑和90 μL基礎培養基的混合液），置37 "℃細胞培養箱中孵育1.5 h，在450 nm波長下測量吸光度值，繪制細胞增殖曲線。實驗獨立重復3次。

1.4統計分析方法

采用SPSS 23.0軟件進行統計學分析。計量資料數據用[AKx-D]±s表示，兩組均數的比較采用獨立樣本t檢驗；多組均數比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用 LSD法；細胞活性分析采用重復測量設計方差分析。計數資料用例數和百分比表示，UBAP2L在CRC和癌旁組織中的表達水平比較采用McNemar檢驗；UBAP2L表達與臨床病理特征的相關性采用χ2檢驗。采用KaplanMeier法繪制生存曲線，Logrank檢驗統計不同UBAP2L表達水平病人的預后差異。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1UBAP2L在CRC組織中的表達

UBAP2L在CRC組織中呈高表達，在癌旁組織中呈低表達。見圖1。248例CRC組織中有187例（75.40%）UBAP2L呈高表達，癌旁組織中有52例（20.97%）UBAP2L呈高表達，差異具有統計學意義（McNemar檢驗，P=0.01）。見表1。

2.2UBAP2L表達與CRC病人臨床病理特征的相關性

UBAP2L表達與腫瘤部位、腫瘤浸潤程度有關（χ2=17.82、39.45，P＜0.05）。見表2。

2.3UBAP2L表達對CRC病人預后的影響

本文248例病人隨訪64～84個月，復發66例，死亡49例。UBAP2L高表達病人的平均無病生存期為71.4個月，低于UBAP2L低表達病人的89.2個月（Logrank檢驗，χ2=7.32，P=0.007）。UBAP2L高表達病人與低表達病人總生存期差異無統計學意義（Logrank檢驗，χ2=2.47，P=0.120）。見圖2。

2.4UBAP2L過表達和敲除細胞系的構建及其對CRC細胞增殖的影響

2.4.1過表達和敲除細胞系構建檢測HT29、HCT116、SW480和RKO等4種CRC細胞系中UBAP2L基礎表達水平，結果顯示，UBAP2L在SW480細胞中表達最高，在RKO細胞中表達最低（F=77.59，Plt;0.001）。見圖3A。選取RKO細胞轉染UBAP2L過表達慢病毒載體和SW480細胞轉染UBAP2L敲除慢病毒載體。結果顯示，成功構建RKOUBAP2L過表達（RKOOE）（t=6.38，P=0.003）和SW480UBAP2L敲除（SW480KD）細胞系（t=3.05，P=0.040）。見圖3B。

2.4.2UBAP2L表達對CRC細胞增殖的影響在RKO細胞系中，組別、時間及其二者交互作用差異均有統計學意義（F組別=22.03，P=0.040；F時間=236.69，P=0.001；F組別*時間=10.27，P=0.009），培養72 h后，UBAP2L過表達促進了細胞的增殖（F=36.04，P=0.007）。見圖4a。在SW480細胞系中，組別、時間及其二者交互作用差異均有統計學意義（F組別=23.56，P=0.040；F時間=510.59，P=0.001；F組別*時間=19.18，P=0.002），培養72 h后，UBAP2L敲除明顯抑制了細胞的增殖（F=38.97，P=0.007）。見圖4b。

3討論

全球每年新發CRC近200萬例，CRC致死人數約占全部癌癥總死亡人數的10%[1]。CRC的治療以手術及聯合放化療和靶向治療為主，但治療的毒副作用大，給病人身心帶來極大的痛苦[2]。完善CRC發生發展的分子網絡，對開發新的靶向藥物至關重要。

UBAP2L作為泛素蛋白酶體系統的蛋白質，可參與調節細胞內的各種生命活動，如促進細胞增殖、維持細胞穩態和調控細胞對外界信號刺激的反應等。UBAP2L在一些腫瘤疾病的發生發展中也可能扮演重要角色[911]。在慢性非萎縮性胃炎萎縮性胃炎腸化異型增生胃癌的發展變化過程中，UBAP2L蛋白表達水平呈逐步升高的趨勢，并且UBAP2L蛋白高表達的胃癌病人可能更容易進展為Ⅳ期胃癌，UBAP2L蛋白表達變化可能參與了胃癌的發生和發展[1213]。UBAP2L在乳腺癌中表達升高，并且與腫瘤的侵襲和轉移有關，UBAP2L高表達的乳腺癌病人預后更差[5]。敲除UBAP2L可以通過細胞周期阻滯，抑制膠質瘤細胞增殖[14]。敲除UBAP2L還可通過調節N鈣黏蛋白和E鈣黏蛋白的表達調控EMT，促進腫瘤進展及侵襲轉移[15]。還有研究顯示，UBAP2L主要參與MAPK/ERK及PI3K/AKT信號轉導通路，抑制UBAP2L的表達能夠抑制ERK及AKT的活化，從而抑制腫瘤細胞的增殖和遷移[5，7]。

本文結果顯示，UBAP2L蛋白在CRC組織中表達明顯升高，說明該基因與CRC的發生發展有一定的相關性。本文結果還顯示，UBAP2L表達與腫瘤浸潤程度和腫瘤部位有關，提示UBAP2L可能參與了CRC細胞的增殖。體外細胞實驗進一步證實，敲除UBAP2L可以抑制CRC細胞增殖。UBAP2L在CRC中可能發揮的是促癌作用。有研究顯示，[STBX]UBAP2L是癌基因，在CRC中呈高水平表達，敲除UBAP2L可通過增加CRC細胞凋亡抑制腫瘤細胞的增殖[16]，這一結果與本研究結果類似。UBAP2L在蛋白質質量控制、細胞周期調控、應激反應以及癌癥發生過程中發揮了重要作用[4]。蛋白表達異常通常有兩種原因：一種是mRNA水平降低導致的蛋白表達減少；另一種是蛋白上游相關信號通路異常引起的單純蛋白水平表達改變，這一過程并不涉及mRNA水平的調節。腫瘤細胞具有復雜的調控機制，本研究沒有檢測新鮮CRC組織中[STBX]UBAP2L mRNA的表達，CRC組織中UBAP2L蛋白表達水平升高的具體機制尚不清楚。UBAP2L在CRC發生發展過程中的作用，需要更大樣本的臨床和基礎研究來驗證。

綜上所述，UBAP2L蛋白在CRC組織中高表達，敲除UBAP2L可以抑制CRC細胞增殖。在今后的研究中，可以通過細胞或者動物實驗來深入探討UBAP2L調控CRC細胞增殖的具體分子機制。UBAP2L可能成為評估CRC發生發展的分子標志物，并有望成為CRC新的分子治療靶點。

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（本文編輯周曉彬）

［收稿日期］20240826;［修訂日期］20241204

［基金項目］山東省自然科學基金項目（ZR2021QH018）

［第一作者］徐昌（1987），男，碩士研究生，主管技師。

［通信作者］張翔雁（1986），男，博士，副主任技師。Email：feige5552006@126.com。張照龍（1987），男，博士，主治醫師，碩士生導師。Email：qduhzzl@126.com。