








關鍵詞:藍莓;多糖;脫蛋白;吸附法
藍莓(Vaccinium Spp.)學名越橘,又名藍漿果,為杜鵑花科(Ericaceae)越桔屬(Vacciniumspp)多年生落葉或常綠灌木。藍莓富含花青素、多糖、蛋白質、維生素A(Va)、維生素E(Ve)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)等營養物質,還含有鈣、磷、鎂、鐵等微量元素,具有較高的食用價值,享有“世界漿果之王”的美稱[1‐2]。藍莓具有抗氧化、消除眼睛疲勞與改善視力、預防心腦血管疾病、預防及治療癌癥、輔助降血糖、增進免疫力等多種獨特功效,被聯合國糧農組織確定為人類5大健康食品之一[3‐4]。藍莓多糖具有抗氧化、抗疲勞、調節免疫、抑菌、抗癌等多種生物功能[5‐6]。鑒于此,近年來藍莓多糖的相關研究逐漸成為研究熱點之一。
藍莓多糖提取主要采用熱水浸提法、堿法、酶法、超聲波法和微波輔助提取法等。熱水浸提法是多糖最傳統的提取方法,該方法簡單、容易操作且成本低,但存在耗時長、提取率不高的缺點。李穎暢等[7]采用熱水浸提法提取藍莓葉多糖得率為29.2 mg·g?1。堿法是利用強堿破壞細胞壁結構提取多糖的方法,部分含糠醛酸的多糖與酸性多糖在堿性條件下提取效率更高。Deng等[8]利用堿法提取得36.02%貓眼藍莓多糖。酶法常采用果膠酶、纖維素酶和木瓜蛋白酶等提取藍莓多糖,高效省時。孫璐等[9]、孫麗娜等[10]分別利用果膠酶和纖維素酶提取藍莓多糖,得率分別為2.72% 和2.91%。李敬等[11]、郭麗等[12]利用超聲波輔助法提取藍莓多糖,提取率達4.93%、5.83 mg·g?1。以上研究表明,酶法提取藍莓多糖得率并沒有明顯提高;堿法提取藍莓多糖雖然得率提高,但對于不同品種藍莓來說所含多糖種類不同,研究結果也存在差異;超聲輔助有機溶劑法提取藍莓多糖得率與傳統熱水浸提法提取并沒有顯著差異。將超聲輔助熱水浸提用于藍莓多糖提取,既有利于保證藍莓多糖結構不被破壞,又能提高藍莓多糖的得率。相比之下,操作更方便、成本較低,更易規?;a。
藍莓粗多糖是混合物,在粗提取過程中含有部分雜質,主要包括蛋白質和色素,給多糖的分離純化帶來較大困難[13]。常用的脫蛋白質方法有Sevage 法[14]、三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)法、蛋白酶解法、鹽析法等[15]。Sevage法是根據蛋白質在氯仿等有機溶劑變性而不溶于水的特點脫除蛋白,是應用較廣泛的方法之一,此種方法較溫和,脫蛋白效率低,通常需要經過多次重復才能達到較好效果,繁瑣費時,且有機試劑用量大,多糖的損失率大[16]。TCA法使蛋白質在有機酸的作用下發生變性而沉淀,具有操作簡單的優點,使用TCA的量越大,脫蛋白質的效果越好,反應就越劇烈,容易破壞多糖的構型,部分多糖會發生水解[17]。蛋白酶解法是在蛋白酶催化下,多糖粗提液中的蛋白質發生水解反應從而脫去蛋白的過程,該法特異性強,可提高蛋白質脫除率;當蛋白酶用量少時,不會破壞多糖的原結構,但如果酶的添加量控制不當,會引入外源蛋白,加大試驗誤差,且試驗成本較高[18]。鹽析法是將一定量的中性鹽加入蛋白質溶液中,破壞蛋白質的膠體穩定性,使得蛋白質溶解度降低而從溶液中沉淀析出的過程[19]。鹽析法脫蛋白也可為藍莓多糖脫蛋白提供一種新的參考。
目前,藍莓相關研究主要集中在藍莓花青素提取及生理功能方面,關于藍莓多糖提取的研究相對較少。植物多糖脫蛋白的研究主要集中在刺梨果、枸杞、部分藥用植物等,對藍莓多糖制備過程中的脫蛋白工藝鮮見報道。本研究以超聲輔助熱水浸提的藍莓多糖水提物為研究對象,比較吸附法、吸附?鹽析法、吸附?木瓜蛋白酶?鹽析法、吸附?三氯乙酸?鹽析法對藍莓多糖的脫蛋白效果,確定最佳脫蛋白方法為吸附法;研究樣液pH、脫蛋白溫度、活性炭用量、脫蛋白時間4個單因素對多糖保留率和蛋白脫除率的影響,并采用正交試驗對脫蛋白工藝條件進行優化,以期為藍莓多糖后續研究和產品的開發奠定基礎。
1 材料與方法
1.1 試驗材料
1.1.1 材料與試劑 藍莓,市售,果實飽滿圓潤、大小均勻、結實,藍莓果皮呈深紫色和藍黑色之間,并伴有白霧,無蟲害、無蟲咬。
牛血清蛋白,生物純,北京奧博星生物技術有限公司;木瓜蛋白酶,生物純,上海躍騰生物技術有限公司;考馬斯亮藍G-250,中國醫藥上?;瘜W試劑公司;粉末活性炭,天津市北辰方正試劑廠;三氯乙酸,國藥集團化學試劑有限公司;無水乙醇,天津市光復科技發展有限公司;苯酚,天津化學試劑有限公司;葡萄糖、濃硫酸、硫酸銨,沈陽市試劑二廠;其他試劑均為分析純。
1.1.2 儀器與設備 FA1104型電子天平,上海良平儀器儀表有限公司;WT20002萬特電子天平,杭州萬特衡器有限公司;DZKW-12-2電熱恒溫水浴鍋,北京市永光明醫療儀器有限公司;T6新世紀紫外?可見分光光度計,北京普析通用儀器有限責任公司;2200TH型數控超聲清洗器,上海安譜實驗科技股份有限公司;SHZ -DⅢ循環水式真空泵,鞏義市予華儀器有限公司;80-2離心機,常州市江南實驗儀器廠;BCD -190TMPK冰箱,海爾智家股份有限公司;LC18033109 pH計,上海電力辰邦西儀器科技有限公司。
1.2 試驗方法
1.2.1 藍莓粗多糖水提物波長測定 藍莓粗多糖水提物制備參考Chen等[20]方法并進行優化。將冷凍藍莓置于40 kHz、20 ℃的超聲清洗器內解凍10 min,研磨后按1 g∶10 mL料液比,在超聲頻率60 kHz、超聲溫度60 ℃、超聲時間60 min輔助熱水浸提,抽濾除去藍莓殘渣,取上清液,即得到藍莓粗多糖水提物。分別取葡萄糖標準溶液、藍莓粗多糖提取液各1.0 mL,采用苯酚硫酸法[21]確定藍莓多糖測定最大吸收波長;分別取牛血清白蛋白標準溶液、藍莓粗多糖提取液各1.0 mL,采用考馬斯亮藍法[22]確定藍莓蛋白測定最大吸收波長。
1.2.2 藍莓多糖保留率測定 采用苯酚硫酸法[21]測定藍莓多糖含量。準確量取0.1 mg·mL?1 葡萄糖標準溶液、藍莓粗多糖提取液各1.0 mL,補水至2.0 mL,然后依次加入體積分數6% 苯酚溶液1.0 mL和濃硫酸5.0 mL,輕輕振蕩搖勻,沸水浴加熱20 min,取出冷卻至室溫,按1.2.1的方法確定最大吸收波長,測定吸光度。以葡萄糖標準溶液質量濃度(mg·mL?1)為橫坐標,于490 nm處測定吸光度為縱坐標,繪制標準曲線,根據所得回歸方程,計算多糖保留率(X),公式如下。
式中,m1 為脫蛋白前溶液中多糖含量;m2 為脫蛋白后溶液中多糖含量。
1.2.3 藍莓多糖脫蛋白率測定 采用考馬斯亮藍法[22]測定藍莓蛋白含量。準確量取0.1 mg·mL?1牛血清白蛋白標準溶液、藍莓粗多糖提取液各1.0 mL,以蒸餾水為空白,分別加入考馬斯亮藍G-250溶液5.0 mL,輕輕振蕩混勻,室溫條件下靜置3 min,按1.2.1方法確定最大吸收波長,測定吸光度。以牛血清蛋白標準溶液質量濃度(mg·mL?1)為橫坐標,于620 nm處測定吸光度為縱坐標,繪制標準曲線,根據所得回歸方程,計算蛋白脫除率(Y),公式如下。
式中,p1 為脫蛋白前溶液中蛋白含量,p2 為脫蛋白后溶液中蛋白含量。
1.2.4 綜合評分 正交試驗分別測定多糖保留率和蛋白脫除率,數據處理采用加權綜合評分法,將各項指標除以該列最大值,二者權重均設為50,計算綜合評分(W)[23],公式如下。
式中,Xmax 為多糖保留率最大值,Ymax 為蛋白脫除率最大值。
1.2.5 藍莓粗多糖脫蛋白方法比較 ① 吸附法。取1.2.1制備的藍莓粗多糖溶液10 mL,在自然pH條件下,加入2.0%活性炭,輕輕攪拌后置于50 ℃恒溫水浴進行吸附40 min以除蛋白,經真空泵抽濾,收集濾液[24]。測定濾液吸光度,計算多糖和蛋白含量,再根據公式(1)(2)計算多糖保留率、蛋白脫除率。
② 吸附?鹽析法。取吸附法脫蛋白后的藍莓粗多糖溶液10 mL若干份,邊攪拌邊緩慢加入硫酸銨粉末至飽和度為10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%,在超聲頻率40 kHz,超聲溫度50 ℃,超聲時間9 min 條件下進行鹽析[25]。鹽析后冷卻至室溫,以4 000 r·min?1 離心10 min,收集上清液,測定吸光度,計算多糖和蛋白含量,再根據公式(1)、(2)計算多糖保留率、蛋白脫除率。
③ 吸附?木瓜蛋白酶?鹽析法。取吸附法脫蛋白后的藍莓粗多糖溶液10 mL,加入15 g·L?1木瓜蛋白酶溶液0.2 mL,55 ℃恒溫水浴酶解90 min,然后經沸水浴10 min終止酶活,取出冷卻至室溫,4 000 r·min?1 離心10 min 去沉淀后得上清液[26]。取上清液繼續添加硫酸銨至飽和度20%鹽析除蛋白,測定吸光度,計算多糖和蛋白含量,再根據公式(1)(2)計算多糖保留率、蛋白脫除率。
④吸附?三氯乙酸?鹽析法。取吸附法脫蛋白后的藍莓粗多糖溶液10 mL,按體積比1∶1加入3%三氯乙酸10 mL,用玻璃棒攪拌均勻,然后置于4 ℃冰箱過夜,4 000 r·min?1離心10 min去沉淀得上清液[27]。取上清液繼續添加硫酸銨至飽和度為20% 進行鹽析除蛋白,以4 000 r·min?1 離心10 min,收集上清液,測定吸光度,計算多糖和蛋白含量,再根據公式(1)(2)計算多糖保留率、蛋白脫除率。
1.2.6 吸附法脫蛋白的單因素試驗 以多糖保留率、蛋白脫除率為評價指標,將樣液pH、脫蛋白溫度、活性炭用量、脫蛋白時間作為考察因素[28],研究4個單因素條件對藍莓粗多糖溶液的脫蛋白影響?;钚蕴坑昧糠謩e設置0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%;脫蛋白溫度分別設置30、40、50、60、70 ℃;脫蛋白時間分別設置20、40、60、80、100 min;樣液pH 分別設置3.0、4.0、5.0、6.0、7.0。
1.2.7 吸附法脫蛋白的正交試驗 在單因素試驗的基礎上,利用Design-Expert設計對藍莓粗多糖脫蛋白條件進行優化。以多糖保留率(X)、蛋白脫除率(Y)、綜合評分(W)為參考指標,以樣液pH(A)、脫蛋白溫度(B)、活性炭用量(C)、脫蛋白時間(D)為因素設計4因素3水平的正交試驗,因素水平見表1。
1.3 數據處理
根據單因素試驗利用Excel對數據進行處理,設計正交試驗,每組平行測定3 次,用Design-Expert設計軟件對數據進行方差分析,使用Excel繪圖制表。
2 結果與分析
2.1 藍莓多糖、蛋白最大吸收波長測定結果
在可見分光光度計400~800 nm波長范圍內掃描,確定葡萄糖標準溶液和藍莓粗多糖提取液均在490 nm有最大吸收峰,因此確定490 nm為藍莓多糖測定最大吸收波長。在可見分光光度計400~800 nm波長范圍內掃描,確定牛血清蛋白標準溶液和藍莓蛋白提取液均在620 nm有最大吸收峰,因此確定620 nm為藍莓蛋白測定最大吸收波長。
2.2 藍莓多糖保留率測定結果
以葡萄糖標準溶液質量濃度為橫坐標,于490 nm處測定吸光度為縱坐標,繪制標準曲線,得回歸方程(式4)。R2 = 0.997 5,表明葡萄糖溶液質量濃度在0.0~1.0 mg·mL?1與吸光度呈現良好線性關系,可根據此回歸方程計算多糖水提物中多糖含量。
2.3 藍莓多糖脫蛋白率測定結果
以牛血清蛋白標準溶液質量濃度為橫坐標,于620 nm 處測定吸光度為縱坐標,繪制標準曲線,得回歸方程(式5)。R2 = 0.994 6,表明蛋白質溶液質量濃度在0.0~1.0 mg·mL?1與吸光度呈現良好線性關系,根據此回歸方程可計算多糖水提物中蛋白含量。
2.4 脫蛋白方法比較分析
2.4.1 吸附-鹽析法 由表2可知,多糖的保留率在70%~97%,當硫酸銨飽和度20%時多糖保留率最高,蛋白脫除率也較高。隨著硫酸銨飽和度的增加,鹽析后蛋白質的含量顯著增加,不能很好地將多糖和蛋白質分離,這可能是由于藍莓中多糖和藍莓蛋白質的相對分子質量比較接近而導致的[29]。另一方面,當硫酸銨用量過大時,會增加后續脫鹽難度和成本,而且多糖損失比較大[30]。綜合分析,硫酸銨飽和度20% 適宜進行鹽析。
2.4.2 單一吸附法與混合吸附法比較分析 由表3可知,單一吸附法比其他3種混合脫蛋白方法效果好,綜合評分達98.74分,顯著高于其他方法。多糖保留率表現為吸附?鹽析法gt;吸附法gt;吸附?木瓜蛋白酶?鹽析法gt;吸附?三氯乙酸?鹽析法,雖然吸附?鹽析法多糖保留率顯著高于其他方法,但蛋白脫除效果較差。蛋白脫除率表現為吸附法gt;吸附?三氯乙酸?鹽析法、吸附?木瓜蛋白酶?鹽析法gt;吸附?鹽析法,而且3種混合脫蛋白方法脫除率均較差,不能很好地將蛋白質和多糖分離,且測定的蛋白質含量升高。這可能是由于雜蛋白相對分子質量與藍莓多糖比較接近,且脫除的只是小分子蛋白質,除了藍莓蛋白以外還存在其他雜蛋白。綜合考慮多糖保留率、蛋白脫除率、綜合評分、試驗操作的簡便性和對多糖結構的影響等因素,藍莓粗多糖溶液中的脫蛋白不適合采用混合脫蛋白方法,后續試驗選擇吸附法對藍莓粗多糖溶液進行除蛋白。
2.5 吸附法脫蛋白單因素結果分析
2.5.1 活性炭用量的確定 取10 mL藍莓多糖粗提液,固定脫蛋白溫度50 ℃,脫蛋白時間60 min,pH 5.0,活性炭的添加用量分別為0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%,計算藍莓多糖保留率和蛋白脫除率。由圖1可知,隨著活性炭添加量的增加,多糖的保留率逐漸降低,可能是由于活性炭的吸附作用所致;蛋白脫除率呈遞增趨勢;為了保證多糖保留率和蛋白脫除率均在較高水平,綜合分析可知1.5%活性炭添加量是活性炭吸附法脫蛋白的最佳條件。
2.5.2 脫蛋白溫度的確定 取10 mL藍莓多糖粗提液,固定活性炭用量1.5%,脫蛋白時間60 min,pH 5.0,脫蛋白溫度分別為30、40 、50、60 、70 ℃,計算藍莓多糖保留率和蛋白脫除率。由圖2 可知,隨著溫度的升高,多糖保留率和蛋白脫除率逐漸增大,在50 ℃時多糖的保留率達到最大,為73.68%,隨著溫度繼續提高,多糖保留率下降,蛋白脫除率增大。溫度高可能導致部分多糖發生水解,因此,選擇50 ℃為脫蛋白最佳溫度。
2.5.3 脫蛋白時間的確定 取10 mL藍莓多糖粗提液,固定活性炭用量1.5%,脫蛋白溫度50 ℃,pH 5.0,脫蛋白時間分別為20、40、60、80、100min,計算藍莓多糖保留率和蛋白脫除率。由圖3可知,脫蛋白40 min時,多糖保留率達到最大,為67.66%,繼續延長脫蛋白時間多糖的保留率降至40%~50%。脫蛋白60 min 時,蛋白脫除率高達85.50%。綜合考慮,最適的脫蛋白時間為40 min。
2.5.4 樣液pH 的確定 取10 mL藍莓多糖粗提液,固定活性炭用量1.5%,脫蛋白溫度50 ℃,脫蛋白時間40 min,pH分別為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0,計算藍莓多糖保留率和蛋白脫除率。由圖4所示,在pH 3.0條件下,藍莓多糖粗提液中的多糖保留率和蛋白的脫除率均最高,分別為78.47% 和64.60%。樣液pH在酸性環境中脫蛋白效果較好,說明活性炭在偏酸性條件下吸附作用較好。隨著pH升高多糖保留率和蛋白脫除率均降低。綜合考慮多糖保留率和蛋白脫除率,確定適宜的樣液pH為3.0。
2.6 吸附法脫蛋白質正交試驗結果分析
由表4和表5可知,影響藍莓多糖保留率的因素由大到小依次為脫蛋白溫度gt;樣液pHgt;活性炭用量gt;脫蛋白時間;影響藍莓蛋白脫除率的因素由大到小依次為樣液pHgt;脫蛋白溫度gt;脫蛋白時間gt;活性炭用量;影響藍莓綜合評分的因素由大到小依次為脫蛋白溫度gt;樣液pHgt;脫蛋白時間gt;活性炭用量。以上結果表明,脫蛋白溫度對多糖保留率及綜合評分的影響是一致的;樣液pH 對蛋白脫除率的影響相對較大,且脫蛋白溫度在50 ℃,活性炭用量在2.0% 效果較好,這與單因素結果較為一致,綜合考慮以上結果,優化后最佳工藝條件為:脫蛋白溫度50 ℃、樣液pH 3.0、脫蛋白時間40 min、活性炭用量1.5%。
對多糖保留率進行方差分析(表6),以脫蛋白時間為誤差項,樣液pH、脫蛋白溫度、活性炭用量對多糖保留率影響均表現為極顯著(Plt;0.01),脫蛋白時間對多糖保留率影響不大,這與單因素及正交試驗結果極差分析一致。對蛋白脫除率進行方差分析(表7)以活性炭用量為誤差項,其他因素均對蛋白脫除率影響不顯著(Pgt;0.05),但影響因素的主次順序與極差分析完全一致。對綜合評分進行方差分析(表8),以活性炭用量為誤差項,除脫蛋白時間外其他因素均對綜合評分影響顯著(Plt;0.05)。綜合極差、方差分析結果可以看出,為更好地脫除蛋白要嚴格控制脫蛋白溫度和樣液pH,脫蛋白時間控制在40~50 min,活性炭的用量控制在1.5%~2.0%之間均可。
對優化后最佳工藝條件組合A2B2C2D2 進行3次重復驗證試驗,即脫蛋白溫度50 ℃、樣液pH3.0、脫蛋白時間40 min、活性炭用量1.5%,在此條件下,藍莓多糖保留率、蛋白脫除率、綜合評分分別為69.87%、87.87%、94.56 分;70.52%、88.89%、94.13分;70.26%、86.87%、95.67分。經計算得藍莓多糖保留率、蛋白脫除率、綜合評分分別為70.22%、87.88%、94.79分。
3 討論
本研究采用超聲輔助熱水浸提法提取藍莓粗多糖,并對藍莓水提物脫蛋白工藝進行研究,比較不同方法除蛋白效果依次為吸附法gt;吸附?三氯乙酸?鹽析法、吸附?木瓜蛋白酶?鹽析法gt;吸附?鹽析法。吸附法脫蛋白效果最優,吸附?鹽析法雖然多糖保留率顯著好于吸附法,但蛋白脫除率效果較差,綜合評分也明顯低于吸附法。一般認為Sevage法脫蛋白效果較好,但脫蛋白次數較多,甚至多達5次,蛋白率脫除率在70%以上[31],而本研究中吸附法脫蛋白的效果也在70%以上,操作更為簡單實用。在單因素試驗基礎上,通過正交試驗優化吸附法藍莓多糖脫蛋白工藝。影響多糖保留率的因素大小依次為脫蛋白溫度gt;樣液pHgt;活性炭用量gt;脫蛋白時間;影響綜合評分的因素大小依次為脫蛋白溫度gt;樣液pHgt;脫蛋白時間gt;活性炭用量。根據綜合評分得到最佳脫蛋工藝條件為:脫蛋白溫度50 ℃、樣液pH 3.0、脫蛋白時間40min、活性炭用量1.5%,在此條件下,藍莓多糖保留率、蛋白脫除率、綜合評分分別為70.22%、87.88%、94.79分。可見,隨著脫蛋白溫度的提高,綜合評分呈現先增大后減少的變化趨勢,隨著脫蛋白的時間越長,綜合評分逐漸減少。研究者普遍認為活性炭在1.5%~2.0% 時,脫蛋白溫度40~50 ℃、脫色時間30~40min,脫色效果較好[32-33]。從本研究可以看出,如果控制好樣液pH,該條件不止脫色效果較好,脫蛋白效果也較好,且當脫蛋白溫度高時,活性炭的用量可以減少0.5%。因此,藍莓多糖脫蛋白時,保證樣液適宜的pH,保持適宜的脫蛋白溫度和脫蛋白時間有利于提高多糖保留率和蛋白脫除率。
多糖水提物中的色素、蛋白對多糖后續純化以及結構分析研究有制約作用。常用的植物多糖脫色方法有聚酰胺脫色法、活性炭吸附法、過氧化氫法、大孔樹脂吸附及離子交換樹脂法等?;钚蕴课椒m然對多糖造成的損失不可避免,但對色素和細菌等雜質助濾效果明顯。李元元等[34]研究表明,顆粒活性炭對沙棗多糖脫色較聚酰胺效果顯著。孫希云[35]用過氧化氫法對藍莓多糖脫色效果較好,但多糖保留率相對較低。孫麗娜等[36]用大孔樹脂對藍莓多糖脫色,脫色率達66.86%,多糖得率75.42%。常用的脫蛋白方法有Sevage法、TCA法、蛋白酶解法、鹽析法、大孔樹脂法等。陳艷君等[37]采用Sevage法對黃精多糖除蛋白效果相對穩定,但效率相對較低,至少需要2次以上脫蛋白且多糖損耗率大;TCA效果相對較好,鹽析法效果最差。酶法脫蛋白條件要求嚴格,降解蛋白的同時會破壞多糖結構,很少被采用。范馨予[38]發現,Sevage法對山楂多糖脫蛋白效果較好,作用條件相對溫和;TCA法所用三氯乙酸含量8%,次數3次,較其他研究者所用3%[39]、5%[40]要高,次數更多。陳盈盈等[41]研究發現,XDA-1樹脂對刺糖多糖脫色脫蛋白效果均穩定可行,不破壞多糖結構,還能增強多糖抗氧化活性。以上研究表明,大多數的吸附劑如聚酰胺、活性炭、大孔樹脂等,在脫色、脫蛋白中都能表現出較好的效果。大孔樹脂再生處理簡便、使用周期長,可循環使用,但價格偏高;活性炭價格低廉,不破壞多糖的結構。本研究在研究藍莓多糖脫色、脫蛋白的過程中發現,活性炭不僅脫色效果好,脫蛋白的效果也很好。吸附法對藍莓多糖水提物脫色、脫蛋白處理具有一定可行性,可為工業上大規模分離藍莓多糖的研究提供參考。
多糖提取是天然多糖資源研究和利用的關鍵環節,目前藍莓多糖的研究主要集中在藍莓粗多糖的提取工藝、生物活性上,對藍莓粗多糖分離純化過程中的脫蛋白工藝報道較少。由于植物多糖的提取中多糖常與游離蛋白共同存在,且部分多糖還與蛋白質結合形成糖蛋白,使得多糖脫蛋白的過程非常困難。另外,由于藍莓中多糖和蛋白質的相對分子質量比較接近,加大了藍莓粗多糖溶液進行分離純化的難度。藍莓多糖有著獨特的生理功能,優化脫蛋白的工藝,對提高多糖純度、降低分離純化成本、增加藍莓多糖活性與藍莓多糖開發利用有重要意義。