亞抑菌濃度的環丙沙星、莫匹羅星和夫西地酸對金黃色葡萄球菌敏感性的影響

Effect of Substatic Concentrations of Ciprofloxacin， Mupirocin and Fusidic Acid on the Sensitivity of Staphylococcus aureus

Gao Ya-Ting，Zhou Miao， ZhangHui-Jie，WangLi， YangXiang-Jun， Zhou Wei （TianjinAcademy ofTraditional ChineseMedicineAfliatedHospital，Tianjin300120）

Abstract： ObjectiveTo investigate the efect of subinhibitory concentrations of ciprofloxacin， mupirocin and fusidic acidonthesensitivityofStaphylococcus aureus in vitro.MethodsStandardstrains andanumberof clinically isolated Staphylococcus aureus strains that were susceptible to ciprofloxacin，mupirocin and fusidic acid were combined to generate the experimental strains.All strains were cultured for atotal of three days in the subinhibitory concentration of 0.5×MIC . AGAR ratio dilution method was used to compare the changes of strains against the three drugs MICs before and after culture.ResultsThe MICsof ciprofloxacin， mupirocin and fusidic acid were significantlyincreased （Plt;0.05） ，and Mupirocin MICswere more significantly increased， followed by ciprofloxacin， and fusidic acid had the least change （ Plt;0.001 ）.When the induction period was extended， the rise in ciprofloxacin MICs accelerated graduall，the rise inMICs for macroloxacinrose quickly atfirst，and thechange in MICs for fusidic acid was not statisticallsignificant.ConclusionMupiroxacin is more susceptible to drug resistance in the treatment of Staphylococcus aureus infection， ciprofloxacin is second and fusidic acid is almost not resistant.

Key words： fusidic acid；mupirocin； ciprofloxacin； Staphylococcus aureus； minimum inhibitoryconcentration

皮膚和軟組織感染在臨床中比較常見，例如皮膚毛囊炎、柿、癰、膿皰病以及蜂窩織炎和丹毒等，其最主要的致病菌為金黃色葡萄球菌[1]。臨床治療皮膚軟組織感染，尤其是輕癥一般不需要全身使用抗菌藥物，只需局部用藥即可。目前局部外用抗菌藥物主要為：莫匹羅星、夫西地酸或喹諾酮類抗生素（以環丙沙星軟膏為代表）[2。目前三種藥物在治療金黃色葡萄球菌感染的療效研究絕大多數為臨床療效觀察，其中有研究結果表明治療金黃色葡萄球菌感染性皮膚病，外用莫匹羅星、夫西地酸和環丙沙星均可取得理想的療效，臨床醫師可自由選用[3]；而有些研究發現夫西地酸的療效明顯優于環丙沙星4；也有些學者認為三種藥物中應該首選莫匹羅星[5。本研究欲通過體外亞抑菌濃度的誘導實驗，比較三種藥物的最低抑菌濃度（MICs）升高程度的區別，為臨床使用外用藥治療金黃色葡萄球菌引起的皮膚軟組織感染提供實驗依據。

1材料與方法

1.1 菌株來源

收集本院來自皮膚科的分泌物標本，分離并鑒定的非重復性金黃色葡萄球菌30株。

1.2儀器與試劑

液體菌株保存管（天津萬譜恒信儀器設備有限公司），瓊脂干粉（英國Oxiod公司），環丙沙星標準品、莫匹羅星標準品和夫西地酸標準品由中國藥品生物制品檢定所提供，金黃色葡萄球菌ATCC25923。

1.3篩選實驗菌株

采用瓊脂倍比稀釋法測定所有臨床收集的金黃色葡萄球菌對環丙沙星、莫匹羅星和夫西地酸的MICs，根據美國臨床試驗室標準委員會（CLSI）標準判斷結果。實驗重復三次，取平均值。根據MICs結果篩選出同時對環丙沙星、莫匹羅星和夫西地酸敏感的菌株，與標準菌株一起構成實驗菌株15株。

1.4誘導實驗

根據實驗菌株的MICs值，配置 0.5× MIC濃度的含藥培養基（環丙沙星、莫匹羅星和夫西地酸），將菌株定量接種于 0.5× MIC濃度的含藥培養基中，恒溫培養箱培養 18～24h ，此時培養出來的菌落稱之為誘導一代菌，保存備用。將一代菌株繼續定量接種于相同濃度的含藥培養基中，恒溫培養箱培養18＼～24h，此時培養出來的菌落稱之為誘導二代菌，保存備用。同樣操作得到誘導三代菌[。

1.5測定所有菌株MICs

采用瓊脂倍比稀釋法分別測定實驗保存的所有一、二、三代菌株對環丙沙星、莫匹羅星和夫西地酸的MICs。

1.6數據分析

整合誘導前后得到的所有MICs值，建立SPSS數據庫，經對數轉換后統計分析環丙沙星、莫匹羅星和夫西地酸三種藥物的誘導對金黃色葡萄球菌MICs值的影響，方法采用單因素方差分析和重復測量方差分析。 Plt;0.05 則表明差異有統計學意義。

2結果

2.1實驗菌株的篩選情況

從皮膚科共分離得到30株非重復性金黃色葡萄球菌，測定MICs后根據CLSI標準篩選出14株同時對環丙沙星、莫匹羅星和夫西地酸敏感的菌株，與標準菌株共同組成實驗用菌株，實驗菌株對環丙沙星、莫匹羅星和夫西地酸的MIC見表1。

2.2誘導實驗結果

通過15株實驗菌株分別在三種藥物培養基中傳代培養3d，共誘導培養獲得135株菌株。測定所有菌株對環丙沙星、莫匹羅星和夫西地酸的MICs，共得到405個MICs數據，見表2。

2.3誘導實驗對環丙沙星、莫匹羅星和夫西地酸 MICs的影響

分別比較誘導前后環丙沙星、莫匹羅星和夫西地酸對誘導菌株的MIC變化，結果顯示三種藥物的MICs均有顯著的升高 （Plt;0.05 ，圖1），且通過比較三種藥物對誘導菌株與未經誘導的菌株MICs的差值（dMICs）的差異，結果顯示莫匹羅星的MICs升高更顯著，環丙沙星次之，夫西地酸變化最?。? ，圖2）。

2.4比較環丙沙星、莫匹羅星和夫西地酸對誘導菌株的MICs升高情況

通過比較三種藥物對誘導前、后菌株整體MICs的變化，統計結果顯示三種藥物具有相似的誘導MICs升高的能力（均 Pgt;0.05 。

2.5隨誘導時間的延長，三種藥物MICs的變化趨勢

通過重復測算方差分析的方法檢驗，結果顯示影響三種藥物MICs變化的兩個因變量：誘導藥物和誘導時間之間存在交互作用 ？ Plt;0.05 ，圖3），提示隨時間的延長，不同誘導藥物可使MICs呈現不同的變化趨勢；且交互圖顯示隨時間延長，莫匹羅星的MICs升高先急后緩呈曲線上升，環丙沙星的MICs升高則逐漸加快，夫西地酸的MICs變化不顯著。

3討論

環丙沙星、莫匹羅星和夫西地酸三種藥物作為抗皮膚和軟組織感染的常見局部用藥，多項臨床療效比較的研究結果顯示，夫西地酸的總有效率明顯優于莫匹羅星[7-9]，莫匹羅星優于環丙沙星[10]，也有部分研究直接對比三種藥物的療效[3]，顯示在金黃色葡萄球菌感染性皮膚病治療中莫匹羅星、夫西地酸和環丙沙星均可取得理想的療效，臨床醫師可自由選用。

與臨床觀察不同，同時做三種藥物的金黃色葡萄球菌體外敏感性的研究較少，其中有研究表明兒童皮膚軟組織感染分離的耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）對夫西地酸、環丙沙星和莫匹羅星的耐藥率分別為 3.3% 、 33.3% 和 。加拿大一項為期10年的研究表明，皮膚和軟組織感染的金黃色葡萄球菌中甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（MSSA）對夫西地酸、環丙沙星和莫匹羅星的耐藥率分別為 10.9% 、1.40% 和 31.8% ；MRSA對夫西地酸、環丙沙星和莫匹羅星的耐藥率分別為 10.6% 、 67.1% 和 。韓國一項研究中皮膚科分離的金黃色葡萄球菌對夫西地酸、環丙沙星和莫匹羅星的耐藥率分別為 31.1% 76.7% 和 。結果表明，地域不同對三種藥物的敏感性完全不同，而本研究通過篩選出同時對三種藥物敏感的菌株，排除基線耐藥情況的影響，通過體外誘導耐藥的方法比較三種藥物的誘導耐藥的能力大小，為臨床用藥選擇上提供更科學的實驗依據。

本研究結果顯示亞抑菌濃度藥物的作用下，環丙沙星、莫匹羅星和夫西地酸的MICs均顯著升高，且莫匹羅星的MICs升高更顯著，環丙沙星次之，夫西地酸變化最小。提示本地區患者，可能對莫匹羅星更容易產生耐藥性，其次是環丙沙星和夫西地酸。

交互作用結果顯示，莫匹羅星的MICs升高先急后緩呈曲線上升，環丙沙星的MICs升高則逐漸加快，夫西地酸的MICs變化不顯著。提示莫匹羅星即便是用藥時間較短，仍然容易產生耐藥；環丙沙星使用時間越長越容易產生耐藥；夫西地酸相較于其他兩種藥物，無論時間長短均難以產生耐藥。

本研究結果表明，隨時間變化金黃色葡萄球菌對環丙沙星、莫匹羅星和夫西地酸的MICs變化趨勢不同，MICs升高程度亦不同。那么金黃色葡萄球菌對三種藥物的耐藥機制有何不同，隨時間變化不同的耐藥程度機制是否不同。有研究結果表明，亞抑菌濃度的環丙沙星會導致金黃色葡萄球菌的應急反應（SOS反應）基因recA顯著表達，且呈現先增后減的趨勢[14]。有研究發現金黃色葡萄球菌對莫匹羅星的耐藥機制有所不同，其中高水平耐藥時mupA基因高表達，而低水平耐藥時高表達的是ileS基因[15]。金黃色葡萄球菌通過基因突變阻礙夫西地酸與EF-G蛋白結合而產生耐藥[，其中fusA基因的突變導致菌株對夫西地酸的高水平耐藥，而低水平耐藥由fusB基因突變產生[7]。但需要注意的是不同地區的夫西地酸耐藥基因的獲取是存在差異的[16]。綜上，金黃色葡萄球菌產生的對三種藥物不同程度的耐藥機制確有不同。而本研究亞抑菌濃度藥物的誘導導致三種藥物對菌株的MICs產生不同程度的升高，機制還需要進一步研究。

綜上所述，本研究結果表明，治療金黃色葡萄球菌感染的皮膚和軟組織感染的外用抗菌藥物中，莫匹羅星更容易產生耐藥性，環丙沙星次之，夫西地酸幾乎不會產生耐藥。

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