厚樸飲片質(zhì)量等級標準綜合評分機制研究

本文引用：．厚樸飲片質(zhì)量等級標準綜合評分機制研究[J].中醫(yī)藥大學學報，2025，45（4）：654-661.

關(guān)鍵詞】厚樸；等級標準；主成分分析；正交偏最小二乘法判別分析；評分機制 [中圖分類號]R284.1 [文獻標志碼]A [文章編號]doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2025.04.010

[Abstract]Objective Toanalyze thequalityof Houpo Decoction-ready Medicines basedonvarious dataanalysissoftwares， andtoestablishacomprehensivescoringmechanism forthequality gradestandardof decoction-readymedicines.Methods Measure was madeon17batches of Houpo Decoction-ready Medicinesfromthe market fortheirappearancetraits，alcoholextract， ash，magnololiolsginagodatileposswaresedfoelaial data，combinedwithSIMCA14.1softwareforprincipalcomponentanalysisandorthogonalpartialleastsquaresdiscriminant analysis （OPLS-DA）toscreenthediferenceindexesafectingtheirquality.Thecomprehensivequalitygradeevaluationsystemof Houpo Decoction-ready Medicines was established using the analytic hierarchy process combined with K -valuecluster analysis. ResultsStatisticalanalysisofthecollectedindexdatafindsoutthatthediferenceindexesofHoupo（MagnoliaOffcinalis）were determined as L^* ， b^* ，magnolol，and extract.Houpo Decoction-ready Medicinescould be divided into three grades inaccordance withthetotalscoreswiththefrstgradegt;11Opoints，thesecondgrade90-11Opoints，andthethirdgrade9Opoints.Conclusion Theestablishedcomprehensivescoring mechanismcanefectivelydistinguishthequalityofdiferentHoupoDecoction-ready Medicies and providescientific basis for the formulation ofquality grade standardsof decoction-ready medicines.

[Keywords]Houpo （Magnoliaoficinalis）;gradestandard;principalcomponentanalysis;orthogonal partial leastsquaresdiscriminant analysis; scoring mechanism

厚樸為木蘭科植物厚樸Magnolia officinalisRehd.et Wils.或凹葉厚樸Magnoliaoffinalis Rehd.etWils.var.bilobaRehd.etWils.的干燥干皮、根皮及枝皮，具有燥濕消痰、下氣除滿的功效。厚樸中含有木脂素（如厚樸酚、和厚樸酚）苯丙素苷（如紫丁香苷、木蘭脂素苷）、生物堿（如木蘭堿、木蘭箭毒堿）和揮發(fā)油（如桉葉醇）等多種化學成分[2-4。現(xiàn)代藥理研究表明，厚樸具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗抑郁等作用，可促進胃腸動力、緩解胃腸動力障礙，臨床上用于慢性腹瀉，腸梗阻、胃輕癱等疾病[5-8。2020年版《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）中厚樸以厚樸酚、和厚樸酚為指標進行含量測定，但中藥化學成分復雜，單一含量測定難以反映厚樸質(zhì)量，同時缺乏對外觀性狀的量化，不能很好地區(qū)分厚樸質(zhì)量的優(yōu)劣，因此，有必要對厚樸飲片的質(zhì)量等級標準進行研究，本研究按《中國藥典》相關(guān)方法檢測質(zhì)量指標的基礎之上，測定厚樸飲片的厚度、色度值（L^*，a^*，b^*， 量化其外觀性狀，再通過高壓液相層析（high-performance liquid chromatography， HPLC ）法和氣相色譜-質(zhì)譜法（gas chromatography/massspectrometry，GC-MS進行多成分含量測定，基于數(shù)據(jù)分析軟件，探究厚樸飲片的外觀性狀與內(nèi)在成分的相關(guān)性，篩選影響飲片等級差異指標，結(jié)合層次分析法建立厚樸飲片等級標準綜合評分機制，為中藥飲片質(zhì)量等級評價提供科學依據(jù)。

1材料

1.1儀器

氣相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（型號：7890B+7000D 型，美國安捷倫科技有限公司）；高效液相（型號：Agilent1260型，美國安捷倫科技有限公司）；電子分析天平（型號：AR1140型，奧豪斯國際貿(mào)易上海有限公司）；超聲波清洗機（型號：KQ3200E型，昆山美美超聲儀器有限公司）；電熱恒溫水浴鍋（型號：DZKW-S-6型，北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）；電熱鼓風干燥箱（型號：101型，北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；色差儀（型號：SC-10型，深圳市三恩時科技有限公司）。

1.2試劑

對照品厚樸酚（批號：110729-202015）、和厚樸酚（批號：110730-201915）均購于中國食品藥品檢定研究院；紫丁香昔（批號：AF20112107）、木蘭花堿（批號：AF20082219）均購于成都埃法生物科技有限公司：對照品純度均 ?98.0% ;磷酸、甲醇、乙醇、乙腈等試劑為分析純和色譜純；超純水（實驗室自制）。

1.3 飲片

17批厚樸飲片購自正規(guī)中藥飲片企業(yè)，經(jīng)中醫(yī)藥大學龔力民副教授鑒定為木蘭科植物厚樸MagnoliaofficinalisRehd.etWils的干燥干皮、根皮及枝皮。其產(chǎn)地及編號情況見表1。

2方法與結(jié)果

2.1單指標含量測定

2.1.1水分、總灰分測定按《中國藥典》水分測定法（通則0832）第四法和灰分測定法（通則2302）分別測定厚樸飲片的水分、灰分，平行測定3次，取平均值，結(jié)果詳見表2。

2.1.2厚樸酚、和厚樸酚含量測定按《中國藥典》 一部\"厚樸\"項下方法測定厚樸酚、和厚樸酚含量，結(jié) 果詳見表2。

2.1.3浸出物含量測定現(xiàn)行版《中國藥典》關(guān)于厚樸浸出物測定未給予相應標準，參考藥典通則2201項下浸出物測定法進行測定。預試驗中，熱浸法浸出物含量遠高于冷浸法，醇浸出物含量均高于水浸出物。結(jié)合參考文獻[9]，故采用熱浸法測定醇浸出物，平行測定3次，取平均值，結(jié)果詳見表2。

2.2 外觀性狀測定

2.2.1色度測定色差儀選擇色彩空間CIE（L*、a^*，b^*） ，將厚樸粉末（過三號篩）平鋪于測試盒內(nèi)，于D65光源下測定，重復3次，取平均值[，結(jié)果詳見表2。

2.2.2厚度測定每批飲片隨機抽取約 10g ，使用游標卡尺測量兩端頂點的厚度，平行測量3次，計算平均值，結(jié)果詳見表2。

2.3 HPLC多成分含量測定

2.3.1色譜條件色譜柱 Supersil ODS-B（ 4.6mm× 250mm，5μmλ ，流動相乙腈（A）- .0.15% 磷酸水（B）梯度洗脫 （0～10min，12%A;10～20min，12%～17%A 20～30min 17% ～30% A; 30～40min 30%～40%A ：

40～50min，40%～60%A;50～70min，60%～12%A） 流速 1.0mL/min ，柱溫 ，檢測波長 250nm ，進 樣量 10μL^[12] 。色譜圖見圖1。

2.3.2對照品溶液制備精密稱取厚樸酚、和厚樸酚、紫丁香昔、木蘭花堿對照品適量，加 60% 甲醇溶解并定容，配制成濃度分別為 1550，1008，518，430μg/ mL 的混合對照品溶液。

2.3.3供試品溶液制備取厚樸粉末（過三號篩） ，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入 60% 甲醇 ，密塞，稱定重量，靜置 24h ，超聲 30min 取出放冷， 60% 甲醇補重，搖勻，抽濾， 0.45μm 微孔濾膜過濾，即得。

2.3.4方法學考察 （1）線性關(guān)系考察精密移取“2.3.2”項下混合對照品溶液 0.05，0.10，0.20，0.50， 1.00，2.00mL ，分別用 60% 甲醇定容至 2mL ，按照“2.3.1\"項下色譜條件制備標準曲線。以峰面積為Y軸，質(zhì)量濃度為X軸建立回歸方程，結(jié)果詳見表3，可知各成分在各自范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

（2）精密度試驗取同一批供試品溶液，按\"2.3.1”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，記錄峰面積，結(jié)果顯示厚樸酚、和厚樸酚、紫丁香苷及木蘭花堿的峰面積的RSD分別為 0.10%.0.10%.0.16% 和 0.30% ，表明儀器精密度良好。

（3）穩(wěn)定性試驗取同一份供試品溶液，分別于0.2，4，8，12，24h 時按“2.5.1\"項下條件進樣，結(jié)果顯示厚樸酚、和厚樸酚、紫丁香苷、木蘭花堿峰面積RSD分別為 0.73%，0.11%，1.14%，0.98% ，表明該供試品溶液在室溫 24h 內(nèi)穩(wěn)定。

（4）重復性試驗取同一批供試品粉末，按\"2.3.3”項下方法平行配制6份供試品溶液，按\"2.3.1\"色譜條件進樣，得到厚樸酚、和厚樸酚、紫丁香苷、木蘭花堿峰面積RSD分別為 0.58%0.27%0.58%1.49% 表明方法重復性良好。

（5）加樣回收率取同一批供試品6份各 0.5g ，精密稱定，按約1：1的成分含量比例加人各對照品溶液，按\"2.3.3\"項下方法制備供試品溶液，按\"2.3.1”項下條件進樣。4種成分的平均加樣回收率分別為102.51% 、 101.23% 100.11% ） 103.24% ，RSD分別為1.06%，0.98%，0.76%，1.13% ，回收率符合測定要求。2.3.5樣品含量測定17批厚樸飲片，按\"2.3.3\"制備方法制成供試品溶液，按“2.3.1\"項下色譜條件進樣，計算含量，結(jié)果詳見表4。色譜圖見圖1。

2.4GC-MS揮發(fā)性成分測定

2.4.1揮發(fā)油的提取取厚樸粉末（過二號篩） 100g ，置于圓底燒瓶中，加8倍量水，浸泡過夜，水蒸氣蒸餾法提取 8h ，揮發(fā)油冷卻放置1h，正己烷萃取，無水硫酸鈉脫水后放入4 C 冰箱冷藏備用。

2.4.2GC-MS色譜條件進樣口溫度 250°C ，檢測器溫度 ，載氣為氮氣，進樣量 1μL ，流速1.0mL/min ，分流比30：1，程序升溫（起始溫度 60^°C 以 升至 90^°C ，保持 1min ；以 25C/min 升溫至 145^°C ，保持 5min ；以 1^cmin 升溫至 180^qC ，保持 1min ）。

2.4.3GC-MS質(zhì)譜條件電離方式選擇電子轟擊離子源（electronimpact ionization，EI），電子能量70eV ，離子源溫度 200°C ，四級桿溫度 100^qC ，溶劑延遲 2.1min ，掃描范圍 m/z40～500 。其總離子流圖詳見圖2。

2.4.4厚樸飲片共有揮發(fā)性成分的鑒別與分析各組分峰的質(zhì)譜數(shù)據(jù)通過NIST17數(shù)據(jù)庫檢索比對，設置匹配度大于 80% ，結(jié)合文獻確定其主要揮發(fā)性成分，17批飲片共鑒定出348種揮發(fā)性成分，共有成分7種。結(jié)合文獻選擇石竹素、 .β- -瑟林烯 ?^α- 蒎烯進行分析。采用面積歸一化法計算相對百分含量，結(jié)果詳見表5。

2.5 差異性指標的篩選

2.5.1相關(guān)性分析為探究指標之間相關(guān)程度，篩選出內(nèi)在成分和外觀性狀相關(guān)性程度顯著的指標，采用SPSS23.0軟件對厚樸飲片的11個指標進行相關(guān)性分析，相關(guān)性分析見圖3，紅色代表正相關(guān)，藍色代表負相關(guān)，圖形的大小和顏色深度代表其顯著的程度。 L^*，b^* 與紫丁香苷含量呈極顯著正相關(guān)（Plt;0.01 ，說明厚樸粉末顏色越亮，紫丁香苷含量越高。 a^*，b^* 與浸出物呈顯著正相關(guān) （Plt;0.05） ，說明厚樸粉末顏色越偏紅，浸出物含量越高。選擇 L^*，a^* 、b^* 、厚度、紫丁香苷、和厚樸酚、浸出物共7個指標進行下一步分析。

2.5.2 主成分分析（principal component analysis，PCA） 將篩選出的指標導人SIMCA14.1軟件進行PCA分析，聚為3類，散點圖見圖4。厚樸的第一、第二主成分的特征值分別為3.61、1.46，貢獻率為51.5%.20.9% ，累計貢獻率為 72.4% ，足以反映厚樸的大部分信息。將17批厚樸大致分為3類：第一類：S2、S3、S4、S12、S16;第二類：S1、S5、S6、S7、S9、S10、S17；第三類：S8、S13、S14、S15。其中，S11為離群樣本，已剔除。

2.5.3 正交偏最小二乘法判別分析（orthogonal par-tial least squares-discriminant analysis，OPLS-DA）將篩選出的7個指標導入SIMCA14.1軟件，進行OPLS-DA分析，其結(jié)果與PCA分析一致，散點圖見圖5。模型的 R²X，R²Y 分別為 0.809，0.873 ，預測指數(shù) Q² 為0.853。為防止模型過度擬合，對其進行200次置換檢驗，結(jié)果見圖6，右側(cè) Q² 和 R² 在Y軸的截距均小于原始值說明模型未出現(xiàn)過度擬合。

提取模型中7個指標性成分的重要性投影值，其柱狀載荷圖見圖7，該值可以反映引起的組間差異的權(quán)重大小，其值越大表明該化合物對組間差異的貢獻值越大。以 VIPgt;1 為標準[3篩選出4個差異性指標，分別為 1.23751）和厚樸酚（ VIP=1.227 83 ）、浸出物（ VIP= 1.154 44）。

2.6厚樸飲片的等級劃分

2.6.1 K -均值聚類采用 K -均值聚類分析對16批厚樸飲片的4個差異性指標進行分析，聚為3類，其中心值作為分級的中間值，結(jié)果詳見表6。

2.6.2綜合評分公式建立以及質(zhì)量等級劃分層次分析法是一種嚴謹?shù)闹饔^賦權(quán)法，將定性、定量相結(jié)合的、系統(tǒng)化、層次化的決策分析方法。決策者根據(jù)自己的專業(yè)水平來評判指標的相對重要性，通過構(gòu)建判別矩陣，計算指標權(quán)重系數(shù)來比較不同指標的優(yōu)劣[14]。以相關(guān)性分析結(jié)果與VIP值為標準，確定指標的優(yōu)先順序為： L^?gt; 和厚樸酚 gt;b^*gt; 醇浸出物，利用yaahpV10.3軟件構(gòu)建判斷矩陣，給予L*、和厚樸酚 ，b^* 、醇浸出物權(quán)重分別為： 0.376 0.0.227 2.0.224 6. 0.1722。一致性比例因子 CR=0.008 9lt;0.10 ，表明判斷矩陣具有一致性，權(quán)重系數(shù)有效。依據(jù)權(quán)重系數(shù)，建立厚樸飲片的綜合評分公式：

L*得分 （L*/均值） ×0.376 0×100 （均值：54.79）;

和厚樸酚得分 （和厚樸酚含量/均值） ×0.227 2× 100（均值：6.67）;

b^* 得分 ? （ b^*/ 均值） ×0.224 6×100 （均值：15.87）;

醇浸出物得分 （醇浸出物含量/均值） （均值：17.56）。

總得分 σ=L^* 得分 ^?+ 和厚樸酚得分 ^+b* 得分 + 醇浸出物得分。

將 K -均值聚類中心值代人上述公式，計算不同等級和各個批次厚樸飲片的總得分，結(jié)合市場實際情況，擬將厚樸飲片劃分為三個等級：一等飲片總得分 gt;110 分；二等飲片總得分90＼～110分；三等飲片總得分 _lt;90 分，16批姜厚樸等級劃分結(jié)果見表7。

3討論

在預試驗中，考察了不同溶劑（水與乙醇）不同提取方法（冷浸法與熱浸法），確定以熱浸法測定厚樸的醇浸出物。考察了不同體積分數(shù)甲醇 （90%.80% 、70%60%.50% ）、不同檢測波長 （250，265，294nm） ）不同柱溫 （25，30，36‰ 與不同流速 （0.6，1.0mL/min ）對色譜峰的影響，結(jié)合相關(guān)文獻[12]，確定了HPLC法色譜條件。傳統(tǒng)以厚樸“以皮厚肉細、油性大，氣香，味苦帶辛辣感者為佳”揭示厚樸所含揮發(fā)性成分重要性，為綜合考察厚樸質(zhì)量，采用GC-MS對厚樸飲片的揮發(fā)性成分進行含量測定。

在外觀性狀的指標選擇上，參照《中藥材商品規(guī)格等級（226種）》中皮類藥材的指標，測定其厚度。一直以來，對厚樸的顏色僅停留在藥典的文字描述層面，外表面灰棕色或灰褐色，內(nèi)表面紫棕色或深紫色，主觀性較強，且停留在厚樸藥材表面顏色描述，對厚樸粉末顏色的相關(guān)研究較少，研究不夠全面，因此，利用色差儀測定厚樸飲片粉末的色度值來量化其顏色，讓其變得客觀直接

通過數(shù)據(jù)分析預測 L^*，b^* 、和厚樸酚、醇浸出物可作為判別厚樸質(zhì)量等級的差異性指標。其中包含代表外觀性狀的色度值 L^*，b^* ，而厚樸要“發(fā)汗”至內(nèi)表面變?yōu)樽虾稚蜃睾稚趴墒褂茫瑒t色度值L*、b^* 恰好反映了厚樸“發(fā)汗\"的與否及其程度，體現(xiàn)了“辨狀論質(zhì)\"的中醫(yī)藥理論[15]，朱興龍等[研究發(fā)現(xiàn)，厚樸色度參數(shù) L^*，a^*，b^* 與酚類、氨基酸類化合物關(guān)聯(lián)緊密，沈曉君等研究發(fā)現(xiàn)，厚樸飲片色度 a^* 與總酚含量、浸出物含量呈顯著正相關(guān)，色度 b^* 與浸出物含量呈負相關(guān)。現(xiàn)有報道的結(jié)果都表明厚樸所含有的厚樸酚、和厚樸酚是重要的差異性成分，大部分的藥理研究也圍繞著這兩個化學成分展開，忽略了厚樸中其他的有效成分，而浸出物作為中藥材及飲片的重要的質(zhì)量評價指標，有關(guān)于厚樸醇浸出物的研究卻少見，而通過分析，預測醇浸出物也為影響厚樸質(zhì)量等級的差異性指標，為后續(xù)厚樸的研究指明了方向。

王燁等[8通過構(gòu)建厚樸質(zhì)量常數(shù)來劃分厚樸飲片等級，雖可行，但其含量測定仍然沿用藥典單一測定指標，同時缺乏對厚樸揮發(fā)性成分的考察。對差異性指標進行 K -均值聚類分析，可得到聚類中心值，但以此作為劃分標準是不準確的，其構(gòu)建的質(zhì)量等級標準與藥材實際有較大差距，多指標成分的中藥，各個指標重要程度不同，不能一概而論，因此引用層次分析法對其賦予權(quán)重系數(shù)，根據(jù)相關(guān)性分析結(jié)果及VIP值大小決定4個指標的優(yōu)先順序， L^* 的VIP值最大，優(yōu)先級最高， a^* 與和厚樸酚的VIP值接近，但和厚樸酚相關(guān)性分析與多個指標相關(guān)，所以確定其優(yōu)先級順序大于 a^* ，依據(jù)層次分析法建立綜合評分公式，計算各等級和各個批次厚樸飲片的綜合得分，利用綜合評分公式可快速全面地實現(xiàn)對厚樸飲片的等級進行劃分。

對中藥進行等級劃分是實現(xiàn)中藥“按質(zhì)論價，優(yōu)質(zhì)優(yōu)價”的必要過程，也是臨床療效的重要保證，目前僅存在中藥材商品規(guī)格等級，而缺少對中藥飲片的等級劃分1，且傳統(tǒng)中藥分級憑外觀特點，屬經(jīng)驗判別，缺乏對內(nèi)在成分考量，客觀性不足。目前，已有一些將外觀性狀關(guān)聯(lián)內(nèi)在成分對中藥飲片進行質(zhì)量等級評價的文獻報道[20-23]，本研究對厚樸飲片內(nèi)外質(zhì)量相關(guān)指標進行探究，所建立的綜合評分機制可為中藥飲片質(zhì)量等級標準提供科學依據(jù)，但由于厚樸有兩個來源，另一個來源的質(zhì)量標準還需繼續(xù)進行研究。

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（本文編輯蘇維）