氧化還原敏感夫西地酸載體連接前藥脂質體的制備研究

中圖分類號：R9 文獻標志碼：A

Preparation of redox-sensitive fusidic acid carrier-linked prodrug liposomes

LiBingnan，Wang Zhicheng，Chen Qiuhong，Li Heng，Wei Guanqi，and Wang Qian （Chengdu University of Technology， Chengdu 610000）

Abstract Objective To prepare a new redox-sensitive fusidic acid carrier-linked prodrug liposome system with the aim of enhancing the encapsulation efciency of liposomes，reducing leakage，and strengthening the sensitivityof theredox environment to drug release withinthe bacterialcellenvironment.MethodsRedox-sensitive disulfide bond was used as a connecting bond to connect fusidic acid and cholesterol.The redox-sensitive fusidic acid prodrug liposomes（FSSC-LS） were prepared by the thin film dispersion method to connect the prodrug and phospholipid，using encapsulation eficiency as the evaluation index.The Box-Behnken Design response surface methodology wasutilized tooptimize theFSSC-LS formulation processThe invitro releaseofFSSC-LS using fusidic acid liposomes（FUS-LS）as a control was employed to evaluate its bacterial cel environment-responsive release effect.ResultsFSSC-LS prepared via the optimized formulation processexhibited a mean encapsulation efficiency of 94.61%±0.78% and drug loading of 7.95%±0.32% . The mean particle size and Zeta potential were 108.2nm and ?15.1mV， respectively. The results of the stability investigation showed that the leakage rate of FSSC-LS in 24h was 14.93% of that of FUS-LS at 4°C . In vitro release experiments revealed that the cumulative release rate of FUS-S-LS and FSSC-LS at 48h was 82.29% and 12.27% ，respectively， under simulated normal fluid environment conditions. Meanwhile， the cumulative release rate of FSSC-LS and FSSC-LS at 48h reached 81.37% and 91.39% ，respectively， under simulated intracellular release conditions of Escherichia coli（E.coli）.These resultsdemonstrated that FSSCLS exhibited good redoxrelease activity，withreduced release innormal fluid environments and enhancedrelease in E.coli.FSSC-LS efectivelyreleased fusidic acid in simulated bacterialcellenvironments.ConclusionInthis study， FSSC-LS withhigh encapsulation efficiencyand low leakagerate was successfullyprepared，demonstrating targeted release in response to the sensitive bacterial intracellular environment.This offered a new strategy to reduce systemic toxicity and enhance bacterial ability of drugs against sensitive bacteria.

Key WordsFusidic acid（FUS）;Fusidic acid prodrug（FSSC）;Liposomes;Response surface method;Release;Stability

隨著抗生素的廣泛使用，傳統給藥模式的問題逐漸顯現出來，如全身毒副作用，穩定性差，靶部位藥物濃度及生物利用率低等[1-3]。目前對病原體內環境敏感釋藥的抗生素納米粒載藥系統研究較少，且對于抗生素納米制劑的細菌體內快速釋放藥物的研究目前還未見報道。另外抗生素對生物膜內細菌治療效果差，難以在胞內富集，且難以殺傷胞內存活細菌，導致慢性感染和復發性感染頻發[4]。同時抗生素的耐藥問題也日益嚴重，提高現有抗生素的療效，擴大抗菌譜，老藥新用，也是抗生素研究的熱點問題[5-7]。

夫西地酸（fusidicacid，FUS）是一種高效抗生素，對革蘭陽性菌，尤其是葡萄球菌具有高度敏感性，不易與其他抗生素產生交叉耐藥性，但對大多數革蘭陰性菌不敏感，抗菌譜相對較窄[8]。同時FUS水溶性差、穩定性低、全身毒副作用大以及半衰期短，限制了其在臨床上的應用。

脂質體（liposome，LS）是一種含水內核和脂質雙層球型囊泡，具有良好的生物相容性，可載帶親水和疏水性藥物，在制藥領域廣受關注9。脂質體作為抗生素藥物載體，可提高藥物在炎癥部位局部濃度，抑制細菌誘導耐藥性的產生，同時可減少給藥劑量，降低全身毒副作用[10-11]。研究表明，抗生素脂質體的治療效果優于游離藥物[12]。Nicolosi等[13]制備了FUS普通脂質體，擴大了FUS對革蘭陰性菌的抗菌譜。然而，該載藥脂質體包封率有待提高，未解決儲存及用藥過程中藥物的泄漏問題，以及由此帶來的全身毒副作用問題。

二硫鍵（-S-S-）是氧化還原敏感化學鍵，在新型給藥系統和前藥設計中有較好的應用前景[14-16]。革蘭陽性菌和陰性菌中含有一定濃度膽鹽水解酶（bile salthydrolase，BSH）和谷胱甘肽（glutathione，GSH），均易使二硫鍵斷裂[17]；而人體體液環境和人體細胞環境GSH和BSH濃度較低，難以斷裂二硫鍵。通過在藥物和載體之間引入二硫鍵，制備載體連接前藥，進一步制備載體連接前藥脂質體，有望提高包封率、降低泄漏率；同時，載體連接前藥脂質體只有到達細菌細胞內后，在高濃度BSH或GSH環境下二硫鍵斷裂轉變為原藥，才能從脂質體中釋放出來，有望降低脂質體在體內分布過程中的藥物釋放，達到藥物在細菌細胞內快速釋放的目的[18-19]。

本文將FUS與膽固醇（cholesterol，CHOL）以二硫鍵進行連接，合成FSSC，合成路線見圖1。然后以FSSC代替膽固醇，制備FSSC-LS，旨在提高包封率，降低泄漏率，達到細菌細胞內快速釋放和降低FUS全身毒副作用的目的。

1儀器和試藥

1.1藥品和試劑

FUS（批號C14071728）、二硫代二丙酸（Dithiodipropionic acid，DTPA，批號C14071728）、CHOL（批號J2126326）、4-二甲氨基吡啶（4-dimethylaminopyridine，DMAP，批號K2025119）、1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽[1-（3-dimethylaminopropyl）-3-ethylcarbodiimidehydrochloride，EDC1，BTSJ20220512]、二環己基碳二亞胺（dicyclohexylcarbodiimide，DCC，BTSJ2019X01）、卵磷脂（批號E2125143）、二硫蘇糖醇（dithiothreitol，DTT，批號EZ7890C320）均購自阿拉丁試劑有限公司，質量分數均 gt;98% ；色譜甲醇、石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、冰乙酸均均購置于成都金山化學試劑有限公司。

圖1FSSC合成路線圖Fig.1Synthetic route of FSSC

1.2儀器

2000A型旋轉蒸發器（鞏義市予華儀器公司）；HC-2518型高速離心機（安徽中科中佳科學儀器公司）；TecnaiG2F20型透射電鏡（美國FEI公司）；DS-5510DT型激光粒度儀（英國馬爾文公司）；EssentialLC-16型高效液相色譜儀（日本Shimadzu）;HZ150L型恒溫培養搖床（武漢瑞華儀器設備公司）;ThermoScientificQExactive型高分辨質譜（美國ThermoScientific）；Alpha-1506型紫外可見分光光度計（上海譜元儀器公司）。

2方法和結果

2.1 FSSC的制備

精確稱量CHOL（ 99mg ， 0.26mmol ）、DTDP0 82mg ，0.39mmol）、EDCI（ 50mg ， 0.26mmol ）、DMAP（ 25mg ，0.21mmol）于茄形瓶中，加入15mL二氯甲烷溶解。 30^°C 下回流 24h ，薄層色譜（thin layerchromatography，TLC）監測反應進度。反應完畢后，減壓濃縮，粗產品經硅膠柱層析純化（二氯甲烷：乙酸乙酯 =6：1 ），純化得白色粉末CHOL-S-S-COOH89mg ，產率為 90.13% 。 ¹H NMR（ 400MHz ， CDCl₃. 85.37（dt， J=3.6 1.8Hz ，1H），4.71～4.58（m，1H），2.93（td，J=7.1 ， 1.7Hz ，4H），2.85～2.76（m，2H），2.71（t， J= 7.2Hz ，2H），2.37～2.29（m，2H），2.06～1.91（m，2H），1.88（p， J=3.1Hz ，1H），1.88～1.76（m，2H），1.67～1.40（m，4H），1.40～1.22（m，3H），1.24～1.04（m， 4H），1.02（d， J=16.1 Hz，0H），1.02（s，4H），1.00～0.92（m，1H），0.91（d， J=6.6 Hz， 3H）， 0.86（dd， J=6.6 1.8Hz ，6H），0.68（s，3H）。

圖2 CHOL-S-S-COOH'HNMRFig.2 CHOL-S-S-COOH'HNMR

CHOL-S-S-COOH的"¹H NMR（圖2）結果顯示5.37"ppm、4.71～4.58ppm處分別對應于膽固醇a位和b位上2個氫的信號， 2.93ppm 、2.85～2.76 ppm和2.71ppm處分別出現三重峰，這是相鄰碳上氫原子之間的自旋偶合造成的共振峰裂分現象，說明二硫代二丙酸的4個亞甲基存在。通過核磁圖計算出CHOL-S-S-COOH上的膽固醇，DTDP的峰面積比，確定CHOL-S-S-COOH上的膽固醇，DTDP的摩爾比為1：1，結果說明CHOL-S-S-COOH的成功偶聯。

精確稱量中間體CHOL-S-S-COOH（150 mg，0.26 mmol）、FUS（100 mg，0.17 mmol）、DCC（80 mg，0.39mmol 和DMAP（ 50mg ， 0.41mmol 于茄形瓶中，加入 15mL 二氯甲烷溶解， 25°C 下磁力攪拌反應 24h ，TLC監測反應進度（石油醚：四氫呋喃 =3：1 ）反應完畢后，減壓濃縮，粗產品經硅膠柱層析純化（石油醚：四氫呋喃 ，純化得白色粉末FSSC78mg ，產率為 78% 。

FSSC的 ¹H NMR見圖3，由圖可知 5.88ppm 、5.16～5.04ppm 、 4.34～4.24ppm 、 3.44ppm 分別對應于FSSC上a位、c位、e位、f位上的氫信號，均為FUS的特征峰；5.37和 4.63ppm 分別對應于FSSC上b位和d位的氫信號，均為CHOL的特征峰。 2.99～ 2.87ppm 、2.81～2.67ppm分別對應于FSSC上g位、h位、i位和j位的氫信號，均為DTDP上的4個亞甲基的特征峰。同時在FUS上e位上的醇羥基消失。在FSSC氫譜中，分別能找到FUS、DTDP和CHOL的特征峰相對應。通過核磁圖計算出FSSC上的FUS，CHOL-S-S-COOH的峰面積比，確定FSSC上的FUS，CHOL-S-S-COOH的摩爾比為1：1，這些結果說明FSSC的成功偶聯。

圖3FSSC'HNMRFig.3FSSCHNMR

FSSC的 ¹³C NMR見圖4，由圖可知180～150 ppm對應于FSSC羰基上的碳原子、 150～90ppm 對應于FSSC烯烴上的碳原子、 90～10ppm 對應于FSSC上的脂肪鏈碳原子和飽和碳原子。

圖4 FSSC ¹³C NMRFig.4 FSSC ¹³C NMR

HRMS（ESI） m/z： calcd for C₆₄H₉₉O₉S₂[M-H]^- 新1075.6731;found1075.6755，譜圖見圖5。

2.2.1FUS高效液相色譜分析方法的建立

FUS高效液相色譜檢測條件為：色譜柱HederaODS-2 （4.6mm×150mm ， 5μm） ；流動相為甲醇：超純水 ；流速 1.0mL/min ；進樣量 20μL ；柱溫30^°C ；檢測波長 212nm 。

（1）專屬性（空白脂質體、藥物，載藥脂質體）

精密量取FUS溶液、空白脂質體溶液和FUS-LS溶液 2mL 于 25mL 容量瓶，分別加入10倍量甲醇消解，流動相稀釋定容，按照FUS高效液相色譜條件進樣，得到對應的色譜圖，結果見圖6。

從圖6中可看出FUS的保留時間為 11.21min ，峰型和分離度良好，脂質體中包載材料及甲醇溶劑對FUS的測定無干擾，說明該方法專屬性良好。

（2）標準曲線

將FUS溶液配制成濃度為2.0、10.1、20.2、40.4、80.8和 101.0μg/mL 的FUS溶液，按照FUS高效液相色譜條件進樣，記錄峰面積。以濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，并進行線性回歸，得線性方程 Y=10735X+3449.9 ， R²=0.9996 。結果顯示在 2.0～101.0μg/mL 濃度范圍內，線性關系良好。

（3）精密度和準確度

取 40.4μg/mL FUS溶液，連續進樣6次，記錄峰面積，并計算RSD。結果顯示RSD為 0.38% ，說明建立的含量分析方法精密度良好。

圖5FSSC質譜圖

Fig.5 MS spectrum ofFSSC

圖6（a）空白脂質體、（b）FUS、（c）FUS-LS的HPLC圖

Fig.6HPLC chromatography of（a）Blank liposomes，（b）FUS，and （c）FUS-LS

分別取濃度為10.1、20.2和 40.4μg/mL FUS溶液，按照FUS高效液相色譜條件進樣，記錄峰面積，帶入標準曲線計算測得濃度，計算回收率。結果顯示平均回收率均在 98.0%～102.0% 范圍內，準確度良好。

2.2.2 FSSC高效液相色譜分析方法的建立

FSSC高效液相色譜檢測條件為：色譜柱HederaODS-2 （4.6mm×150mm ， 5μm） ；流動相為甲醇：超純水 =30：70（V/V） ；流速 1.0mL/min ；進樣量 20μL ；柱溫30^°C ；檢測波長 206nm 。

（1）專屬性（空白脂質體、藥物，載藥脂質體）

精密量取FSSC溶液、空白脂質體溶液和FSSC-LS溶液 2mL 于 25mL 容量瓶，分別加入10倍量甲醇消解，流動相稀釋定容，按照FSSC高效液相色譜條件進樣，得到對應的色譜圖，結果見圖7。

從圖7中可看出FSSC的保留時間為 7.92min ，峰型和分離度良好，脂質體中包載材料及甲醇溶劑對FSSC的測定無干擾，說明該方法專屬性良好。

（2）標準曲線

配制濃度為1.0、2.1、10.5、42.0、84.0和105.0μg/mL 的FSSC溶液，按照FSSC高效液相色譜條件進樣，記錄峰面積。以濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，并進行線性回歸，得線性方程 Y=10896X+1154.1 ， r²=0.9998 。結果顯示在1.0～105.0μg/mL 濃度范圍內，線性關系良好。

（3）精密度和準確度

取 42.0μg/mL FSSC溶液，按照FSSC高效液相色譜條件連續進樣6次，記錄峰面積，并計算RSD。結果顯示RSD為 10.63% ，建立的含量分析方法精密度良好。

分別取濃度為2.1、42.0和 84.0μg/mL FSSC溶液，按照FSSC高效液相色譜條件進樣，記錄峰面積，帶入標準曲線計算測得濃度，計算回收率。結果顯示平均回收率均在 98.0%～102.0% 范圍內，準確度良好。

2.3脂質體包封率和載藥量的測定

取 200μL 載藥脂質體于 ?5mL 容量瓶中，加入 3mL 甲醇 50Hz 超聲 5min 破乳定容，按“2.2”項下確定的色譜條件，進樣測定，計算得總藥量 （W₀） 。同時取200μL 載藥脂質體通過葡聚糖G-50凝膠柱分離，分離后的脂質體 40^°C 減壓旋蒸濃縮至約 200μL ，加 λ3mL 甲醇 50Hz 超聲 5min 破乳定容至 5mL ，進樣測定，得脂質體包封藥量 （W₁） ，設制備脂質體時載體材料的投入量為 。分別按公式1和公式2計算包封率和載藥量。

包封率 載藥量

式中 W₁ 為包封藥物的質量， W₀ 為總藥物的質量， 為制備脂質體時載體材料的投入量。

2.4脂質體的制備

2.4.1 FUS-LS的制備

采用薄膜分散法，制備FUS-LS。分別量取 2.5mL 卵磷脂溶液 （2.0mg/mL ， 0.5mL FUS溶液 1.0mg/mL 0和 10.5mLCHOL（1.0mg/mL） 溶液于圓底燒瓶中， 40°C 減壓旋蒸除去有機溶劑形成均勻薄膜；加入2.5mLpH7.4PBS緩沖液， 30^°C 水合 6min ，冰水浴下探頭超聲5min（功率 360W ，工作 2s ，休息3s），制備得到FUS-LS。包封率為 75.37% ，載藥量為 16.28% 。

2.4.2 FSSC-LS的制備

除采用FSSC代替FUS和部分膽固醇膜材外，FSSC-LS的制備方法同FUS-LS。

圖7（a）空白脂質體、（b）FSSC、（c）FSSC-LS的HPLC圖 Fig.7HPLC chromatography of（a） Blank liposome，（b） FSSC，and（c） FSSC-LS

（1）FSSC-LS處方優化

通過前期單因素實驗，優化FSSC-LS處方工藝。以包封率作為評價指標，選擇脂藥比（磷脂：FSSC）、膜材比（磷脂：膽固醇）、水合體積3個主要影響因素，每個因素3個水平，使用Box-BehnkenDesign進行響應面優化分析，篩選最優處方。具體水平設置見表1，試驗安排及結果見表2。

（2）響應面優化分析

利用Design-expert軟件對表2數據進行擬合，得到最優擬合方程，該方程式為： 0.6150A+3.24B+1.85C+1.49AB+1.61AC-0.1950BC+0.1950BC-0.185A 16.40A²-10.12B²-0.7740C² 模型： Plt;0.05 ，變異系數CV為 2.23% ， R²gt;0.9872 表明該方程擬合充分。該模型可用于篩選確定FSSC-LS最佳處方制備條件。

表1因素與水平表 Tab.1 Factors and levels

表2響應面法實驗設計和結果

Tab.2Experimental design and results of the response surface method

通過Design-expert軟件得到3個影響因素之間的3D交互作用曲面圖，分析不同影響因素對脂質體包封率的影響，結果見圖8所示，隨著脂藥比、膜材比、水合體積的增加，包封率呈現先增加后減少的趨勢。包封率與脂藥比的關系存在一個極值點，脂藥比過高過低均不好；包封率與膜材比之間的關系也存在極值點，取中間值較好；水合體積也顯示取中間值較好。對各因素進行預測，得到最優處方為脂藥比 （A） 為10.19：1，膜材比 （B） 為10.77：1，卵磷脂濃度為 1.25mg/mL ，FSSC濃度為 10.12mg/mL ，水合體積為 2.5mL ，膽固醇濃度為 0.13mg/mL ，包封率預測值為 95.78% 。

（3）處方驗證

按最優處方工藝平行制備3批FSSC-LS，樣品的平均包封率為 94.61%±0.78% ，與理論預測值 95.78% 接近，證明模型擬合成功，可用于FSSC-LS的處方優化分析，結果可靠。

2.5 FSSC-LS質量評價

2.5.1 表面形態觀察

采用透射電子顯微鏡（transmissionelectronmicroscopy，TEM）觀察FSSC-LS的形貌及分布。采用磷鎢酸負染法制備樣品，取適量FSSC-LS溶液，滴加至銅網上，放置 15min ，再次滴加適量磷酸鎢負染液，放置 5min ，TEM下觀察脂質體的形貌，結果見圖9。結果表明，FSSC-LS均呈現較為規則的類球形結構，且粒徑大小較為均一。

2.5.2 粒徑及Zeta電位

取適量FSSC-LS混懸液，馬爾文激光粒度儀（DLS）測定其粒徑和Zeta電位，結果見圖10～11所示。FSSC-LS平均粒徑為 108.20nm ，PDI為0.235，Zeta電位為- .15.1mV 。同時將制備的FSSC-LS（圖12）于 4°C 下存放，DLS測量0～7d平均粒徑和多分散指數（PDI，見圖13。由圖13所示，FSSC-LS在0～7d粒徑和PDI變化較小，證明制備的FSSC-LS較為成功。

2.6脂質體體外釋放

采用反向透析法考察FUS-LS和FSSC-LS在正 常細胞外環境和大腸埃希菌細胞內的釋放行為。

Fig.8The response surface and contour plots

圖8響應曲面圖及等高線圖

圖9FSSC-LS透射電鏡圖Fig.9TEMofFSSC-LS

圖11FSSC-LSZeta電位Fig.11 FSSC-LS Zeta potential

圖10FSSC-LS粒徑分布Fig.10 FSSC-LS particle sizedistribution

圖12FSSC-LS丁達爾效應 Fig.12TheTyndall effect ofFSSC-LS

圖130～7dFSSC-LS粒徑和PDI變化曲線 Fig.13 FSSC-LS particle size and PDI change curves

選用含 的DTT的磷酸鹽緩沖液 （pH7.4 1% SDS）為模擬正常細胞外環境釋放介質，記為釋放介質1；選用含5mmol/LDTT的磷酸鹽緩沖液（pH5.4， 1% SDS）為模擬大腸埃希菌細胞內環境釋放介質，記為釋放介質2。取 2mL 制備的脂質體溶液于200mL 釋放介質中，將裝有 3mL 釋放介質的透析袋（Mw=8000～14000Da）夾緊后置于恒溫培養搖床中（溫度 37^°C ，分別于0.5、1、2、4、8、12、24和48h精密吸取 200μL 透析袋中樣品并補充等體積空白釋放介質，樣品按“2.2.1和2.2.2”項下確定的色譜條件，進樣含量測定（當FSSC-LS在釋放介質2中，高濃度DTT使FSSC二硫鍵斷裂形成巰基，硫元素上的孤對電子進攻羰基，酯鍵斷裂，還原成醇，FSSC在5mmol/LDTT中釋放的HPLC色譜圖，見圖14）[20]，計算各取樣點藥物釋放量和累積釋放百分率 （Q%）^[21] ，以時間為橫坐標， Q% 為縱坐標，得到FUS-LS和FSSC-LS釋藥曲線，見圖15。

注：a-峰為FSSC；b-峰為FUS。 圖14FSSC釋放HPLC圖 Fig.14 HPLC chromatography of FSSC release

由圖15可知，在正常細胞外環境中，FUS-LS48h Q% 達到 82.29% ，而FSSC-LS48h Q% 只有12.27% ，僅為FUS-LS的 15% ；結果證明，通過制備載體連接前藥，大大提高了FSSC-LS在轉運分布過程中的穩定性，極大地減少了脂質體在細菌細胞外藥物釋放，有利于降低FUS的全身毒副作用和提高藥物進入細菌細胞的量。在模擬大腸埃希菌細胞內環境條件下，FUS-LS48h Q% 為 81.37% ；而FSSC-LS 48h Q% 達到 91.39% ，是在正常細胞外環境中的7.4倍，顯示制備的FSSC具有一定的大腸埃希菌細胞內快速釋藥特性。以上結果證明將FUS與膽固醇偶聯制備成載體連接前藥FSSC，制備得到的FSSC-LS具有較好的大腸埃希菌細胞內快速釋藥作用，有望降低FUS全身毒副作用，達到提高FUS對大腸埃希菌等敏感細菌抗菌能力的目的。

圖15FUS-LS和FSSC-LS體外釋放曲線 Fig.15 In vitro release curves ofFUS-LS and FSSC-LS

表3FSSC-LS脂質體釋放曲線方程擬合 Tab.3FSSC-LS liposome release curve equation fitting

對FSSC-LS的體外釋藥曲線分別進行零級動力學方程、一級動力學方程和Higuchi方程進行擬合。結果見表3（其中 Q 為累積釋放量，t為釋放時間）。由表3可知，在模擬正常細胞外環境條件下，FSSC-LS體外釋放行為以Higuchi方程擬合較好，藥物釋放為擴散和骨架溶蝕并存。而在模擬大腸埃希菌細胞內環境釋放介質條件下，FSSC-LS釋藥行為更符合一級動力學模型。

2.7脂質體穩定性考察

取FUS-LS和FSSC-LS于 4°C 下存放，分別于0、0.5、1、2、4、6、8、12和24h精密吸取 400μL 樣品，按“2.3”項下脂質體包封率和載藥量的測定方法處理樣品，根據“2.2”項下確定的色譜條件，進樣測定，計算泄漏率。以時間為橫坐標，泄漏率為縱坐標。其中泄漏率 =（EE-EE_i/EE）×100%（EE 指脂質體初始包封率， EE_i 指儲存一段時間后脂質體包封率），得到FUS-LS和FSSC-LS泄漏率曲線，見圖16。

由圖16可知，隨著時間的延長，2種脂質體泄漏率逐漸增大，但是FSSC-LS的泄漏率明顯低于FUS-LS。 4^°C 條件下，FSSC-LS 24h 泄漏率是FUS-LS的14.93% 。因此將FUS與膽固醇偶聯制備成載體連接前藥FSSC能有效降低FUS-LS泄漏率。

3結論

本文將FUS和膽固醇以二硫鍵為連接鍵，制備了載體連接前藥，并進一步制備FSSC-LS，其具有較高包封率和良好的穩定性。在模擬正常細胞外環境條件下FSSC-LS的 Q% 遠低于FUS-LS，而在模擬敏感菌細胞內環境條件下，FSSC-LS釋藥達到91.39% 。顯示制備的FSSC-LS具有較好的敏感細菌細胞內環境藥物釋放響應性，有望提高FUS的在細菌細胞環境釋放速率，增強其抗菌作用。課題設計制備的氧化還原敏感夫西地酸載體連接前藥脂質體有望為降低抗生素全身毒副作用和提高抗菌能力提供實驗基礎和新思路。

圖16FUS-LS和FSSC-LS泄漏率曲線 Fig.16LeakratecurvesofFUS-LSandFSSC-LS

參考文獻

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