新疆沙棘活性物質對離體蛙心活動的影響及機制研究

【中圖分類號】R285 【文獻標志碼】A 【文章編號】1007-8517（2025）15-0021-06

DOI： 10.3969/j .issn.1007-8517.2025.15. zgmzmjyyzz202515006

Study on the Effects Mechanisms Active Substances from Sea Buckthorn ontheActivityInVitroFrogHearts

LI Xingyuan1ZHAOYapingWANG Shifeng*WANG YuzhouYUSUPU·Kaidiriye CollegeLife Geographic Sciences，Kashi University，Kashi 844OOO，China

Abstract：Theactivesubstances seabuckthornhavetheeffectsreducing myocardialcontractility protecting theheart. This articleusesseabuckthornfruitsfromtwosubspeciesthreeproductionareasin China，aswellasaseabuckthorn juice beverage，todetettetsods，lolstoyasieedsspiely；Adeef tivesubstanceontheisolatedfrogheart.Theresultsshowedthattheorderactivesubstancecontentfromhightolowwas：Chinese seabuckthorn（from Lvliang） gt; Central Asian seabuckthorn（from Ta County） gt; Central Asian seabuckthorn （from Kashgar City）; The inhibition rates water extract extract on frog heart contractility were 50.4% 77.0% ， 57.7% 74.8%， 53.3% （204號 55.3% ，respectively. The inhibition rate seabuckthorn beverage was 68.2% ， the difference was extremely significant （ Plt;0 O1）.Afteradingfourtypescardiacreceptorblockers，theefectseabuckthoextractonfrogheartalphabetareeptorssignificantly decreased，while the effect on M receptors Ca²⁺ channels did not change significantly. This indicates that the active substancesseabuckthorhavethefectreducing myocardialcontractility，whichisrelatedtoalphabetareceptosdoesnot directly act on M receptors Ca²⁺ channels.

words：seabuckthorn；Active substances；Detached frog heart；Blocking agent

沙棘（HippophaerhamnoidesL.）屬于胡頹子科沙棘屬，別名又叫醋柳果、醋刺柳、酸刺、黑刺、醋柳等，為小灌木或喬木，其莖、葉、花、果、籽均可入藥，具有悠久的藥用歷史，是蒙古族、藏族習用藥材，曾先后被《月王藥診》《四部醫典》《晶珠本草》《蒙藥正典》《中華人民共和國藥典》等書記載[1]。我國作為世界上沙棘資源最豐富的產地，有著豐富的沙棘資源，現有5個種8個亞種[2]。

有研究顯示沙棘中含有大量黃酮、多酚、多糖、維生素、脂肪酸、蛋白及其他成分，具有抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、降血糖、緩解心血管疾病、增強免疫力、抗炎抑菌等作用。然而沙棘中活性物質發揮作用的機制尚不夠明確，對分布于不同海拔地區的沙棘中活性物質含量差異研究較少。本文為探究不同亞種、不同海拔沙棘活性物質含量差異以及活性物質含量與氣候環境如海拔、輻射的相關性，選擇國內分布最廣泛的亞種-中國沙棘（產自山西呂梁）、新疆常見亞種－中亞沙棘（產自塔什庫爾干塔吉克自治縣，后文簡稱塔縣，平均海拔約 3300m ）、中亞沙棘（產自喀什市，平均海拔約 1290m ）以及一種市面常見的沙棘汁飲品（生榨沙棘汁GB7101，原料沙棘品種為中亞沙棘）為研究對象，比較兩個亞種三個產地的沙棘果及中亞沙棘汁飲品中黃酮、多酚、原花青素和三萜酸四種活性物質的含量，并分別檢測三種沙棘果的水提液、提取液和沙棘汁飲品對離體蛙心的影響；通過添加作用于心肌受體的四種阻斷劑探究沙棘活性物質對心肌的作用機理，旨在為沙棘的醫藥開發提供理論依據。

1材料與方法

1.1材料與儀器中國沙棘（產自山西呂梁，市售）；中亞沙棘（產自塔縣，市售）；中亞沙棘（產自喀什市，市售）；牛蛙7只（購于喀什三運司市場），雌雄不限；沙棘汁飲品（塔縣市售）。

科羅索酸標準品（南京源植生物科技有限公司，CAS號：4547－24-4，色譜級）；原花青素標準品（南京源植生物科技有限公司，分析級，批號：202307－230704）；無水乙醇（色譜級）；蘆丁標準品（分析級）；沒食子酸標準品（分析級，批號：20210020）；硝苯地平緩釋片溶液、普羅奈爾溶液（批號：E231229）、阿托品溶液（CAS號：5908-99-6）、鹽酸特拉唑嗪溶液（批號：2311021）購于藥店；其余試劑為分析純。

800A破壁機； KQ-200VDB 雙頻數控超聲波清洗器；RE-52AA旋轉蒸發儀；UV－1800紫外可見分光光度計；BL-420N生物信號采集與分析系統、BL-420A張力換能器（成都泰盟科技有限公司）；高效液相色譜儀（日立高新技術公司，色譜柱為 HITACHI HPLC Column C₁₈ 柱（ 4.6mm× 250mm ， 5μm ），填充基質為高純硅膠）等。

1.2活性物質提取參考封可欣[4超聲波輔助提取法，先使用超聲波輔助提取法制備沙棘粗活性物質提取液再進行純化。

1.2.1 沙棘活性物質粗提取液制備將三種沙棘干果用破壁機進行粉碎，分別準確稱取三種沙棘果粉各 5g 置于三個 250mL 錐形瓶中，加入 60% 乙醇110mL ，在 60^°C ， 210W 條件下超聲提取 45min ，之后以 8000r/min 轉速離心 10min ，取上清液在60C 條件下旋蒸至無醇味（蒸干乙醇，約 30mim ）。1.2.2活性物質提純參考趙明惠[5]等的研究選用AB-8大孔樹脂對提取物進行去雜處理，參考張冀凡[等方法進行震蕩、過柱、洗脫、旋蒸。1.2.3三萜酸待測液的制備依據劉偉等的方法，分別取三種沙棘果粉各 2g 放人 50mL 的燒杯中，按照1：20 的料液比加無水乙醇封口后在25C 、 50% 功率下超聲提取 ¹h ，超聲結束后將料液轉移至燒瓶中，加熱回流提取 ^2h 后過濾，取濾液以 10000r/min 離心 1min 備用。

1.2.4沙棘汁飲品處理取沙棘汁飲品 50mL ，以 8000r/min 轉速離心 10min ，取上清液備用。

1.3活性物質含量測定

1.3.1黃酮含量的測定參考吳翠芳等[8的方法建立黃酮標準曲線。

1.3.2多酚含量的測定多酚標準曲線的建立：參考葛亮等的方法建立沒食子酸標準曲線。取3mL在“1.2.1”中提取出的總活性物質按照上述方法測出 765nm 處吸光值，計算多酚含量，總多酚提取率 μ=V×C/M ，其中 v 為獲得的活性物質提取液，C為提取液中多酚的濃度，M為沙棘用量。1.3.3原花青素含量的測定參考凌立貞等[10]的方法建立原花青素標準曲線。

1.3.4三萜酸標準曲線的建立參考劉偉等[]方法略做改動，精準稱取科羅索酸標準品 6mg ，以甲醇為溶劑溶解于 10mL 的容量瓶中，用甲醇定容。得到濃度為 0.60mg/mL 的科羅索酸標準溶液。分別取 0.5mL ！ 0.6mL ： 0.8mL 1 0.9mL 、1.0mL 樣液于 5mL 容量瓶中，配制科羅索酸的濃度梯度為 6.4μg/mL ， 7.4μg/mL ， 9.2μg/mL ，11.16μg/mL ， 12.4μg/mL 的待測液。進行高效液相色譜檢測，檢測條件：波長 205nm ，柱溫 25^°C ，流動相V（甲醇） ：V（0.1% 冰醋酸） ，流速1mL/min ，進樣量 10μL 。科羅索酸出峰時間為12.6min 。采用同等條件對“1.2.3”中的待測液進行高效液相色譜檢測并計算含量，三萜酸的提取率等于各三萜酸的量/沙棘原料質量。

1.4沙棘提取液對牛蛙離體心臟的影響

1.4.1沙棘水提液的制備參考糟亞男等[1]的方法分別制得三種沙棘的粗浸出液。1.4.2離體蛙心標本的制備采用斯式離體蛙心灌流法[2制備牛蛙離體心臟標本備用。1.4.3沙棘提取液對離體蛙心功能的影響向離體蛙心加入任氏液，記錄正常心搏曲線，分別加入三種沙棘提取液，觀察心搏變化，重復3次。

1.5沙棘活性物質對離體蛙心功能作用機制的探究參考鄧加艾[13]的實驗思路，分別加人 2μg/ mL的 ∝ 受體阻斷劑鹽酸特拉唑嗪、 β 受體阻斷劑普萘洛爾、M受體拮抗劑阿托品和 Ca²⁺ 通道阻斷劑硝苯地平，再加入沙棘提取液，觀察心搏變化，分析沙棘提取液對離體蛙心可能的作用機制。

1.6 數據處理方法

1.6.1活性物質含量測定黃酮、多酚、原花青素含量測定通過紫外分光光度計獲取吸光值數據，科羅索酸通過高效液相色譜法測出峰面積，使用Excel表格中的圖表工具制作標準曲線，通過公式計算樣品含量。

1.6.2對蛙心灌流的影響蛙心灌流通過 BL-420N生物信號采集與分析系統獲取蛙心心率和心肌收縮力數據，使用IBMSPSSStatistics27軟件采用Ψ_t 檢驗分析差異，數據以均數加減標準差！ 表示，液相結果使用OriginPro2024軟件繪圖。

2 結果與分析

2.1活性物質含量及提取率測定根據“1.3”實驗可以得出：蘆丁標準曲線為： y=0.0115x 10. 0257， r²=0.9954 ，由此可知蘆丁標準品在 8～48 μg/mL 質量濃度范圍內線性良好；沒食子酸標準曲線為 y=0.0095x+0.0023 ， r²=0.9977 ，可知沒食子酸標準品在 4～40μg/mL 質量濃度范圍內線性良好;原花青素標準曲線為 y=0.008x-0.0396 ， r²= 0.9950；可知原花青素標準品在 10～200μg/mL 質量濃度范圍內線性良好。通過各種標準曲線公式和吸光值計算出三種物質提取率，見表1。

表1三種活性物質含量及提取率的測定結果表

由表1可知，活性物質含量依次為沙棘飲料 gt; 中國沙棘（產自呂梁） gt; 中亞沙棘（產自塔縣）gt; 中亞沙棘（產自喀什市）。根據“1.3.4”條件測出科羅索酸標準曲線為 y=2842.2x-7502.7 r²=0.994 0 ，由此可知科羅索酸標準品在 64～124 μg/mL 質量濃度范圍內線性良好。由于沙棘汁飲品難以通過濾膜，所以僅進行三種沙棘三萜酸含量測定，科羅索酸檢測色譜圖如圖1所示，含量測定結果見表2，可知科羅索酸含量依次為中國沙棘（產自呂梁） gt; 中亞沙棘（產自塔縣） gt; 中亞沙棘（產自喀什市）。說明中亞沙棘的黃酮、多酚、原花青素、科羅索酸等活性物質含量高于中亞沙棘，同一亞種的中亞沙棘，地處高海拔的中亞沙棘（塔縣）活性物質含量高于低海拔的喀什市。

表2科羅索酸含量測定結果表

B.為產自呂梁的中國沙棘；C.為產自塔縣的中亞沙棘；D.為產自喀什市的中亞沙棘

圖1科羅索酸標準品的HPLC色譜圖（A）、三種沙棘科羅索酸HPLC色譜圖（B、C、D）

2.2沙棘活性物質對離體蛙心的影響

2.2.1三種沙棘水提液對蛙心灌流的影響向離體蛙心中分別加入三種沙棘的水提液，得到蛙心博曲線如圖2所示：沙棘水提液對蛙離體心臟具有明顯抑制作用，其差異極顯著（ Plt;0.01 ）；但心臟心率變化不明顯（ Pgt;0.05 ），結果見表3。三種沙棘水提液對蛙心心肌收縮力抑制率由強到弱為：中亞沙棘（產自塔縣） gt; 中亞沙棘（產自喀什市）gt; 中國沙棘（產自呂梁），三種沙棘水提液對蛙心抑制能力有差異，但差異不顯著（ Pgt;0.05 ）。

表3三種沙棘水提液對蛙心的影響情況表

注：與對照（任氏液）比較，差異極顯著（ ⁸Plt;0.01） 。

2.2.2 三種沙棘提取液及沙棘飲品對蛙心灌流的影響更換蛙心，用任氏液調節，先后向蛙心灌流三種沙棘提取液及中亞沙棘飲品，更換提取液時用任氏液平衡，得到蛙心博曲如圖3所示。與圖2A對比可以看出：沙棘提取液及沙棘飲品對蛙心有明顯的抑制作用（ Plt;0.01 ）；蛙心心率無差異（ ，見表4。三種沙棘提取液及沙棘汁飲品對蛙心心肌收縮力的抑制率由強到弱為：中國沙棘（產自呂梁） gt; 中亞沙棘（產自塔縣） gt; 沙棘汁飲品 gt; 中亞沙棘（產自喀什市）。

A正常蛙心的博曲圖；B.加人中國沙棘（產自呂梁）水提液后蛙心博曲圖；C.加入中亞沙棘（產自塔縣）水提液后蛙心博曲圖；D.加入中亞沙棘（產自喀什市）水提液后蛙心博曲圖

圖2沙棘水提液對離體蛙心的影響情況圖

A.加入中國沙棘（產自呂梁）提取液后蛙心博曲圖；B.加入中亞沙棘（產自塔縣）提取液后蛙心博曲圖;C.加入中亞沙棘（產自喀什市）提取液后蛙心博曲圖；D加入中亞沙棘飲品后蛙心博曲圖

圖3沙棘提取液對離體蛙心的影響

表4三種沙棘提取液及中亞沙棘飲品對蛙心灌流的影響情況表

注：與對照（任氏液）比較，差異極顯著（ ^BPlt;0.01） 。

2.3沙棘活性物質對蛙心的影響機制探究

2.3.1 ∝ 受體受作用探究向離體蛙心加入鹽酸特拉唑嗪溶液后蛙心收縮心肌收縮力不變，加入沙棘提取液后蛙心心肌收縮力由（ 6.400±0.001 ）降低為（ 5.600±0.287 ）（ Plt;0.05. ，抑制率由原來的 77.0% 降低至 12.5% ，心率基本不變。

2.3.2 β 受體受作用探究向蛙心進行加入普萘洛爾溶液，蛙心心肌收縮力由（ 5.700±0.755 ）下降為 （5.160±0.108 ）（ Plt;0.05） ，抑制率為 9.4% 。加入沙棘提取液作用后，蛙心心肌收縮力抑制率由 77.0% 降低至 18.1% ，心率基本不變。

2.3.3M受體受作用探究向蛙心加入阿托品溶液，蛙心心肌收縮力由（ 6.735±0.170 ）升高為（ 9.065±0.090? ，升高 34.59% ，加入沙棘提取液作用后，蛙心心肌收縮力降低為（ （0.745±0.773 ）（ Plt;0.01 ），抑制率提升至 88.93% ，心率略有上升。

2.3.4 Ca²⁺ 通道受作用探究向蛙心加人硝苯地平溶液，蛙心心肌收縮力由（ 3.687±0.386 ）降為 3.185±0.191 ），抑制率為 13.6% 。加入沙棘作用液，心肌收縮力下降為（ 1.505±0.393 ）（Plt;0.01） ，抑制率為 59.2% ，心率略有下降。

3討論

吳翠芳等[8]測得黃酮提取率 2.316mg/g ，呂佳瑋等[14]測得多酚提取率 8.6mg/g ，張朝等[15]測得原花青素提取率 3.07mg/g ，劉偉等測得三萜酸提取率 0.332mg/g ，以上結果與本文中國沙棘（產自呂梁）的四種活性物質的提取率接近，結果一致。但中亞沙棘的提取率明顯低于中國沙棘，由于中亞沙棘是大果沙棘，中國沙棘是小果沙棘，沙棘中活性物質含量品種有關。另外同屬于中亞沙棘，產自地處高海拔塔縣的沙棘活性物質含量明顯高于產自平原地區的喀什，有研究表明，苯丙素類和黃酮類化合物的含量與西藏光核桃、擬南芥和水稻對紫外線的耐受性有關。蘭衛等[16]發現山區的昆侖雪菊中黃酮、多糖等活性物質含量明顯高于其他品種菊花，源于山區日照時間長，晝夜溫差大便于光合作用。與本文中高海拔地區沙棘活性物質含量高于平原地區結果一致。因此推測高海拔環境的強紫外輻射、長日照、溫差大等氣候因素有利于沙棘黃酮類物質生成。

三種沙棘提取液以及沙棘飲料對蛙心心肌收縮力抑制率由強到弱為：中國沙棘（產自呂梁，77.0% ） gt; 中亞沙棘（產自塔縣， 74.8% ） gt; 沙棘汁飲品（ 68.2% ） gt; 中亞沙棘（產自喀什市，55.3% ），這與測出的四種活性物質含量順序相同，推測活性物質對心肌的抑制作用存在濃度依賴性。

加人受體和β受體阻斷劑后，心肌收縮力下降減慢，抑制率下降，因此推測沙棘活性物質能通過抑制兩種受體的作用效果來降低心臟收縮力。加入M受體阻斷劑后，心肌收縮力依然下降明顯，可見沙棘活性物質對蛙心的作用不直接作用于M受體，即沙棘活性物質對心肌收縮力的抑制作用是通過其他途徑實現的，這與姜一等[12]證實的阿托品不能拮抗沙棘黃酮抑制心肌收縮結論相一致。加入 Ca²⁺ 阻斷劑硝苯地平后，沙棘活性物質對蛙心心肌收縮力的抑制效果基本不變，由此推斷沙棘活性物質不是通過阻斷 Ca²⁺ 通道對蛙心起抑制作用，這與姜一等[12]、呂恒慧[17]研究結果一致，但王秉文等[18]研究結果則顯示沙棘總黃酮可以增強離體蛙心心肌收縮力。至于沙棘中的哪一種活性物質起主要作用尚需進一步研究確定。

4結論

中國沙棘與中亞沙棘相比，中國沙棘中4種活性物質含量更高；高海拔地區中亞沙棘比較低海拔同一品種沙棘活性物質含量高；沙棘提取液比水提液對心肌作用更明顯；沙棘活性物質對心肌收縮力的抑制作用與 ∝ 受體和 β 受體有關，不直接作用于M受體和 Ca²⁺ 通道。

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