中圖分類號:S662.5 文獻標識碼:A 文章編號:1002-2910(2025)04-0039-04
Abstract: Experiment was conducted to screen the best proliferation effect of the 'Gisela 6' micropropagation, aiming to address phenomenon of excessive proliferation in 'Gisela 6′ micropropagation. Different hormone concentration ratios were set up for the proliferation medium to explore the appropriate reduction of proliferation efficiency and improvement of the output of rooted seedlings. The experiment shows that the hormone concentration ratio of 6-BA 0.125mg/L and IBA 0.08mg/L isthebest.Thisratio maintainsa high proliferation efficiencyof'Gisela 6′ micropropagation while greatly improving the conversion effciency from prolifer seedlings to rooted seedlings.
Key words: Gisela 6(g. 6); different hormone concentration rat; proliferation efficiency
甜櫻桃(Prunus.aviumL.),薔薇科(Rosaceae)李屬(Prunus)櫻亞屬(Ceraras),果實味甜色美,是春季成熟最早的水果之一,被譽為“春果第一枝”,深受人們的青睞[1-3]。甜櫻桃可以采用種子繁殖、嫁接繁殖、扦插繁殖和壓條繁殖等多種繁殖方式進行繁殖[4],當前,嫁接育苗是甜櫻桃生產的主要途徑,嫁接甜櫻桃選用的砧木有馬哈利、大青葉、吉塞拉等,不同砧木嫁接的櫻桃樹后期管理有很大的區別。隨著勞動力成本的增加,省工省力慢慢成為人們追求的一個目標。吉塞拉嫁接的櫻桃樹有結果早,樹勢小,容易管理,提早見效益等優點,近幾年在全國大面積推廣,其中吉塞拉6號具有較好的矮化性,且豐產性和抗逆性表現優良,與大多數甜櫻桃品種具有較強的親和性[5.6,是國內利用率最高的矮化砧木之一。吉塞拉6號砧木為3倍體,主要采用扦插繁殖,生根效率較低。組織培養技術可以加快種苗快繁,經過多年組織培養技術研發,吉塞拉6號組培苗生產工藝日臻成熟,可實現周年工廠化生產。
在植物組織培養中,通過調節細胞分裂素與生長素的比例來影響外植體的分化方向,細胞分裂素與生長素比例適中時,促進外植體愈傷組織發生;細胞分裂素與生長素比值較高時,優先分化為芽;細胞分裂素與生長素比值較低時,促進根的分化[7]。殷麗青等人研究表明,組培苗的增殖系數是決定甜櫻桃砧木種苗組培生產效率和生產成本的關鍵因素。在實際生產中,并非增殖系數越高越好,應綜合考慮組培苗的有效增殖系數和種苗素質,一般認為,組培苗增殖系數在3~5均可取得良好的效果[8]。泰安惠農園藝科技有限公司實驗室現存吉塞拉6號增殖苗經過多年繼代生產培育,表現出過度增殖現象(圖1)。叢生芽過多且幼嫩,高度較低達不到生根條件,若繼代到生根培養基中也難以正常生根。增殖苗出現大批過度增殖,導致有效生根苗數量驟降,嚴重影響組培苗產量。
圖1過度增殖的吉塞拉6號組培苗

過度增殖可能是由于細胞分裂素濃度過高造成的,為解決以上問題,通過調整細胞分裂素和生長素濃度配比,適當降低叢生芽增殖效率,提高有效生根芽率,增加組培苗生根產出量,設計試驗如下。
1材料和方法
試驗材料:泰安惠農園藝科技有限公司吉塞拉6號砧木組培苗,35d繼代一次,已穩定保存10年,保存用的培養基為MS培養基 +6-BA1.5mg/L+IBA 0.2mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 瓊脂 6.5g/L 。
實驗設計:6-BA濃度設置3個濃度梯度,分別是 0.25mg/L 、 0.125mg/L 、 0.0625mg/L ,IBA濃度設置3個濃度梯度,分別是 0.04mg/L,0.08mg/L, (200.16mg/L ,包括對照在內共設置11個處理(表1),每個處理3組重復。
表111種MS增殖培養基激素組合

編號CK為現在生產上應用的增殖培養基,O為不含激素的基礎培養基。
選擇過度增殖且長勢一致的吉塞拉6號增殖苗接種到11種增殖培養基中進行繼代培養,每個組培瓶中接種 5~6 枚含有小叢生芽的愈傷組織,每叢芽1~3 株,每個處理接種30瓶,且重復3次。接種時每瓶接種增殖苗盡量保證瓶間均一。接種完成后無菌培養室中 25°C , 12L/12D 培養 30dc
繼代培養30d后切苗記錄有效芽數、無效芽數,統計芽增殖系數和有效芽率。有效芽的標準為高度?1.5cm ,至少帶有2片完全展開的健康葉片,翠綠、無黃化或畸形,可進行生根培養。達不到有效芽標準的即為無效芽。
芽增殖系數
(統計時的叢生芽數-接種時的叢生芽數)/接種時的叢生芽數。
2 結果與分析
對a、b、c、d、e、f、g、h、i、CK、O,11中處理統計平均有效芽數、平均無效芽數、平均總芽數、有效芽率和芽增殖系數,結果如下。
表211種培養基增殖情況統計

2.1不同激素濃度對增殖苗數量的影響
幾種增殖培養基中,CK的平均總芽數最多,68.2個,平均無效芽也最多,57.33個,但平均有效芽最少,平均每瓶只有10.87個,有效芽率 16% 可用于生根培養的增殖苗太少。當增殖培養基中IBA濃度不變時,隨著6-BA濃度的降低,平均總芽數呈下降趨勢,比如,d、e、f三個增殖培養基中IBA濃度為 0.08mg/L ,6-BA濃度逐漸降低,分別為 0.25mg/L 、 0.125mg/L ! 0.0625mg/L ,平均總芽數分別為60.94個、49.45個和37.03個,明顯呈下降趨勢,而平均有效芽數分別為20.17個、24.90個和23.13個,平均無效芽數分別為40.77個、24.55個和13.90個,顯然,隨著總芽數的降低,增殖芽能夠獲取更多營養和生長空間,所以呈現出有效芽數目增多的趨勢,而無效芽數目顯著降低。其中e組增殖培養基中,平均有效芽數24.90個,平均無效芽數24.55個,大致呈現 1:1 的比例,有效芽率50% ,能夠明顯提高增殖苗生根產出量,同時也有足夠的無效芽來進行繼代繁殖。值得注意的是,在編號為0的無激素基礎培養基中,吉塞拉6號芽增殖系數為1.07,表現出了少量增殖現象。
2.2不同激素濃度對增殖苗外在表現的影響
根據不同激素濃度對增殖苗數量的影響,選出7種最具代表性的增殖培養基。CK組增殖培養基中增殖苗多、較柔弱且密集,平均總芽數60.94個,增殖苗多、柔弱且密集,平均有效芽數10.87個,達到生根培養標準的有效芽數最少,嚴重影響生根苗產出量;d組增殖培養基中增殖苗多、較柔弱且密集,平均有效芽數20.17個,比CK組多 85.6% :e組增殖培養基中增殖苗平均總芽數49.45個,數量中等、較高、粗壯且舒展葉片較多,平均有效芽數24.90,比CK組多 12% ,達到生根培養標準的有效芽數最多,有利于生根苗產出量;f組增殖培養基中增殖苗平均總芽數37.03個,數量少,僅多于0組,較高、粗壯且舒展葉片較多,平均有效芽數23.13個,比CK組多 117% ,此組有效芽數很可觀,但是用于繼代培養的增殖苗較少,僅多于組,不利于生產上組培擴繁;b組增殖培養基中增殖苗平均總芽數44.04個,比e組平均總芽數少,數量中等、較高、粗壯且舒展葉片較多,平均有效芽數23.57個,比e組24.90個少,比CK組多 113% ;h組增殖培養基中增殖苗平均總芽數48.7個,比e組平均總芽數略少,數量中等、較高、粗壯且舒展葉片較多,平均有效芽數23.37個,比e組24.90個少,比CK組多 115% 。由此可見,在試驗組增殖培養基中增殖苗減少,同時苗高度均有不同程度的提高,從增殖苗外在表現來看,e組增殖培養基為最佳選擇。在無激素的基礎培養基中也可見少量增殖。為進一步將培養基之間的差異可視化,進行了相關圖表分析(圖2)。
圖2吉塞拉6號繼代培養基增殖情況統計

綜上所述,試驗組a ~i 增殖培養基中,平均有效芽數量均大于CK對照組,無效芽數量均小于CK對照組。其中,平均有效芽數量最多的是e組,為24.90個,有效芽率 50% ;b、e、h三組增殖培養基的平均有效芽/平均無效芽比值接近 1:1 ,增值系數分別為3.4、3.95、3.87,既能滿足增殖需要同時又能兼顧生根產出量;d組增殖培養基中平均無效芽數量最多,為40.77個,而平均有效芽數量20.17個,僅高于CK對照組(10.87個)和O不含激素組(15.33個),只適合繼代擴繁;c、f、i組增殖培養基平均無效芽數量分別為11.52個、13.9個、13.87個,僅高于0不含激素組(5.33個),增殖系數分別為2.23、2.70、2.59,增殖效率明顯降低,不能滿足生產需要。
e組增殖培養基 (6-BA0.125mgL,IBA0.08mgL) 為最佳選擇,平均有效芽數量最高,且平均有效芽/平均無效芽比值接近 1:1 ,既能提高增殖苗生根產出量,也可將增殖效率維持在較適宜水平。
3討論
本試驗成功提出了有利于提高組培生產效率的繼代增殖培養基,激素配比為 6-BA0.125mg/L 、1BA0.08mg/L值得注意的是,在以往的生產周期中,吉塞拉6號在CK中的增殖效果一致較好,生根產出量也維持在較高水平。但經過常年累月的繼代培養后,表現出了本文中過度增殖現象。周傳明等研究標明,山蒼子繼代培養過程中第1~3代的增殖率緩慢遞增,區別并不是很明顯,到第4代增殖率才明顯高于前3代,由此看出繼代次數對山蒼子增殖率具有一定影響。由于繼代代數的增加,6-BA的積累導致組織中細胞分裂素濃度增加,從而增加苗木細胞分裂速度,增殖率得以提高[9。本試驗也出現上述類似情況,不含激素的基礎培養基表現出了一定的增殖現象,代表著激素在外植體中有一定積累。
參考文獻:
[1]張曉明,張開春.介紹幾個北京地區適宜發展的甜櫻桃優良品種[J」.綠化與生活,2001(2):35.
[2]吳雅琴,程和禾,陳龍,等.甜櫻桃新品種玲瓏脆的組織培養和離體快繁技術[J].河北果樹,2019(1):15-16.
[3]張力思.甜櫻桃的起源、分布及栽培現狀[J].北方果樹,2000(4):31.
[4]韓陳敏,韓亞林,敖學熙,等.櫻桃實生播種繁殖砧木苗方法[J].特種經濟動植物,2011,14(3):50-52.
[5]劉慶忠,張力思,李勃,等.甜櫻桃矮化砧木新品種吉塞拉6號'[J].園藝學報,2006,33(1): 213+222 :
[6]廖益民,沈國正,駱慧楓,等.甜櫻桃砧木吉塞拉6號組織培養體系優化[J].浙江農業科學,2021,62(12):2453-2456.
[7]劉東奇.植物組織培養過程中生長素和細胞分裂素的配比問題淺析[J].中學生物學,2013,29(5):5-6.
[8]殷麗青,陸錦明,葉正文,等.甜櫻桃砧木品種‘吉塞拉6號’的離體培養與快速繁殖[J].上海農業學報,2015,31(2):51-55.
[9]周傳明,呂曼芳,陳奎,等.山蒼子繼代培養中芽增殖效果研究[J].廣西科學,2012,19(4):374-376.