標準化MMR檢測流程對胃癌患者預(yù)后的影響分析

Analysis of the Effect of Standardized MMR Detection Procedure on the Prognosis of Gastric Cancer Patients

LI Ping-ping1 MA Xuan-yu1 NING Ai-bing1 （1. Gansu Medical College; 2. Affiliated Hospital of Gansu Medical College）

Abstract： Objective： To analyze the application of standardized mismatch repair （MMR） detection procedure in patients with gastric cancer and its potential impact on patient prognosis. Methods： 70 patients with gastric cancer admitted to the Affiliated Hospital of Gansu Medical College from January 2019 to January 2022 were selected as the study objects. All patients underwent standardized MMR immunohistochemical testing and were divided into the MMR deficient （dMMR） group and the MMR stable （MSI-L/MSS） group based on test results. Results： dMMR patients accounted for 20% of the total （n=14） ） and MMR stable （MSI-L/MSS） patients accounted for 80% _n=56 ）. The median follow-up time was 18 months. The age distribution of patients in the dMMR group was younger， and the degree of tumor differentiation in the dMMR group was lower _{（Plt;0.05）} . PFS analysis showed that the median progression-free survival in the dMMR group was significantly longer than that in the MMR stable group （Plt;0.01） ）. OS analysis also showed that overall survival in the dMMR group was better than that in the MMR stable group （Plt;0.01） ）. Conclusion： The use of standardized MMR detection procedures can help to identify the subgroup of gastric cancer patients with a better prognosis， suggesting that MMR status may be one of the important biomarkers to guide individualized treatment.

Keywords： mismatch repair gene， gastric cancer， prognostic analysis， standardized detection procedure

0 引 言

胃癌作為一種常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，在全球范圍內(nèi)具有較高的發(fā)病率和死亡率。胃癌早期癥狀隱匿，多數(shù)患者確診時已處于中晚期階段，這不僅增加了治療難度，也嚴重影響了患者的生存質(zhì)量和預(yù)后[1]。因此，尋找有效的生物標志物以實現(xiàn)早期診斷和個體化治療成為當前研究的重點方向。近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，錯配修復(fù)（Mismatch Match Repair，MMR）系統(tǒng)的基因突變被認為是導(dǎo)致胃癌發(fā)生發(fā)展的一個重要因素。MMR系統(tǒng)負責(zé)識別并修復(fù)DNA復(fù)制過程中出現(xiàn)的錯配堿基，一旦該系統(tǒng)發(fā)生功能障礙，將導(dǎo)致大量的微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI）。微衛(wèi)星不穩(wěn)定可分為高度不穩(wěn)定（MSI-H）、低度不穩(wěn)定（MSI-L）和微衛(wèi)星穩(wěn)定（MSS）。鑒于MMR狀態(tài)對胃癌患者預(yù)后的影響，建立一套標準化的MMR狀態(tài)檢測流程顯得尤為關(guān)鍵。然而，目前臨床上針對MMR狀態(tài)的檢測仍存在一定的不統(tǒng)一性，導(dǎo)致不同醫(yī)療機構(gòu)間檢測結(jié)果不具有可比性。基于此，本研究通過對MMR陽性與陰性患者的對比分析，希望能夠進一步明確MMR狀態(tài)與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究回顧性分析了2019年1月至2022年1月期間在附屬醫(yī)院接受治療的70例胃癌患者，并將其分為錯配修復(fù)缺陷（dMMR）組與錯配修復(fù)穩(wěn)定（MSI-L/MSS）組進行研究。dMMR組患者共計14例，平均年齡為 （49.5±8.3） 歲，年齡范圍從32至65歲；MMR穩(wěn)定（MSI-L/MSS）組患者共計56例，平均年齡為（ （58.2±9.1） ）歲，年齡范圍從40至78歲。兩組患者性別比例分別為男性9例（ （64.3%） ）、女性5例（ 35.7% ）與男性34例（ 60.7% ）、女性22例（ 39.3% ）。

納入標準：患者年齡大等于18歲；經(jīng)病理學(xué)檢查確診為胃癌；完整的臨床資料記錄，包括病史、體格檢查、實驗室檢查、影像學(xué)檢查及手術(shù)病理報告；接受過至少一次標準化MMR免疫組化檢測；患者或法定監(jiān)護人簽署知情同意書。

排除標準：存在其他惡性腫瘤病史；已知遺傳性非息肉病性結(jié)直腸癌（HNPCC）綜合征；嚴重的心肺疾病或其他內(nèi)科疾病，預(yù)計生存期少于3個月；因各種原因無法完成隨訪；缺乏足夠的組織樣本用于MMR檢測。

1.2 干預(yù)措施

為確保研究結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性，本研究采用了標準化的MMR免疫組化檢測流程。所有患者在接受常規(guī)治療的同時，均進行了MMR蛋白表達狀態(tài)的檢測，以便準確劃分MMR缺陷（dMMR）與MMR穩(wěn)定（MSI-L/MSS）兩個組別。

MMR免疫組化檢測流程如下：（1）樣品準備。從每位患者手術(shù)切除的腫瘤組織中選取新鮮標本，立即放入 10% 的甲醛溶液中固定，隨后進行石蠟包埋處理。（2）切片制備。使用微米切片機從包埋好的石蠟塊中切取厚度為4微米的連續(xù)切片，并貼附于預(yù)先處理好的玻片上。（3）免疫組化染色。采用全自動染色儀進行免疫組化染色，主要步驟包括脫蠟、抗原修復(fù)、封閉非特異性位點、一抗孵育、洗滌、標記物顯色及復(fù)染。所用的一抗為鼠抗人MLH1、MSH2、MSH6和PMS2抗體，濃度分別為1∶100、1∶100、1∶50和1∶50。一抗孵育條件為 4^°C 過夜。（4）結(jié)果判讀。染色完成后，在光學(xué)顯微鏡下觀察核內(nèi)染色情況。如果腫瘤細胞核呈現(xiàn)明顯的陽性染色，則認為該蛋白表達正常；反之，若未見明顯染色或僅有少量細胞呈弱陽性，則判定為該蛋白表達缺失。（5）質(zhì)控。每批次實驗均設(shè)置陽性對照和陰性對照。陽性對照選用已知MMR蛋白表達正常的胃癌組織，而陰性對照則是通過添加等體積的PBS代替一抗來進行實驗。

所有患者根據(jù)T N M 分期及身體狀況制定了相應(yīng)的治療方案，主要包括手術(shù)、輔助化療和（或）放療。具體而言：對于可手術(shù)切除的早期胃癌患者（T1-T2N0），實施根治性手術(shù)切除術(shù)。對于局部晚期 （T3-T4aN+Ω ）或轉(zhuǎn)移性胃癌患者（ T4b/ ΔN+M+ ），先進行新輔助化療或同步放化療，待病情緩解后再行手術(shù)治療。化療方案采用FLOT方案（氟尿嘧啶、奧沙利鉑、多西他賽），周期為每14天一次，共6周期。

基于上述MMR免疫組化檢測結(jié)果，將70例患者分為兩組：dMMR組：共有14例患者，其中至少一種MMR蛋白表達缺失。MMR穩(wěn)定組（MSI-L/MSS）：共有56例患者，所有MMR蛋白表達正常。

1.3 觀察指標

（1）基線資料。記錄患者的年齡、性別、病理類型、腫瘤分期（TNM分期）等情況。（2）生存期指標。無進展生存期（PFS）：記錄患者從治療開始到疾病進展或因任何原因死亡的時間。總生存期（OS）：記錄患者從治療開始到因任何原因死亡的時間。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

所 有 數(shù) 據(jù) 分 析 均 使 用 S P S S 2 2 . 0 軟 件 完成。（ ）為計量方式，予以t檢驗， [n（%） ]為計數(shù)方式，予以 X² 檢驗。采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，評估兩組患者無進展生存期（PFS）和總生存期（OS）的差異，并使用Log-rank檢驗來確定組間生存期的統(tǒng)計學(xué)顯著性。采用Cox回歸模型分析影響患者預(yù)后的獨立因素。 Plt;0.05 ，表明對比有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者的基本臨床特征比較

dMMR組患者的平均年齡顯著低于MMR穩(wěn)定組（ ∣Plt;0.05? ），且dMMR組患者更多地表現(xiàn)為Ⅱ期和Ⅲ期腫瘤（ Plt;0.05. ），以及更低的腫瘤分化程度（ Plt;0.05 ）。兩組在性別構(gòu)成上無顯著差異（ （Pgt;0.05） ），在Ⅰ期、Ⅳ期腫瘤以及高分化、中分化腫瘤上也無顯著差異（ （Pgt;0.05） ），詳細數(shù)據(jù)見表1。

表1 兩組患者的基本臨床特征比較

2.2 兩組患者的生存期比較

根據(jù)Kaplan-Meier生存曲線分析，dMMR組患者的中位無進展生存期顯著長于 ΔMMR 穩(wěn)定組 （Plt;0.01） ），同樣，dMMR組的中位總生存期也明顯優(yōu)于MMR穩(wěn)定組（ （Plt;0.01） ），詳細數(shù)據(jù)見表2。

表2 兩組患者的生存期比較

3 討 論

胃癌是一種常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率在全球范圍內(nèi)均居高不下。盡管近年來胃癌的治療手段不斷進步，但患者的整體預(yù)后仍不理想，尤其是對于晚期患者[2]。因此，尋找有效的生物標志物以指導(dǎo)個體化治療成為提高胃癌患者生存率的關(guān)鍵所在。錯配修復(fù)（MMR）系統(tǒng)是維持基因組穩(wěn)定性的重要機制之一，MMR系統(tǒng)的缺陷會導(dǎo)致微衛(wèi)星不穩(wěn)定（MSI），這在某些類型的癌癥中已被證實與較好的預(yù)后有關(guān)。

本研究所有患者均接受了標準化MMR免疫組化檢測。根據(jù)檢測結(jié)果，患者被分為MMR缺陷（dMMR）組 （n=14，20% ）與MMR穩(wěn)定（MSI-L/MSS組 （n=56，80% ）。這種標準化流程不僅提高了MMR狀態(tài)檢測的一致性和準確性，還為臨床醫(yī)生提供了可靠的依據(jù)，用于制定個性化治療方案。研究發(fā)現(xiàn)，dMMR組患者相較于MMR穩(wěn)定組患者，其年齡分布更年輕（ （Plt;0.05） ），且腫瘤分化程度較低 （Plt;0.05） ），提示dMMR狀態(tài)可能與特定的臨床特征相關(guān)聯(lián)。

dMMR狀態(tài)導(dǎo)致的微衛(wèi)星不穩(wěn)定可能促使腫瘤細胞產(chǎn)生更多的新抗原，從而激活免疫系統(tǒng)，使患者受益于免疫治療。此外，MMR缺陷可能導(dǎo)致的DNA損傷累積也可能使得腫瘤細胞更容易受到化療藥物的作用，從而解釋了dMMR組患者對化療更敏感的現(xiàn)象[3]。

綜上所述，本研究證實了標準化MMR檢測流程在胃癌患者中的重要性，尤其是在識別具有較好預(yù)后的患者亞群方面。dMMR狀態(tài)的患者表現(xiàn)出獨特的臨床特征。因此，MMR狀態(tài)可以成為指導(dǎo)個體化治療的重要生物標志物之一[4-5]。未來的研究需要進一步探索MMR狀態(tài)與免疫治療效果之間的關(guān)系，并推動MMR檢測流程的標準化，以促進精準醫(yī)療的發(fā)展。

參考文獻

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作者簡介

李蘋蘋，本科，講師，研究方向為病理學(xué)。

寧愛兵，通信作者，本科，講師，研究方向為信息素質(zhì)教育。

（責(zé)任編輯：劉憲銀）