基于代謝組學四妙勇安湯治療糖尿病足的作用機制研究

糖尿病足（diabeticfoot，DF）是一種由糖尿病引起的下肢靜脈損傷和神經病變引起的疾病，可引起下肢感染、潰瘍甚至深層組織損傷，明顯地降低了患者的生活質量[1-3］。四妙勇安湯是由金銀花、玄參、當歸和甘草組成，是臨床治療癰疽等疾病的經典方劑，具有清熱利濕、活血化瘀之功效。華佗《神醫秘傳》中所說的“熱毒熾盛”，就是指“癰疽”“陰損”，DF潰瘍歸屬于中醫學“脫疽”“消渴”“瘡瘍”等范疇，屬本虛標實，以血瘀為主[4]，其基本病機為熱毒蘊內、熱爍津傷、血脈瘀滯，治法宜清熱解毒、活血止痛。以往對四妙勇安湯的研究表明，其具有抗炎、抗凝及抗動脈粥樣硬化的功效，其治療效果也得到了肯定[5-6]。為深人研究四妙勇安湯治療DF的作用機制，本研究擬采用血清代謝組學聯合網絡藥理學的方法探討四妙勇安湯治療DF的藥效學基礎及作用通路，為中藥治療DF的研究奠定基礎。

1材料與方法

1.1 數據庫、平臺、軟件

本次研究所使用的數據庫、平臺以及軟件相關信息見表1[7-15] ○

1.2 試驗主要儀器與試劑

WatersACQUITYUPLC超高效液相（美國Wates公司），WatersPremierLCTXE質譜分析系統（美國Wates公司），工作站為Masslynx4.1軟件，Sorvall ST16R臺式離心機（美國ThermoScientific公司），KQ-500DB超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），NichipetEX微量取樣器（ 10～100μL， 100～1000μL 日本NICHIRYO公司），VX-Ⅱ多管渦旋振蕩器（北京踏錦科技有限公司），ThermoScientific995超低溫冰箱（美國ThermoScientific公司）。

亮氨酸腦啡肽（LE）校正液和甲酸鈉校正液（美國Sigma公司），色譜乙晴（美國Thermo公司），超純水（中國廣州屈臣氏食品飲料有限公司），色譜甲醇和色譜甲酸（美國迪馬公司），其他試劑均為分析級。甲鈷胺注射液（衛材藥業有限公司制造，批號：2007017），前列地爾注射液（北京泰德制藥股份有限公司制造，批號：3B031A），金銀花（哈藥集團世一堂中藥飲片有限責任公司，批號：1810030S），玄參（哈藥集團世一堂中藥飲片有限責任公司，批號：1809037S），當歸（哈藥集團世一堂中藥飲片有限責任公司，批號：1807003S），甘草（哈藥集團世一堂中藥飲片有限責任公司，批號：1712038S）。

1.3 研究對象

選取2023年7月一2024年8月于黑龍江省醫院燒傷科、血管外科、南崗院區血管外科住院的DF患者為研究對象。本研究共納入符合標準熱毒熾盛型DF患者60例。隨機分成清創組、西藥組、中藥組、中西聯用組，各組15例，另納人同時期15例健康志愿者作為對照組。本研究通過了黑龍江省醫院醫學倫理專家委員會倫理審查（文件編號：SYYLLBA2022037），患者及患者家屬知情并簽署知情同意書。

表1研究使用的數據庫、平臺與軟件

Table1 The database，platform and software used in the research

1.3.1納入標準：（1）DF診斷標準參考《中國糖尿病足診治指南》；（2）DF分級診斷符合DF分級（Wagner）標準（國際通用Wagner分級法）中的1級和2級；（3）需手術清創、可耐受并同意手術者；（4）年齡為30～70歲。1.3.2排除標準：（1）經確診為其他特殊類型糖尿病及妊娠糖尿病者；（2）近1個月內發生糖尿病急性并發癥者（包括DF高滲性昏迷、糖尿病酮癥及酮癥酸中毒、糖尿病乳酸性酸性中毒、糖尿病急性中感染）；（3）合并呼吸系統疾病、消化系統疾病、血液系統疾病、風濕及免疫系統疾病、甲狀腺疾病、腫瘤結核等其他疾病史；（4）合并肝腎功能異常、多發性大動脈炎、動脈栓塞、雷諾病；（5）近3個月內參加其他臨床試驗的患者或正在服用激素類藥物或者對代謝較大影響的藥物的患者；（6）精神疾病、認知障礙、無民事行為能力或限制民事行為能力者；（7）妊娠或準備妊娠婦女、哺乳期婦女；（8）對本研究了解不充分、不愿參加或依從性差者、不合作者；（9）未滿規定觀察期而中斷治療，無法判定療效或資料不全者。

1.4治療方法

4組患者在治療期間皆實施糖尿病飲食，實施營養支持，并囑托患者每日給予足部常規檢查，對局部的創面進行清創、引流、減壓及更換敷料，積極控制血糖、血壓、血脂，基礎治療用藥應盡量一致。

1.4.1清創組：清創前應對患者足部供血進行確認，如果患者足部血供充足，則以清創術對糖尿病足傷口進行治療。清創時，應盡可能清除所有的壞死組織，露出健康組織，至組織表面出現血紅為止。若患者足部紅腫高突、疼痛劇烈，感染較重，局部波動感明顯，則應該在足潰瘍局部張力最大處切開減張，并進行膿液引流，并對壞死筋膜、肌腱進行清除。若竇道較深，則擴大創面，并對膿性分泌液引流，清除腔內壞死組織，保持腔內清潔。清創時，避開健康的關節囊，保留存活的組織。

1.4.2西藥組：在清創組的基礎上給予甲鈷胺 0.5mg 肌內注射，1次 /2d ；并協同前列地爾 10μg 溶于 0.9% 氯化鈉注射液 10mL 緩慢靜脈注射，1次/d。

1.4.3中藥組：在清創組的基礎上口服給予四妙勇安湯，1劑/d，2次/d。四妙勇安湯煎煮方法為取金銀花（ 90g ）、玄參（ 90g ）、當歸（ 60g ）和甘草（ 30g ），加10倍量水浸泡 0.5h 后，煎煮 ^1h ，6層紗布過濾，濾渣加入8倍量水再次煎煮 30min ，6層紗布過濾，合并2次煎煮濾液，濃縮至 360mL ，分2次服用，每次 180mL 。

1.4.4中西聯用組：在清創組基礎上給予甲鈷胺 0.5mg 肌內注射，1次 /2d ；協同前列地爾 10μg 溶于 0.9% 氯化鈉注射液 10mL 緩慢靜脈注射，1次/d；并聯合四妙勇安湯，1劑 /d ，2次/d。四妙勇安湯煎煮方法同中藥組。

1.5運用網絡藥理學分析四妙勇安湯作用靶點及其代謝通路

1.5.1四妙勇安湯的藥效學基礎及作用靶點研究：利用TCMSP數據庫檢索關鍵詞：金銀花、玄參、當歸、甘草。將搜索到的成分，以口服吸收利用度（ 0B）?30% ，類藥性（DL） ?18% 為條件進行篩選，并結合文獻報道對篩選后的成分進行補充［3」。然后，將篩選補充后得到的全部成分依次輸入TCMSP數據庫，對靶標進行預測，并獲得相應的靶標蛋白質名依次輸入Uniprot數據庫。通過Uniprot數據庫對基因的名稱進行轉換，獲得與中藥有關的靶標，再通過對未發現作用靶標的化學成分進行篩選，獲得四妙勇安湯治療DF 的活性組分。1.5.2獲得與疾病有關的靶點：利用GeneCards、OMIM、TTD等數據庫搜索“diabetic foot”，通過已評審（reviewed）及人類來源（HUMAN）作為候選靶點，對候選靶點進行篩選。用MEDIAN函數將篩選過的GeneCards數據庫的靶點根據其自身的關聯得分（relevance score）進行進一步篩選，直到靶點數目降至2000以下。最終對目標進行整合，剔除所有的重疊部分，從而獲得與疾病有關的靶點［3]。

1.5.3四妙勇安湯抗糖尿病蛋白相互作用網絡的建立及細胞核作用靶點篩選：利用VLOOKUP函數選取中醫藥與疾病關聯靶點的交集，并將其導入String平臺。以0.9分為最低互動得分，將生物設置為“Homo spaiens”，并隱藏斷開的節點，輸出 tsv 文件 Stringl.tsv，對其進行整理、剔除，獲得四妙勇安湯治療DF的潛在作用靶點。然后，接著將 String1.tsv 從Cytoscape 3.8.0 中引入，并使用“cytoHubba”插件來對其進行計算，從中挑選出20 個具有較高價值的潛在靶點。

1.5.4“中藥-藥效物質－潛在靶點”網絡圖譜及核心組分的篩選：選擇與潛在靶點相關聯的活性組分，并將其與中藥潛在靶點進行整合，導入Cytoscape 3.8.0 軟件進行處理，獲取到“中藥－藥效物質－潛在靶點”的網絡圖譜。運用“AnalyzeNetwork”對其進行運算，得到一個csv文件并將其導出，選取數值最高的10個活性成分作為核心成分。

1.5.5GO富集及KEGGPathway富集分析：將可能的靶點導人MetascapePlatform中，然后選擇“customanalysis”，其中“MinOverlap”的缺省值為3，“PValue Cutoff”設置為O.01，“Min Enrichment”設置為1.5，之后，分別選擇“GO Molecular Functions”（GO-MF）、“GO Biological Processes”（GO-BP）、“GO CellularComponents”（GO-CC）和“KEGGPathway”進行富集。將得到的結果進行處理，并在RStudio中進行可視化處理[3]。

1.5.6分子對接：在PDB數據庫中，下載核靶點蛋白的PDB格式文件，然后在TCMSP中下載mol2格式文件，

之后運用AutoDockTools-1.5.6對其進行去配體、脫水、脫氫化處理，并對其進行充電處理，并以pdbqt格式存儲。最后運用AutoDockvina進行分子對接，并利用Pymol軟件進行繪圖。

1.6四妙勇安湯干預DF患者血清代謝組學與網絡藥理 學的整合研究

1.6.1血清分析樣本處理：將血清于 4% 下溶化，取200μL 樣品，加入3倍量 -20% 預冷甲醇，渦旋震蕩30s ，混合均勻，室溫放置 10min 清除樣品中的蛋白，14000r/min 離心 20min ，取上清液，裝入進樣瓶待測。

1.6.2 色譜質譜條件

1.6.2.1色譜條件：色譜柱WatersACQUITYUPLCBEHC18色譜柱（ 1.8μm ， 2.1×100mm ）（美國Waters公司）；流動相A相為色譜乙腈（含 0.1% 色譜甲酸），B相為超純水（含 0.1% 色譜甲酸）；柱溫 40°C ；樣品倉溫度 4‰ ；流速 0.4mL/min ；進樣體積 5μL ；梯度洗脫條件見表2。

表2血清代謝組學洗脫梯度 Table2Serum metabolomics elution gradient

1.6.2.2質譜分析方法：采用WatersPremierLCTXE質譜分析系統（高分辨飛行時間質譜儀），電噴霧離子源（ESI）；以氮氣為脫溶劑氣及保護氣，采用負離子模式進行采集；數據獲取和處理分析采用Masslynx4.1軟件、ProgenisisQI2.3軟件和 EZinfo3.0 軟件。毛細管電壓 1500V ，錐孔電壓 60V ，離子源溫度 110^°C ，脫溶劑溫度 360^qC ，脫溶劑氣體流速 750L/h ，錐孔氣體流速 20L/h 。在 m/z 為 100～1500amu 質量范圍，ESI負離子模式下進行全掃描，使用LE實時校正，LE濃度為 ，流速 0.04mL/min 。

1.6.3血清代謝輪廓分析：將血清樣本和尿液樣本按樣品制備方法處理，利用已建立的分析方法對上述血清和尿液樣品進行負離子模式全掃描，得到每名受試者血清和尿液樣本的代謝輪廓信息。將所得到的質譜數據導入WatersProgenesisQI2.3軟件進行峰提取、峰對齊、數據去卷積和數據歸一化等工作，提取代謝物離子保留時間－質核比－峰強度的三維數據，將提取的峰數據導入WatersEzifo3.0軟件進行主成分分析（PCA），繪制各組樣本代謝輪廓的PCA得分圖。

1.6.4四妙勇安湯治療DF生物標志物的發現：在ProgenesisQI軟件上加載LC-MS數據，在每個分析步驟中可視化原始數據。離子強度圖顯示保留時間， m/z 和特征強度以及質譜和色譜圖的二維圖，為運行時自動校準、峰匹配和化合物去卷積提供質量保證。將ANOVAP值 lt;0.05 和VIP值 ^gt;1 作為選擇顯著化合物的篩選條件，過濾數據，然后導入到EZinfo進行分析。通過無監督的PCA來檢查異常值和分類趨勢，并將數據可視化。再使用OPLS-DA評估兩組差異。S-plot圖中，每個點代表準確的質量保留時間，X軸代表變量，離原點越遠的數據點的相對貢獻度越大，S-plot圖兩端的點代表組間可信度最高的離子。

1.6.5四妙勇安湯治療DF差異代謝物的鑒定：將所得到的DF差異代謝物保留時間和質核比信息，導人ProgenisisQI2.3軟件生成的代謝物鑒定模塊并設定成標簽，借助HMDB代謝物庫的結構信息，以 2mDa 為質量偏差范圍，用QI軟件計算其理論碎片并與質譜采集的IDA數據進行匹配，進行打分，依照得分高低以及二級離子的匹配度來確定其結構。對軟件所給出的可能結構進行標記，通過HMDB數據庫（http：//www.hmdb.ca/ ）、KEGG 數 據庫（http：//www.genome.jp/kegg/）、Massbank 數據庫（http：//www.massbank.jp/）和Metlin數據庫（http：//metlin.scripps.edu）等數據庫進行檢索，并結合MS/MS數據進行驗證，從而確定其結構。

1.6.6四妙勇安湯治療DF的生物信息分析與闡述：首先，對所得到的差異代謝物及涉及的代謝通路進行歸納和分類。然后將生物標志物名稱、疾病名稱、靶點名稱等進行文獻搜尋，獲得臨床和實驗研究結果，綜合分析其生物學意義，最終闡述這些差異代謝物在四妙勇安湯治療DF中的作用機制及診斷意義。

1.6.7四妙勇安湯治療DF差異代謝物的代謝通路分析：將差異代謝物的英文名稱、KEGG或HMDB編號導入代謝通路分析網站Metaboanalyst（http：//www.metaboanalyst.ca/ ）進行通路分析，關注有貢獻的代謝途徑，并繪制相應代謝通路示意圖。

2結果

2.1四妙勇安湯作用靶點及其代謝通路

2.1.1四妙勇安湯的藥效物質基礎及作用靶點研究：獲得四妙勇安湯中4味藥的藥效物質基礎和作用靶點。其中，金銀花中有19種活性組分，玄參中有7種活性組分，當歸中有5種活性組分，甘草中有90種活性成分，把金銀花、玄參、當歸、甘草中得到的活性成分進行合并，然后刪除重復的活性成分，最后共得到115個活性組分。

2.1.2獲得與疾病有關的靶點：運用Uniprot數據庫，分別從GeneCards、OMIM、TTD三個數據庫中篩選出DF的作用靶標。其中，4682個靶點是從GeneCards數據庫篩選得到的，95個靶點是從OMIM數據庫篩選得到的，11個靶點是從TTD數據庫篩選得到的。將從GeneCards數據庫篩選后的靶點以Relevancescore ?6.497622013 為篩選條件進行2次篩選（分別取兩次中位數，第1次為3.390769362，第2次為6.497622013），共得到1172個靶點。將2次篩選得到的靶點與OMIM數據庫、TTD數據庫合并去重，最后得到1203個靶點作為疾病相關靶標。

2.1.3四妙勇安湯抗糖尿病蛋白相互作用網絡的建立及細胞核作用靶點篩選：運用VLOOKUP函數取中藥與疾病相關靶點的交集，得到136個靶點。把這136個靶點導人String平臺進行篩選，得到四妙勇安湯治療DF的潛在靶點126個。運用Cytoscape3.8.0軟件對tsv文件進行可視化操作，得到有126個節點，672條邊的PPI網絡圖（圖1）。運用Cytoscape3.8.0軟件的“cytoHubba”插件對其進行計算，得到度值（Degree）排名前20的潛在靶點，分別為：STAT3、AKT1、JUN、MAPK3、MAPK1、TNF、RELA、TP53、IL6、HSP9OAA1、MAPK8、VEGFA、MAPK14、EGFR、APP、FOS、MYC、CXCL8、ESR1、EGF。

圖1四妙勇安湯治療DF的PPI網絡 Figure1 ThePPI network of Simiao YonganDecoctioninthe treatment ofDF

2.1.4“中藥-藥效物質－潛在靶點”網絡圖及核心組分的篩選：利用Cytoscape3.8.0對其進行數據分析，結果顯示，共有237個結點，包括4個中藥、107個活性組分、126個潛在靶點、1211條邊。在“AnalyzeNetwork”中，通過對這些活性成分的分析，得出了數值最大的10個活性成分，分別為：MOL000006（木犀草素）、MOL000098（槲皮素）、MOL000358（β-谷甾醇）、MOL000392（刺芒柄花素）、MOL000422（山柰酚）、MOL001789（異甘草素）、MOL003896（7-甲氧基-2-甲基異黃酮）、MOL004328（柚皮素）、MOL002773（β-胡蘿卜素）、MOL000497（甘草查爾酮A），見圖2。

2.1.5GO富集及KEGGPathway富集分析：采用Metascape軟件對潛在的靶點進行GO和KEGG富集分析，通過GO、KEGG、GO-MF、GO-CC、KEGG，分別獲得143項、2401項、115項、209項。每項均選擇了褐色代表甘草，紅色代表共有成分。

圖2“中藥-藥效物質-潛在靶點”網路

Figure2\" Traditional Chinese Medicine-Active Substances-Potential Targets \" network

前40個LogP值較小的項目，利用RStudio繪制氣泡圖（圖3）。GO-MF富集試驗提示四妙勇安湯具有抗DF的功效。GO-CC富集試驗還顯示，四妙勇安湯抗DF的機制可能與膜筏、膜區、囊腔、細胞質囊腔有關。KEGG通路富集表明，四妙勇安湯對DF的治療作用可能與糖尿病并發癥的AGE-RAGE信號通路、流體剪切應力和動脈粥樣硬化、磷脂酰基醇代謝通路、IL-17信號通路、MAPK信號通路、TNF信號通路、PI3K-Akt信號通路、HIF-1信號通路、Th17細胞分化、細胞凋亡、T細胞受體信號通路、Toll樣受體信號通路、foxo信號通路等途徑。2.1.6分子對接：將核心成分與其對應的核心靶標進行分子對接，共得到60個分子對接結果。除RELA外，其余核心靶點與核心成分均具有較好的結合活性，平均結合能為 -7.06kcal/mol ，證實了采用網絡藥理學研究四妙勇安湯防治DF的藥效物質基礎和作用靶標的可能性。

2.2四妙勇安湯干預DF患者血清代謝組學與網絡藥理 學的整合研究

2.2.1四妙勇安湯干預DF患者血清代謝輪廓研究：四 妙勇安湯干預DF患者血清代謝輪廓得分圖（圖4）顯 示各組患者血清代謝輪廓聚集良好。相對于治療前，清 創組和中藥組的代謝輪廓與治療前區分不明顯；西藥組 和中西聯用組的代謝輪廓均能與治療前區分顯著，并有 向對照組回調的趨勢，顯示西藥組和中西聯用組均可以 糾正DF患者體內的代謝物紊亂，中西聯用組的回調作 注：A為GO-MF富集試驗，B為GO-BP富集試驗，C為GO-CC富集試驗，D為KEGG富集試驗。

圖3GO富集及KEGGPathway富集分析 re3GO enrichment and KEGG Pathway enrichment analysis

用要強于西藥組。

2.2.2四妙勇安湯干預DF患者血清代謝生物標志物聚 類研究：四妙勇安湯干預DF患者血清生物標志物層次 聚類熱圖顯示，血清差異代謝物在各組間聚類良好，提 示這些標志物在各組間存在差異，見圖5。

2.2.3四妙勇安湯對DF患者血液生物標志物的作用：通過比較相對峰面積，DF患者18個血清差異代謝物中，清創組均無明顯的調節作用；中藥組可以明顯回調其中1個代謝物（ Plt;0.05 ），為尿酸；西藥組可以明顯回調其中2個代謝物（ Plt;0.05 ），分別為溶血磷脂酸A[0：0/18：2（9Z，12Z）]和溶血磷脂酸C（O-18：0）；中西聯用組可以明顯回調其中4個代謝物（ Plt;0.05 ），分別為尿酸、脫氧胞嘧啶核苷酸、溶血磷脂酸A［0：0/18：2（9Z，12Z）]、尿苷 5^′- 二磷酸和溶血磷脂酸C（0-18：0），其相對峰面積見圖6。

2.2.4四妙勇安湯干預DF患者代謝通路的分析：將四妙勇安湯干預4個血清差異代謝物進行代謝通路的分析，結果顯示，四妙勇安湯可以通過調節甘油磷脂代謝、嘧啶代謝、糖基磷脂酰肌醇（GPI）錨合成途徑、精氨酸生物合成途徑、三酰甘油代謝、泛酸和輔酶A生物合成途徑、醚酯代謝、磷脂酰肌醇信號系統、谷胱甘肽代謝、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝等生物途徑從而

治療DF，見圖7、表3。

2.2.5四妙勇安湯干預DF患者代謝組學和網絡藥理學整合研究：將四妙勇安湯干預DF患者的9個差異代謝物與網絡藥理學得到的20個核心靶點基因利用metscape軟件進行整合研究，結果顯示，四妙勇安湯對DF的干預在膽酸生物合成、甘油磷脂代謝、神經鞘脂生物合成、組氨酸代謝、嘌呤代謝、嘧啶代謝等代謝通路顯著富集。

3討論

本研究運用四妙勇安湯代謝組學與網絡藥理學相結合的方法，首先利用TCMSP數據庫、GeneCards數據庫、OMIM數據庫、TTD數據庫、Uniprot數據庫、PDB 數據庫、String平臺、Metascape平臺、Cytoscape、AutoDockTools、Pymol等軟件對四妙勇安湯有效成分、作用靶點及代謝通路做歸納總結。其次，基于四妙勇安湯的PPI調控網絡圖譜篩選出20個與其他藥物靶點具有較強相關性的靶點，并以此為中心開展研究。再次，根據KEGG通路富集可知，四妙勇安湯可能通過MAPK、TNF、PI3K-Akt、HIF-1信號通路、Toll樣受體信號通路等途徑治療DF，其中磷脂酰基醇信號通路

注：A為對照組、清創組和治療前血清代謝輪廓，B為對照組、西藥組和治療前血清代謝輪廓，C為對照組、中藥組和治療前血清代謝輪廓，D為對照組、中西聯用組和治療前血清代謝輪廓；E為對照組、西藥組、治療前和中西聯用組血清代謝輪廓。

圖4四妙勇安湯干預DF患者血清代謝輪廓

Figure4The Simiao Yongan Decoction intervened intheserum metabolic profile of patients withDF

注： K= 對照組， Q= 清創組， X= 西藥組， Z= 中藥組， ZLQ= 治療前， ZX= 中西聯用組。

圖5四妙勇安湯干預DF患者血清生物標志物層次聚類熱圖

Figure5HierarchicalclusteringheatmapofserumbiomarkersinpatientswithDFintervenedbySimiaoYonganDecoction

注： K= 對照組， ZLQ= 治療前， ZX= 中西聯用組

圖6四妙勇安湯干預DF患者血清生物標志物相對峰面積 Figure6The relativepeak area of serumbiomarkersin patientswithDF intervened by Simiao YonganDecoction

與四妙勇安湯干預DF患者代謝物參與代謝通路的結果一致，進一步說明了四妙勇安湯通過參與磷脂酰基醇代謝途徑改善DF損傷。

磷脂酰基醇途徑是一種細胞內信號轉導途徑，在人類DF中具有重要作用，通過一系列下游底物的絲氨酸或蘇氨酸磷酸化介導，通過響應細胞外信號，促進代謝、細胞存活、生長和血管生成，其代謝途徑相關信號蛋白的活化在控制營養體內平衡和器官存活中具有中心作用，可能作為人類代謝綜合征的基礎機制，同時其由受體酪氨酸激酶（re-ceptortyrosine kinase，RTKs）激活，由磷脂酰肌醇3-激酶R1、磷脂酰肌醇3-激酶R2和磷脂酰肌醇3-激酶R3種基因編碼調節［16]

表3四妙勇安湯干預DF患者代謝物參與代謝通路情況

Table3Theparticipation of metabolites inmetabolic pathwaysof patients withdiabetic footintheinterventionofSimiaoYonganDecoction

圖7四妙勇安湯干預DF患者代謝物參與代謝通路情況 Figure7Theparticipation of metabolitesin metabolicpathways of patients withDFinthe interventionof SimiaoYonganDecoction

綜上所述，本研究首先通過網絡藥理學的方法定位四妙勇安湯治療DF的具體靶點和代謝通路，其次通過研究DF患者的血清代謝組學證明和網絡藥理學的研究結果是一致的，進一步說明了四妙勇安湯治療DF的代謝通路。四妙勇安湯治療DF的機制可能是通過調節磷脂酰基醇信號通路，誘導磷脂酰肌醇3激酶的產生，進而刺激三磷酸磷脂酰肌醇的生成，抑制機體磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺代謝產物，增加機體胰島素敏感性并改善胰腺分泌障礙，有效地緩解DF患者體內脂類代謝的紊亂。四妙勇安湯對減輕DF損害的研究，將中醫整體觀念與現代醫學相結合，內外兼治，這樣一種個性化、立體的治療方式必將成為今后人類醫學發展與追求的方向。

作者貢獻：張可興提出研究思路，設計實驗方案；張博負責網絡藥理學的整個實驗方案的書寫和論文的書寫；吳瓊負責利用TCMSP、GeneCards、OMIM、TTD軟件進行網絡藥理學的具體數據分析和試驗繪圖；朱珊珊、王迪負責血清代謝組學中的血清樣本收集和血清的處理和操作；張春男負責血清樣本的收集及試驗數據的處理分析。

本文無利益沖突。

參考文獻

[1］中國醫療保健國際交流促進會糖尿病足病分會，國際血管聯盟中國分部糖尿病足病專家委員會.中國糖尿病足診治指南［J」.中國臨床醫生雜志，2020，6（1）：19-27.

［2］甘兆義，李春妮，韋雄麗，等.糖尿病周圍神經病變的早期診斷及治療進展［J］.中國衛生標準管理，2023，14（11）：194-198.DOI： 10.3969/j.issn.1674-9316.2023.11.042.

［3］張可興.四妙勇安湯治療熱毒熾盛型糖尿病足臨床及代謝組學研究［D］.哈爾濱：黑龍江中醫藥大學，2021.

[4］趙益，王林華，廖懷章，等.基于網絡藥理學及分子對接探討四妙勇安湯治療糖尿病足的作用機制［J］.湖南中醫雜志，2023，39（8）：166-173.DOI：10.16808/j.cnki.issn1003-7705.2023.08.039.

［5］韓松林.中醫綜合外治法治療糖尿病足潰瘍期療效觀察［J］.實用中醫藥雜志，2019，35（5）：612-613.

［6］揭珊珊，劉建鑫，于崢，等.四妙勇安湯抗炎機制的研究進展［J].中國中醫基礎醫學雜志，2022，28（9）：1539-1542.DOI：10.19945/j.cnki.issn.1006-3250.20211109.001.

[7]RUJL，LIP，WANG JN，et al. TCMSP：a database of systemspharmacology for drug discovery from herbal medicines[J].JCheminform，2014，6：13.D0I：10.1186/1758-2946-6-13.

[8]CONSORTIUM U. UniProt：the universal protein knowledgebasein 2021[J].Nucleic Acids Res，2021，49（D1）：D480-489.DOI：10.1093/nar/gkaa1100.

[9]SAFRAN M，DALAHI，ALEXANDERJ，et al.GeneCards Version3：the human gene integrator[J].Database（Oxford），2010，2010：baq020.DOI：10.1093/database/baq020.

[10]AMBERGER JS，HAMOSH A. Searching online mendelianinheritance in man（OMIM）：a knowledgebase of human genesand genetic phenotypes [J].Curr Protoc Bioinformatics，2017，58：1.2.1-1.2.1.2.12. D0I： 10.1002/cpbi.27.

[11]WANG Y X， ZHANG S，LI F C，et al. Therapeutic targetdatabase 2O2O：enriched resource for facilitating research and earlydevelopment of targeted therapeutics[J].Nucleic Acids Res，2020，48（D1）：D1031-1041. D0I：10.1093/nar/gkz981.

[12]SZKLARCZYKD，FRANCESCHINI A，WYDER S，et al.STRING v1O：protein-protein interaction networks，integratedover the tree of life[J].Nucleic Acids Res，2O15，43（Databaseissue）：D447-452.DOI：10.1093/nar/gku1003.

[13] ZHOU YY，ZHOU B，PACHE L，et al. Metascape providesa biologist-oriented resource for the analysis of systems-leveldatasets[J].Nat Commun，2019，10（1）：1523.DOI：10.1038/s41467-019-09234-6.

[14]BURLEY SK，BERMANHM，KLEYWEGTGJ，et al.Proteindata bank（PDB）：the single global macromolecular structurearchive［J].Methods Mol Biol，2017，1607：627-641.DOI：10.1007/978-1-4939-7000-1_26.

[15]SHANNON P， MARKIEL A， OZIER O，et al. Cytoscape ：a software environment for integrated models of biomolecularinteraction networks［J].GenomeRes，2003，13（11）：2498-2504.DOI： 10.1101/gr.1239303.

[16]CHANGL，GRAHAMPH，NIJ，et al. TargetingPI3K/Akt/mTOR signaling pathway in the treatment of prostate cancerradioresistance[J].Crit Rev Oncol，2015，96（3）：507-517.DOI：10.1016/j.critrevonc.2015.07.005.（收稿日期：2025-02-14；修回日期：2025-05-26）