馮凱祥，袁 帥，申 思，周 潔，景東帥，潘夢音，劉小莉

食管癌中AQP-3的表達與腫瘤轉移的關系

馮凱祥，袁 帥，申 思，周 潔，景東帥，潘夢音，劉小莉

目的探討AQP-3在食管癌組織中的表達特點及其在食管癌發生、轉移中的意義。方法采用免疫組織化學方法檢測21例食管癌組織及15例正常組織中AQP-3的表達。結果AQP-3在食管癌組織中的表達顯著高于其在正常食管組織中的表達，差異具有統計學意義(P<0.05)；有淋巴結轉移的食管癌組織中AQP-3的表達水平比無淋巴結轉移的高；AQP-3的表達與分化程度及分期有關(P<0.05)，與患者性別、年齡無明顯相關(P>0.05)。結論AQP-3在食管癌組織中的異常表達與食管癌發生、轉移存在密切的關系。

食管癌；AQP-3；免疫組化；侵襲轉移

食管癌是我國常見的惡性腫瘤，其死亡率居第4位，5 a生存率低于10%。盡管在食管癌的診斷、治療上取得了較大進展，但由于腫瘤的侵襲轉移等原因，食管癌發病率、死亡率仍無明顯下降。AQP-3是一種既參與水代謝，又介導甘油代謝的水通道蛋白[1]，具有增加細胞膜水通透力等功能。研究顯示AQP-3參與多種腫瘤的形成過程，與皮膚鱗癌、口腔鱗癌、肺腺癌等關系密切[2-3]。本研究通過檢測AQP-3在食管癌中的表達情況，探討其在食管癌侵襲轉移中的作用。

1 資料與方法

1.1 標本來源收集2009年10月～2013年12月河南科技大學第一附屬醫院手術切除的食管鱗癌組織標本21例，食管正常組織15例為對照組。所有病例術前均有完整臨床資料，未化療、放療，手術標本取材后經10%福爾馬林固定，常規石蠟包埋。

1.2 主要試劑AQP-3兔抗人抗體(稀釋濃度1∶150)、免疫組化試劑盒均購自北京博奧森生物技術有限公司；DAB顯色試劑盒(AR-0612)購自北京鼎國昌盛生物技術有限公司；其他試劑均為分析純。

1.3 方法每例蠟塊4 μm厚連續切片2張，進行免疫組化染色。石蠟切片脫蠟至水化，抗原修復、冷卻，3%H2O2甲醇溶液室溫孵育。PBS沖洗3次。加封閉血清，滴加一抗，4℃過夜，PBS沖洗后滴加生物素標記二抗，37℃孵育30 min，PBS沖洗，DAB顯色。蘇木素復染2 min，鹽酸乙醇分化，自來水沖洗，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 結果判斷標準AQP-3陽性反應呈棕黃色,主要存在于細胞膜及細胞漿。隨機觀察10個高倍鏡(×200)視野計算平均值。按腫瘤細胞中陽性比例計算百分率，<5%為(-)，5%～25%為(+)，26%～50%為(++)，>50%為(+++)區分染色強度。

1.5 統計學處理應用SPSS 13.0統計軟件進行統計學分析。樣本率的比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

AQP-3定位于胞膜和胞漿，細胞陽性染色部分呈棕黃色或棕褐色顆粒，見圖1。在食管癌組織中可見AQP-3的表達率為76.19%，而正常組織中AQP-3的表達率為33.33%，食管癌組織中AQP-3的染色強度及陽性表達率顯著高于正常食管組織，差異有統計學意義(χ2=6.612，P<0.05)，見表1。AQP-3在TNM臨床分期Ⅲ～Ⅳ期腫瘤的陽性表達率為92.86%，在Ⅰ～Ⅱ期腫瘤中表達率為42.86%，兩者比較具有統計學意義(χ2=6.431，P<0.05)，隨TNM分期遞增，AQP-3的表達逐漸增高；在有淋巴結轉移組的表達陽性率(93.33%)顯著高于無淋巴結轉移組(χ2=8.505、33.33%，P<0.05)。AQP-3的表達與患者性別、年齡無明顯相關性(P>0.05)，見表2。

A：正常食管組織 B：食管癌組織
(AQP-3免疫組化×200) (AQP-3免疫組化×200)

圖1AQP-3在正常食管與食管癌組織的表達

表1 食管癌及正常食管組織中AQP-3蛋白的表達強度

與正常食管比較χ2=6.612，P=0.01。

表2 食管癌患者食管組織中AQP-3的表達與臨床病理特征的關系

3 討論

惡性腫瘤的侵襲轉移嚴重影響患者的預后。研究表明，癌細胞為滿足其快速增殖、分裂和侵襲轉移的需要，比正常細胞更需要水分子的快速跨膜轉運，多數腫瘤有很高的組織間隙液體壓力和很高的微血管滲透性[4]。水通道蛋白(AQPs)是具有高度選擇性的疏水性蛋白，哺乳動物中迄今為止已發現11種，廣泛分布于各種組織與器官，且同一細胞可表達多種AQPs，它們的存在很好解釋了水分子的快速轉運[5]，對細胞的生命活動意義重大。AQP-3屬于AQPs的亞族，在多種不同來源的腫瘤中表達水平較高，尤其是在侵襲性強的腫瘤中[6]。

本研究結果顯示，在食管癌組織中AQP-3表達與在正常食管組織中的表達相比明顯增多，且差異有統計學意義(P<0.05)。TNM分期Ⅲ～Ⅳ期腫瘤的陽性表達率(92.86%)顯著高于Ⅰ～Ⅱ期腫瘤(42.86%)；組織分型與AQP-3的表達有關(P<0.05)；在有淋巴結轉移的食管癌中AQP-3的陽性率明顯高于無淋巴結轉移者(P<0.05)，可推測AQP-3參與食管癌的淋巴轉移；AQP-3在食管癌組織中與患者性別、年齡無明顯相關性(P>0.05)。有研究證實，AQP-3在腫瘤細胞及腫瘤新生血管內皮細胞中均表達，提示AQP3參與腫瘤的血管生成[7]，綜上可推測AQP-3同時參與食管癌的淋巴道、血行轉移，AQP-3在食管癌組織中異常表達，可能與食管癌生發、浸潤、遷移之間存在密切關系。

綜上所述，AQP-3可為細胞的復制以及腫瘤向周圍浸潤的需要提供動力，AQP-3能增強腫瘤的轉移能力，對食管癌的發生、發展起促進作用。這一發現將有利于進一步分析水通道蛋白與食管癌的關系，為食管癌的預防、檢測、治療帶來新的理念，AQP3抑制劑的開發可有助于控制食管癌的侵襲轉移，但需進一步研究。

[1]陳銳,林晨,古力加汗·艾爾肯,等.宮頸鱗狀上皮癌變過程中水通道蛋白3的表達研究[J].中國腫瘤臨床,2012,39(3):145-148.

[2]Liu YL,Matsuzaki T,Nakazawa T,et al.Expression of aquaporin 3(AQP-3) in normal and neoplastic lung tissues[J].Hum Pathol,2007,38(1):171-178.

[3]Kusayama M,Wada K,Nagata M,et al.Critical role of aquaporin 3 on growth of human esophageal and oral squamous cell carcinoma[J].Cancer Sci,2011,102(6):1128-1136.

[4]牛文斌,孔祥波,魏巍.水通道蛋白與前列腺癌侵襲和轉移的相關性研究[J].中國老年學雜志,2006,26(11):1526-1527.

[5]李向楠,潘雪,喬保平,等.水通道蛋白4在食管鱗癌中的表達[J].中華實驗外科雜志,2009,26(1):82-83.

[6]王鳳玲,張小霞,蔡棟梁.AQP3在人非小細胞肺癌中的表達及其臨床意義[J].黑龍江醫藥科學,2013,36(6):53-55.

[7]Wang J,Gui Z,Deng L,et al.c-Met upregulates aquaporin-3 expression in human gastric carcinoma cells via the ERK signalling pathway[J].Cancer Lett,2012,319(1):109-117.

RelationshipBetweenAQP-3ExpressioninEsophagealCancerandTumorMetastasis

FENG Kai-xiang,YUAN Shuai,SHEN Si,et al

(Medical College,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China)

ObjectiveTo explore the AQP-3 expressed in esophageal tissue characteristics,its significance in esophageal cancer occurrence and metastasis.MethodsTo use immunohistochemical method to detect 21 cases of esophageal cancer tissue and 15 cases of normal tissue in the expression of AQP-3.ResultsThe expression of AQP-3 in esophageal tissue was significantly higher than normal esophageal tissue,statistically significant difference (P<0.05); Ⅲ～Ⅳ period and with lymph node metastasis of esophageal cancer tissues of AQP-3 expression level,respectively,compared with the Ⅰ～Ⅱ period and high without lymph node metastasis (P<0.05).And the expression of AQP-3 and patients’gender,age,no significant correlation (P>0.05).ConclusionThe AQP-3 abnormal expression in esophageal cancer organizations is closely related to esophageal cancer occurrence and metastasis and prognosis.

esophageal cancer;AQP-3；immunohistochemical；invasion and metastasis

1.國家級大學生創新創業訓練計劃項目(201310464035) 2.河南科技大學大學生研究訓練計劃項目(2012190)

2014-03-09

河南科技大學醫學院，河南洛陽 471003

馮凱祥(1991-)，男，河南武陟人，從事食管鱗癌癌變機制及防治研究工作。

R735.1

A

1672-688X(2014)02-0097-03