離子色譜法測定特殊醫(yī)學用途配方食品中肌醇

毛 璉，張 斌，王清波，郭美娟，王利平，張?zhí)m天,*，史國華,*

（1.河北省食品檢驗研究院，河北省食品安全重點實驗室，河北 石家莊 050200；2.瑞士萬通中國有限公司，北京 100080）

特殊醫(yī)學用途配方食品是我國的一類特殊食品，是指為滿足進食受限、消化吸收障礙、代謝紊亂或特定疾病狀態(tài)人群對營養(yǎng)素或膳食的特殊需要，專門加工配制而成的配方食品，包括適用于0～12 月齡嬰兒的特殊醫(yī)學用途嬰兒配方食品和適用于1 歲以上人群的特殊醫(yī)學用途配方食品，該類產品需在醫(yī)生或臨床營養(yǎng)師指導下使用。特殊醫(yī)學用途配方食品依據產品標準[1-2]可以添加多種營養(yǎng)成分，其中包括肌醇，依據相關國家標準[1-2]規(guī)定，肌醇在特殊醫(yī)學用途配方食品中的添加量應為1.0～9.5 mg/100 kJ。肌醇又名肌糖、環(huán)己六醇，為B族維生素的一種[3]，外觀為白色或類白色結晶性粉末，無臭、味甜，易溶于水[4]，是合成許多生物分子，如肌醇磷脂、膜磷脂、鞘磷脂的前體，也是人體不可缺少的營養(yǎng)成分之一[5]。

目前食品中肌醇的測定方法主要有氣相色譜法[6-9]、氣相色譜-質譜法[10-11]、微生物法[12-13]、液相色譜法[14]、液相色譜-質譜法[15-17]、離子色譜法[18-19]等。但是特殊醫(yī)學用途配方食品中肌醇的檢測方法研究較少，國內文獻鮮有報道。本研究建立離子色譜法檢測特殊醫(yī)學用途配方食品中肌醇的方法，對于肌醇檢測方法的完善具有一定意義。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

市場采購17 種特殊醫(yī)學用途配方食品，包括乳蛋白部分水解配方（樣品編號1、2、3、4）、乳蛋白深度水解配方（樣品編號5、6、7）、氨基酸配方（樣品編號8、9）、全營養(yǎng)配方（樣品編號10、11）、早產/低出生體質量嬰兒配方乳粉（樣品編號12、13、14）、早產/低出生體質量嬰兒配方液態(tài)乳（樣品編號15）、無乳糖配方（樣品編號16、17）等不同基質。

質控樣品：嬰兒配方乳粉QC-IP-707，肌醇含量參考值為131.1 mg/100 g，肌醇含量參考值范圍為110.2～152.0 mg/100 g。

超純水（電阻率＞18.2 MΩ·cm） 實驗室自制；乙酸鈉、氫氧化鈉（色譜純） 德國Merck公司；鹽酸（優(yōu)級純） 天津市光復精細化工研究所；標準品：肌醇（純度≥99%） 北京曼哈格生物科技有限公司。

1.2 儀器與設備

930離子色譜儀（配安培檢測器，金工作電極）、Metrosep Carb 2-150/4.0分離柱 瑞士萬通中國有限公司；Quintix124-1CN萬分之一電子天平 北京賽多利斯公司；PHS-3C pH計 上海儀電科學儀器股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 標準溶液配制

準確稱取0.050 0 g肌醇標準品，在（105±1） ℃烘干2 h，用超純水溶解后轉移到50 mL容量瓶中并定容，配制成肌醇質量濃度為1 000 mg/L的標準儲備液。將儲備液用超純水逐級稀釋，配制質量濃度分別為0.000、0.025、0.050、0.100、0.250、0.500、1.000、2.000、5.000、10.000、20.000、40.000 mg/L的標準使用液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3.2 樣品前處理

準確稱取31.25 g樣品，用超純水溶解并定容至250 mL容量瓶中，搖勻。移取8 mL樣品溶液于100 mL容量瓶中，加超純水2 mL，用體積分數(shù)0.5%鹽酸調節(jié)溶液pH值為4.5±0.2，靜置至少2 min，用超純水稀釋至刻度，混勻。用定性濾紙過濾，棄去最初10 mL濾液，取后續(xù)濾液用0.22 μm針式過濾器過濾至自動進樣器樣品瓶中進行測定。

1.3.3 色譜條件

色譜柱：Metrosep Carb 2-150/4.0mm分離柱或同等性能的色譜柱；淋洗液：100 mmol/L NaOH＋10 mmol/L CH3COONa（體積比1∶1），流速0.5 mL/min；進樣量20 μL；柱溫30 ℃；運行時間45 min；檢測器溫度35 ℃；檢測器時間程序為300 ms、0.05 V，50 ms、0.55 V，200 ms、－0.1 V。

1.3.4 肌醇含量的計算

肌醇含量按下式計算。

式中：X1為由標準曲線查得的測試液中肌醇含量/（mg/L）；31.25為稱樣量/g；250為樣品定容體積/mL；8為移取的樣品測試液體積/mL；100為移取的樣品測試液定容體積/mL；10和10 000均為單位換算系數(shù)。

2 結果與分析

2.1 線性范圍、檢出限和定量限

繪制肌醇含量-峰面積標準曲線，得出回歸方程及相關系數(shù)。結果顯示，在0.025～40.000 mg/L范圍內，肌醇含量與峰面積呈良好的線性關系，線性方程為y=141.4x－2.8（R2=0.999 9）。

配制一定質量濃度的肌醇標準溶液逐級稀釋，其中質量濃度0.012 5 mg/L的肌醇溶液測試結果滿足測定10 個樣品時檢出率為50%的要求，根據1.3.4節(jié)公式得出該方法檢出限為0.125 mg/100 g。定量限一般為3～5 倍檢出限，即為0.5 mg/100 g。

2.2 準確度實驗

將質控樣品按照所建立的方法測定肌醇含量，計算平均值與參考值的偏差。由表1可知，該質控樣品的測定值與參考值的偏差為3.5%，滿足GB/T 27404—2008《實驗室質量控制規(guī)范 食品理化檢測》[20]中對準確度的要求。

表1 質控樣品的準確度實驗結果（n=3）Table 1 Accuracy of ion chromatography for quality control sample (n = 3)

2.3 精密度實驗

將17 種樣品按照所建立的方法測定肌醇含量，計算相對標準偏差。由表2可知，不同基質、不同肌醇含量的特殊醫(yī)學用途配方食品肌醇含量測定結果的相對標準偏差均滿足GB/T 27404—2008[20]要求（＜5%），說明本方法的測定重復性滿足實驗要求。

表2 肌醇的精密度實驗結果（n=6）Table 2 Precision of ion chromatography for inositol determination (n = 6)

2.4 加標回收率實驗

取8 mL、4 種基質類型（樣品編號見表3）樣品溶液，進行加標回收率實驗，參考GB/T 27404—2008[20]中的要求并結合樣品肌醇的本底值確定加標水平（分別做3 次平行），驗證方法在不同特殊醫(yī)學用途配方食品基質中的回收率。

表3 肌醇的加標回收率實驗結果（n=3）Table 3 Spiked recovery of inositol (n = 3)

續(xù)表3

由表3可知，不同基質樣品離子色譜法測得的回收率為83.1%～102.9%。除樣品8外，其他3 個樣品不是所有加標量的回收率均滿足GB/T 27404—2008[20]中的要求（95%～105%），說明不同樣品基質的方法適用性可能存在差異。

3 結 論

采用離子色譜法測定不同基質特殊醫(yī)學用途配方食品中游離肌醇含量，建立特殊醫(yī)學用途配方食品中肌醇的定量分析方法，方法的精密度、準確度、加標回收率、曲線的線性范圍等均符合分析要求，且操作過程簡單、快速、分析時間短、可行性好，適用于特殊醫(yī)學用途配方食品中游離肌醇含量的測定。