α-嵌合蛋白基因表達對宮頸癌增殖、侵襲、凋亡等惡性生物學行為的影響

張 蕊 王彬彬 郭鳳蓮 武海英 河南省周口市婦幼保健院婦產科 466000； 河南省人民醫院產科

宮頸癌是女性生殖系統中發病率最高的惡性腫瘤性疾病之一，世界衛生組織統計發現全球每年新發宮頸癌患者約為50萬，每年由宮頸癌導致的死亡病例數高達28萬[1]。對無法進行手術根治的中晚期患者、明確影響疾病發生發展的關鍵分子并進行靶向治療是目前最可靠的方式之一。α-嵌合蛋白基因(CHN1)是一種定位于人類2號染色體上、可編碼GTP酶激活蛋白的分子[2]，目前已有研究證實其對神經發育、突觸傳導等具有重要作用的，但關于其在宮頸癌病情進展中的作用研究較少涉及。本文檢測宮頸良惡性疾病中CHN1表達的差異，進一步判斷其表達對癌細胞惡性生物學行為的影響，初步明確CHN1在宮頸癌發生發展過程中扮演的角色，為后續宮頸癌靶向治療探索提供新思路，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 病例資料 選取2016年1月—2020年7月本院收治的原發性宮頸癌患者86例作為宮頸癌組，同期在本院進行宮腔鏡治療的宮頸息肉患者110例作為宮頸息肉組。宮頸癌組：年齡34～72歲，平均年齡(63.18±7.43)歲；宮頸息肉組：年齡33～74歲，平均年齡(63.50±7.91)歲。兩組患者的年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)。入組標準：(1)術中所得宮頸病灶組織經病理檢查確診疾病類型；(2)首次發生宮頸病變并接受手術治療；(3)本人或直系親屬簽署知情同意書。排除標準：(1)合并其他臟器惡性腫瘤性疾??；(2)入院前6個月內外科手術史；(3)年齡<18周歲或者>80周歲；(4)妊娠或者哺乳期女性。

1.2 病灶組織獲取及目標基因表達量檢測 留取兩組患者術中所得宮頸病灶組織標本，凍存于液氮罐中備用。采用Real-time PCR檢測其中目標基因表達量，步驟包括總RNA提取→反轉錄合成cDNA→Realtime PCR反應，實驗過程中涉及的試劑及試劑盒均購自上海西唐生物有限公司。設置宮頸息肉組病灶組織中目標基因表達量為標準值100，計算宮頸癌組織中對應基因的相應表達量。見表1。

表1 目表基因引物序列

1.3 統計學方法 選擇SPSS21.0統計軟件處理所得數據，各個目表基因的mRNA表達量屬于計量資料，符合正態分布且以均數±標準差表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗。檢驗水平α=0.05。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 CHN1表達量 宮頸息肉組病灶標本中CHN1 mRNA的表達量為100，宮頸癌組病灶標本中CHN1 mRNA的相對表達量為174.38±29.76，組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2 宮頸癌細胞增殖相關基因表達量 宮頸癌組病灶標本中TSPAN31 mRNA的表達量低于宮頸息肉組，DNMT3A、Nek2 mRNA的表達量高于宮頸息肉組，組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 兩組病灶標本中宮頸癌細胞增殖相關基因表達量比較

2.3 宮頸癌細胞侵襲相關基因表達量 宮頸癌組病灶標本中LGR5、S6K1、GRP94、SLP-2 mRNA的表達量高于宮頸息肉組，組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組病灶標本中宮頸癌細胞侵襲相關基因表達量比較

2.4 宮頸癌細胞凋亡相關基因表達量 宮頸癌組病灶標本中Survivin、Smo、PC1 mRNA的表達量高于宮頸息肉組，組間比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 兩組病灶標本中宮頸癌細胞凋亡相關基因表達量比較

2.5 相關性分析 Pearson檢驗發現，宮頸癌病灶標本中CHN1 mRNA表達量與宮頸癌細胞增殖相關基因TSPAN31 mRNA的表達量呈負相關(r=-0.418，P<0.05)，與DNMT3A、Nek2 mRNA的表達量呈正相關(r=0.387、0.503，P<0.05)；與宮頸癌細胞侵襲相關基因LGR5、S6K1、GRP94、SLP-2 mRNA的表達量呈正相關(r=0.433、0.398、0.461、0.564，P<0.05)；與宮頸癌細胞凋亡相關基因Survivin、Smo、PC1 mRNA的表達量呈正相關(r=0.391、0.438、0.476，P<0.05)。

3 討論

CHN1已被報道與阿爾茲海默癥[3]等神經系統疾患的發生相關，關于CHN1與惡性腫瘤特別是宮頸癌中的研究目前開展極少。本文中首先對比宮頸良惡性病灶組織中CHN1的表達量，發現宮頸癌組織中CHN1 mRNA的表達量較宮頸息肉組織高，說明在宮頸惡性腫瘤組織中存在CHN1的異常高表達，換言之CHN1的高表達參與宮頸細胞惡變。CHN1對宮頸癌細胞具體惡性行為的影響未明，下文從增殖、侵襲、凋亡基因表達三方面展開闡述。

宮頸癌細胞的惡性行為主要包括異常增殖、侵襲以及凋亡障礙，多種基因參與并影響惡性腫瘤細胞的上述行為，故檢測具體基因表達量可作為間接反映癌細胞惡性行為嚴重程度的手段，同時用于腫瘤惡性程度評估。TSPAN31、DNMT3A、Nek2已在不同研究中被發現與宮頸癌細胞的惡性增殖相關，TSPAN31通過下調靶基因CDK4而影響細胞周期的G1階段，從而抑制腫瘤細胞增殖[4]；DNMT3A可S、G2/M期細胞的比例，降低G0/G1期細胞比例，從而加速腫瘤細胞完成G0/G1期、促進細胞增殖[5]；Nek2在有絲分裂過程中參與中心體分離并導致細胞核缺陷，加速腫瘤細胞的惡性增殖[6]。LGR5、S6K1、GRP94、SLP-2被發現與宮頸癌細胞的侵襲能力直接相關，LGR5通過促進惡性腫瘤細胞的上皮間質轉化而加速其侵襲、轉移[7]；S6K1可增加MM-2/9，抑制TIMP-1/2表達而促進癌細胞侵襲轉移[8]；GRP94、SLP-2加速癌細胞上皮間質轉化而增強其遷移能力[9]。本文中宮頸癌組織中增殖基因TSPAN31 mRNA的表達量較良性組織低，DNMT3A、Nek2 mRNA的表達量較良性組織高；侵襲基因LGR5、S6K1、GRP94、SLP-2 mRNA的表達量較良性組織高，這一結果符合癌細胞的行為特征。相關性分析指出，CHN1表達量與上述增殖、侵襲基因的具體表達量直接相關，說明CHN1可影響宮頸癌細胞的增殖、侵襲相關基因表達，間接影響癌細胞增殖、侵襲能力。

正常細胞遵循程序化死亡過程，當這一過程難以進行時可導致細胞凋亡障礙、細胞癌變發生。與眾多惡性腫瘤細胞相似，宮頸癌細胞也存在凋亡障礙，Survivin、Smo、PC1是左右其具體凋亡行為的重要基因。Survivin通過抑制caspase-3、caspase-7活性等作用途徑發揮抗凋亡作用，同時可加速細胞向有絲分裂的S期轉換、促進細胞增殖[10]；Smo通過促進下游轉錄因子Gli1表達而抑制癌細胞凋亡[11]；PC1通過加速細胞有絲分裂進程、抑制caspase等凋亡執行分子表達而發揮抗凋亡作用[12]。本文中宮頸癌組織中上述基因的表達量均高于宮頸息肉組織，且相關性分析進一步指出：宮頸癌組織中CHN1表達量與上述凋亡分子表達量呈正相關，說明CHN1可通過抑制癌細胞凋亡而參與宮頸癌的發生發展。

綜上所述，可得出結論：宮頸癌組織中存在CHN1異常高表達，且該分子可能通過左右宮頸癌細胞增殖、侵襲、凋亡相關基因表達而促進細胞惡性生物學行為的進展。文中所得結論由基因表達檢測等間接方式所得，有待后續直接細胞學研究核實。