重組人谷氧還蛋白１在大腸桿菌中表達(dá)條件的優(yōu)化、純化及活性檢測(cè)
2006-01-01 00:00:00劉瑩瑩鄒朝霞周宏博吳莉芳房紹紅
生命科學(xué)研究 2006年3期
摘 要：為進(jìn)一步研究谷氧還蛋白1(Grx1)的生物學(xué)功能及作用機(jī)制，將已構(gòu)建的pRSETA-Grx1融合蛋白表達(dá)栽體在大腸桿菌BL21(DE3)菌株中表達(dá)，并優(yōu)化表達(dá)條件，用SDS-PAGE和凝膠影像分析。結(jié)果表明，當(dāng)菌體密度OD600為1．0時(shí)開始誘導(dǎo)，加入終農(nóng)度0．5 mmol／L IPTG，37℃，110±5 r／min振蕩培養(yǎng)5 h，重組蛋白為可溶性，表達(dá)量達(dá)30％以上。用Ni-NTA樹脂親和層析純化重組蛋白，獲得蛋白質(zhì)純度達(dá)90%以上；Western印跡結(jié)果表明，該蛋白具有免疫活性；MTT結(jié)果顯示，終濃度為10mg／L Grxl重組蛋白具有保護(hù)細(xì)胞抵御500μmol／L H2O2作用(P<0．01)。
關(guān)鍵詞：pRSETA-Crx1；表達(dá)條件優(yōu)化；純化
中圖分類號(hào)：Q782
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A
文章編號(hào)：1007—7847(2006)03—0228—05
