攜帶大片段ＢＩＢＡＣ克隆在不同農(nóng)桿菌中的遺傳穩(wěn)定性研究

摘要：大片段克隆在農(nóng)桿菌中的穩(wěn)定性是利用可轉(zhuǎn)化大片段載體進(jìn)行農(nóng)桿菌介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵問題。選用插入片段分子質(zhì)量分6.1為150kb和50kb的BIBAC克隆，測(cè)定了在3種農(nóng)桿菌AGL-1，EHA105和LBA4404中的遺傳穩(wěn)定性。從第1、3、5次繼代培養(yǎng)的農(nóng)桿菌中抽提的質(zhì)粒及酶切結(jié)果顯示，由于農(nóng)桿菌背景質(zhì)粒的干擾，難以判斷質(zhì)粒的降解與否。將農(nóng)桿菌質(zhì)粒再轉(zhuǎn)化到大腸桿菌宿主中，發(fā)現(xiàn)來自農(nóng)桿菌ACL-1和EHA105的質(zhì)粒出現(xiàn)了明顯的降解，片段變小，而來自農(nóng)桿菌LBA4404的質(zhì)粒沒有變化。結(jié)果表明，大片段BIBAC質(zhì)粒在不同農(nóng)桿菌菌株中的穩(wěn)定性不同，在農(nóng)桿菌LBA4404中比較穩(wěn)定，適合用于遺傳轉(zhuǎn)化。

關(guān)鍵詞：大片段基因文庫；根癌農(nóng)桿菌；遺傳穩(wěn)定性

中圖分類號(hào)：Q75

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007-7847(2006)04—0291-04