Ｐ５３表達(dá)對(duì)結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的臨床預(yù)測(cè)價(jià)值

【摘要】 目的 探討P53陽性表達(dá)對(duì)結(jié)腸癌早期肝轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)價(jià)值。方法 采用免疫組化Elivision法檢測(cè)52例結(jié)腸癌標(biāo)本的P53表達(dá)，并完成2年隨訪，對(duì)其表達(dá)率行相關(guān)性分析。結(jié)果 P53的陽性表達(dá)在大腸癌Dukes分期、淋巴結(jié)有無腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移及隨訪2年后有無肝轉(zhuǎn)移中均有顯著性差異(P<0.05)。 結(jié)論 P53的表達(dá)對(duì)結(jié)腸癌早期肝轉(zhuǎn)移有一定的預(yù)測(cè)作用，有益于臨床對(duì)結(jié)腸癌的評(píng)估、治療。

【關(guān)鍵詞】 P53；結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移；預(yù)測(cè)

文章編號(hào)：1003-1383(2007)02-0122-03

中圖分類號(hào)：R 735.35 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

結(jié)腸癌是我國較常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率位居第5位，在消化道惡性腫瘤中居第3位。其中結(jié)腸癌合并肝轉(zhuǎn)移相當(dāng)常見，15%—25%的結(jié)直腸癌患者在原發(fā)腫瘤診斷時(shí)即有肝轉(zhuǎn)移，20%左右的患者在原發(fā)腫瘤治療后隨訪期出現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移［1］，20%—35%的患者表現(xiàn)出肝臟為唯一轉(zhuǎn)移部位［2］。目前在結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移早期尚無有效檢測(cè)措施，尋找預(yù)測(cè)結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的指標(biāo)對(duì)指導(dǎo)臨床治療、提高結(jié)腸癌患者的預(yù)后具有重要意義。我們應(yīng)用免疫組化，檢測(cè)52例結(jié)腸癌組織及淋巴結(jié)中P53的表達(dá)，并且對(duì)隨訪滿2年的患者進(jìn)行P53表達(dá)的重新統(tǒng)計(jì)，探討P53的表達(dá)與結(jié)腸癌發(fā)展、結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。

材料與方法

1.材料 收集我院2002年4月—2004年5月期間手術(shù)切除原發(fā)性結(jié)腸癌標(biāo)本52例，所有病例術(shù)前均未行化療、放療或免疫治療，術(shù)前肝功能Child分期均為A期，術(shù)前B超或CT、術(shù)中探查均未提示肝轉(zhuǎn)移，術(shù)后結(jié)腸癌均經(jīng)病理證實(shí)。52例中男性36例，女性16例，年齡38—72歲，平均年齡50.5歲。到2006年6月止，52例隨訪中完成隨訪46例，失訪6例，隨訪率88.46％，隨訪期間患者均實(shí)行5-FU/CF聯(lián)合化療。

2.方法 52例新鮮標(biāo)本用10％福爾馬林常規(guī)固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，載玻片經(jīng)多聚-L-賴氨酸防脫片處理。①石蠟切片80℃烤片30 min。②組織切片脫蠟，梯度酒精脫水：放入二甲苯15 min×3次，放入100%乙醇×2次，95％乙醇×2次，80％乙醇×1次，流水沖洗5 min。③抗原修復(fù)：0.1 mol/L枸櫞酸緩沖液pH 6.0。操作步驟：電飯煲于耐高溫塑料切片架上，放入盛有酸緩沖液的耐高溫容器皿內(nèi)，再放入電飯煲中煮10 min，拔去電源插頭，保溫20 min，取出后冷卻至室溫。④蒸餾水洗，磷酸緩沖液(PBS)洗，3 min×2次。⑤滴加一抗50—80 μl/張切片，濕盒孵育，4℃冰箱過夜。⑥次日晨，PBS洗3遍，滴加二抗59—80 μl/張切片，濕盒孵育，室溫l h左右。⑦PBS洗3遍，滴加100 μl新鮮配制的DAB顯色3—10 min。⑧自來水沖洗，蘇木精復(fù)染15 s，鹽酸乙醇分化3 s，溫水蘭化，梯度乙醇脫水，80％乙醇→乙醇95％→純乙醇，吹干，中性樹膠封固。⑨鏡檢。

3.陽性結(jié)果判斷 免疫組化染色采用Elivision法，鼠抗人單克隆抗體P53(MAB-0142)與免疫組化染色孵育盒均為美國Maxin公司產(chǎn)品(購自福州邁新生物技術(shù)公司)，染色設(shè)對(duì)照組，以PBS代替一抗作陰性對(duì)照，用已知陽性切片作陽性對(duì)照。細(xì)胞核呈現(xiàn)清晰的棕黃色顆粒為陽性，按陽性細(xì)胞所占的比例及顯色深度分為：①陰性(-)：陽性細(xì)胞數(shù)<10％(如圖1)；②弱陽性(+)：陽性細(xì)胞數(shù)10％—25％，顯色淺，顆粒細(xì)；③中度陽性(++)：陽性細(xì)胞數(shù)26％—50％，顯色較深(如圖2)；④強(qiáng)陽性(+++)：陽性細(xì)胞數(shù)>50％，顯色深，顆粒粗。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用χ²檢驗(yàn)，P<0.05為有顯著性差異。

結(jié)果

1.P53表達(dá)與Dukes分期的相關(guān)性 52例大腸癌標(biāo)本中P53蛋白表達(dá)陽性38例，陽性率73.08％。按Dukes分期分類，A、B期共19例，P53陽性表達(dá)10例，陽性率52.63％，C、D期共33例，P53陽性表達(dá)28例，陽性率84.85％，P53在C、D期的陽性表達(dá)顯著高于A、B期(P<0.05)，見表1。

2.P53表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移的相關(guān)性 本組發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移49例，其中P53陽性表達(dá)46例，陽性率93.88％，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移3例，其中P53陽性表達(dá)1例，陽性率33.33％，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的陽性表達(dá)顯著高于無轉(zhuǎn)移者(P<0.05)，見表2。

3.P53表達(dá)與肝轉(zhuǎn)移的相關(guān)性 完成2年隨訪的46例患者，B超或CT檢查發(fā)現(xiàn)其中有肝轉(zhuǎn)移者21例，其大腸癌標(biāo)本中P53蛋白表達(dá)陽性19例，陽性率90.48％，檢查未發(fā)現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移25例，其大腸癌標(biāo)本中P53蛋白表達(dá)陽性15例，陽性率60.00％，有肝轉(zhuǎn)移者的陽性表達(dá)顯著高于無轉(zhuǎn)移者(P<0.05)，見表3。

討論

人類P53基因定位于17號(hào)染色體短臂1區(qū)3.1帶(17 P 13.1)，是一個(gè)非常重要的抑癌基因，全長(zhǎng)16—20 kb，基因組有11個(gè)外顯子，10個(gè)內(nèi)含子。P53基因分為野生型(wtp53)和突變型(mtp53)。wtp53的抗腫瘤作用主要阻止細(xì)胞于G1／GO期，使細(xì)胞不能進(jìn)入S期，從而抑制細(xì)胞增殖，誘發(fā)細(xì)胞凋亡。P53基因大約有50％［3］的突變率，當(dāng)P53基因發(fā)生突變時(shí)，可導(dǎo)致穩(wěn)定的蛋白質(zhì)不能完成抑制細(xì)胞增殖的作用，并且促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，侵襲力增強(qiáng)，使P53基因由抑癌基因轉(zhuǎn)為原癌基因。有學(xué)者統(tǒng)計(jì)結(jié)腸癌中P53蛋白陽性率為71.7％［4］，本組病例為73.08％，較之稍高，可能與本組病例以Dukes C、D期為主有關(guān)。通過對(duì)P53蛋白表達(dá)與Dukes分期相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)蛋白P53在C、D期的陽性表達(dá)顯著高于A、B期(P<0.05)，與袁家賓等［5］報(bào)道大腸癌中P53表達(dá)情況相同，提示P53基因突變可能在結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。有學(xué)者［6］研究證實(shí)，P53蛋白表達(dá)也與腫瘤的分化程度有關(guān)，惡性細(xì)胞與形態(tài)正常的細(xì)胞群間的差別十分明顯，在低分化增殖區(qū)內(nèi)的細(xì)胞核染色鮮明，顆粒粗，與高分化腫瘤細(xì)胞存在顯著性差異。P53蛋白表達(dá)在有腫瘤細(xì)胞侵襲淋巴結(jié)與無侵襲淋巴結(jié)中表達(dá)有顯著性差異(P<0.05)，提示P53突變?cè)谀[瘤細(xì)胞侵襲淋巴結(jié)及周圍組織中起一定的預(yù)測(cè)作用，可用于結(jié)腸癌臨床分期。本實(shí)驗(yàn)對(duì)完成2年隨訪病例標(biāo)本中P53蛋白表達(dá)率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)發(fā)生肝轉(zhuǎn)移者中P53陽性表達(dá)率為90.48％，無肝轉(zhuǎn)移者中P53陽性表達(dá)率60.00％，兩者之間有顯著性差異(P<0.05)，預(yù)示P53陽性表達(dá)的結(jié)腸癌患者較陰性者發(fā)生肝轉(zhuǎn)移可能性大。Porter PL［7］于1992年報(bào)道P53基因突變減弱了對(duì)癌細(xì)胞增殖的抑制作用，易于癌細(xì)胞浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移，本組觀察結(jié)果與之相一致。結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生主要是通過門靜脈、肝動(dòng)脈等回流所致，其中腫瘤新生血管的形成極其重要，鐘世順等［8］通過檢測(cè)結(jié)腸癌不同區(qū)域MVD、VEGF和P53蛋白表達(dá)，提出在結(jié)腸癌血管生成過程中可能存在P53-VEGF調(diào)節(jié)旁路，P53蛋白表達(dá)能促進(jìn)腫瘤血管的增生。在結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移中，P53基因突變可能存在相似作用，與VEGF等聯(lián)合促進(jìn)肝轉(zhuǎn)移灶中腫瘤微血管的形成。

結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移早期診斷的有效檢測(cè)指標(biāo)較少，CEA、 CA19-9 c-erbB-2等在臨床上應(yīng)用較多，但缺乏一定的特異性。本組病例通過采用免疫組化Elivision法，對(duì)52例結(jié)腸癌標(biāo)本進(jìn)行了P53蛋白表達(dá)的檢測(cè)，提示其與結(jié)腸癌Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及肝轉(zhuǎn)移有關(guān)聯(lián)，對(duì)大腸癌早期肝轉(zhuǎn)移有一定的預(yù)測(cè)作用。但本組樣本例數(shù)較少，中、晚期病例為多，且隨訪年限較短，P53的陽性表達(dá)對(duì)早期肝轉(zhuǎn)移的特異性以及能否和其他檢測(cè)指標(biāo)聯(lián)合運(yùn)用預(yù)測(cè)結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移有待進(jìn)一步觀察。

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