核桃ＳＳＲ反應(yīng)體系的優(yōu)化

摘 要：以清香、香鈴、愛米格為試材，利用CTAB法提取基因組DNA，將PCR體系的主要成分設(shè)定5個梯度，根據(jù)每個成分的變化引起的PCR—SSR的效果差異，探討了核桃SSR技術(shù)中PCR體系的主要成分對擴(kuò)增結(jié)果的影響，并對引物WCA321的適宜退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。最終確定了引物WGA321的最適退火溫度為48～52℃，PCR反應(yīng)體系的最佳條件為：15μL體系中，Mg²⁺1.0mmol/L，dNTPs濃度0.40mmol/L，TaqE用量為0.5U，DNA模板1.0ng／μL，引物濃度為0.4μmol/L。利用此反應(yīng)體系對部分核桃品種進(jìn)行PCR擴(kuò)增并電泳檢測，擴(kuò)增結(jié)果清晰且有較高的多態(tài)性，表明該體系適合核桃的親緣關(guān)系分析。

關(guān)鍵詞：核桃；SSR；優(yōu)化

中圖分類號：S664.1

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1009—9980(2007)02—140—06