黑皮素－１受體在增生性瘢痕組織中的表達與分布

[摘要]目的：研究黑皮素-1受體（melanocortin-1 receptor， MC-1R）在增生性瘢痕組織中的表達和分布特點，探討它與增生性瘢痕形成的關系。方法：利用兔抗人MC-1R抗體進行免疫組織化學染色，并測定8例增生性瘢痕，8例表淺性瘢痕和16例同體的正常皮膚標本切片染色后的平均灰度值，分別檢測MC-1R在上述不同組織中表達的差異。結果：在正常皮膚、表淺瘢痕和增生性瘢痕中，MC-1R免疫陽性產物呈棕黃色顆粒狀，主要分布于表皮基底層細胞胞漿中。在增生性瘢痕組織中，MC-1R灰度值（159.2±5.5）明顯高于正常皮膚（134.7±5.9）和表淺性瘢痕（135.9±9.3），差異顯著（P＜0.01）。而后兩者無明顯差異(P＞0.05)。結論：增生性瘢痕的形成可能與 MC-1R在增生性瘢痕組織中表達明顯減少，由其介導的α-黑色素細胞刺激素（α-melanocyte stimulating hormone，α-MSH）對膠原蛋白的代謝和細胞外基質沉積的調節作用減弱有關。

[關鍵詞]瘢痕；增生性；黑皮素-1受體

[中圖分類號]Q813.1[文獻標識碼]A[文章編號]1008-6455（2007）09-1178-03

The study of expression and distribution of melanocortin-1 receptor in hypertrophic scar

CHENG Yong， LONG Jian-hong

（Department of Plastic and Burns Surgery，the First People's Hospital of Chenzhou，Chenzhou 423000，Hunan，China)

Abstract:Objective To observe the expression and the distribution of melanocortin-1 receptor (MC-1R) in hypertrophic scar and then identifying the relationship between MC-1R and formation of hypertrophic scar.MethodsBioptic samples were taken from 8 cases of hypertrophic scar， 8 cases of superficial scar and 16 cases of controlled normal self-skin.MC-1R immunohistochemistry staining and its grey scale were examined in each sample.ResultsIn normal skin， superficial scar and hypertrophic scar， MC-1R immune positive material was yellow-brown granule， mainly distributed in plasma in basal lamina of epidermal. semi quantitative diction showed that the mean of MC-1R grey scale in hypertrophic scar(159.2±5.5) was significantly higher than that of normal skin（134.7±5.9）and superficial scar（135.9±9.3）， respectively（P＜0.01）. But， there was no significant deference between normal skin and superficial scar. ConclusionOur result suggested that the formation of hypertrophic scar was possibly relative to the decrease in expression of MC-1R in hypertrophic scar and then the regulation of α-MSH by MC-1R in the sediment of extracellular matrix.

Key words: cicatrix; hypertrophic; receptor melanocortin type 1

瘢痕是組織損傷后修復的必然結果。在修復過程中，由于全身和∕或局部因素的影響，?？蓪е录毎饣|過度沉積而形成增生性瘢痕或瘢痕疙瘩。α-黑素細胞刺激素是一種來源豐富的多肽類激素，可在皮膚多種細胞內生成并參與多種代謝平衡的調節[1-2]。黑皮素-1受體是廣泛分布于皮膚等多種組織中的一種α-MSH受體，α-MSH與MC-1R結合可誘導多種細胞效應使細胞外基質沉積減少。本實驗以增生性瘢痕，表淺性瘢痕及同體的正常皮膚為研究對象，采用免疫組織化學方法（SABC法），檢測標本中MC-1R表達的差異，探討增生性瘢痕的形成與MC-1R的關系。

1材料和方法

1.1 材料

1.1.1主要試劑：兔抗人MC-1R抗體（美國ALPHA Diagnostic公司產品）SABC試劑盒（美國Sigma公司產品）

1.1.2 組織標本：所有實驗標本均取自我科住院病人，并預先征得病人同意。選取對照組皮膚來自瘢痕相鄰或色澤無明顯差異部位標本進行實驗，排除因不同部位黑色素細胞含量不同對檢測結果的影響。標本中增生性瘢痕8例(病程1～3年)，表淺性瘢痕8例（病程1～2年），同體正常皮膚16例，其中男性10例，女性6例，年齡2～46歲。所取標本均置4%多聚甲醛溶液中保存。

1.2 方法

1.2.1 切片制作：常規恒溫冰凍切片機冷凍切片，厚10μm。

1.2.2 MC-1R免疫組織化學染色：常規貼片后過氧化氫溶液（H2O2）處理10min，抗原修復液處理5min，正常山羊血清封閉60min后直接加入1:200MC-1R抗體處理120min，滴加生物素化山羊抗兔IgG30min，滴加SABC試劑30min，DAB/H2O2顯色10～15min，以上各步間均用0.01mol/L磷酸緩沖液洗片。脫水、透明、封片。陰性對照組用正常山羊血清代替MC-1R抗體反應。所有反應均在室溫下進行。

1.2.3 光學顯微鏡觀察：選擇同組正常皮膚和表淺性瘢痕、增生瘢痕于相同光照強度下分別以低倍鏡，高倍鏡依次觀察表皮、表皮下結締組織中MC-1R的分布情況。

1.2.4 統計分析：隨機從每組切片中抽取三張切片，用同濟醫科大學研制的HPIAS-1000彩色病理圖文分析系統半定量測定其灰度值（灰度值越小表示染色越深，MC-1R表達越強）。采用單因素方差分析法，分析每組標本均數間差異。

2結果

MC-1R在正常皮膚組、表淺瘢痕組和增生瘢痕組中僅在表皮基底層表達，免疫組化陽性產物呈棕黃色顆粒和斑片狀分布，以細胞內為主(見圖1，圖中棕黃色顆粒分布處為MC-1R表達陽性部位)，且不同取材部位的同組標本在MC-1R的表達上未見有顯著性差異。通過對三組標本灰度值的測定，增生性瘢痕中的表達明顯低于正常皮膚和表淺性瘢痕，而后二者無明顯差異(見表1)。

3討論

增生性瘢痕是傷口上皮愈合后成纖維細胞繼續旺盛增殖并分泌細胞外基質，其中主要的膠原蛋白合成代謝明顯超過降解代謝，導致膠原的大量堆積，而形成的異常病理組織[3]。α-MSH可在垂體及表皮內角質形成細胞，黑素細胞和朗格漢斯細胞產生，其中角質形成細胞是合成α-MSH的主要細胞，但在黑素細胞中α-MSH濃度最高[1]。α-MSH在體外可使人成纖維細胞生成的IL-8明顯增加，而IL-8可抑制膠原蛋白的合成[4-5]。最新的研究證實α-MSH通過與在體外培養的人皮膚成纖維細胞MC-1R結合，可直接同時抑制膠原蛋白Ⅰ、Ⅲ和Ⅴ的合成，并能下調轉化生長因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）存在時成纖維細胞前膠原蛋白ⅠC端肽（procollagen type Ⅰ C-terminal peptide，PICP）的分泌[6]。在體內，α-MSH可減緩TGF-β誘導的纖維化。TGF-β是強有力的促細胞分裂劑，能誘導新生基質蛋白的生成，還可減少蛋白酶的分泌，增加細胞基質的沉積，并抑制其降解[7]。α-MSH自身具有增加人成纖維細胞組織間質膠原酶活性，在mRNA水平增加人成纖維細胞基質金屬蛋白酶（matrix metal proteins， MMPs）和其合成酶活性作用， 而人成纖維細胞組織間質膠原酶和基質金屬蛋白酶是分解細胞外基質重要的蛋白酶[8]?？梢姦?MSH在防止細胞外基質過度沉積方面起著重要的調節作用[2]。黑皮素受體（MCR）是一種具有7個跨膜區的G蛋白偶聯受體。已知體內有5種MCR，其中MC-1R廣泛分布于多種組織。皮膚組織中，MC-1R在黑色素細胞、角朊細胞、成纖維細胞等幾乎所有類型的細胞皆有表達[9-10]。研究表明MC-1R是α-MSH的專一性受體，成纖維細胞只表達MCR家族中的MC-1R，α-MSH與其結合才能誘導出諸如上述促進人成纖維細胞分泌IL-8并同時減少膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ的沉積等這些生物效應[11]。

本實驗顯示MC-1R在增生性瘢痕，表淺性瘢痕及正常皮膚皆有表達。而且MC-1R在增生性瘢痕中表達明顯低于表淺性瘢痕和正常皮膚，后兩者表達無明顯差異。在增生性瘢痕形成過程中，可能由于某些因素導致了成纖維細胞等靶細胞MC-1R表達下降，能與α-MSH結合的MC-1R減少，從而導致成纖維細胞IL-8分泌減少，α-MSH抑制膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ生成等生物效應減弱，膠原蛋白等細胞外基質合成和降解代謝平衡被打破，細胞外基質過度沉積，瘢痕增生；反之，在表淺性瘢痕形成過程中，MC-1R的表達正常，α-MSH與其結合對細胞外基質沉積的調節作用亦正常，細胞外基質不會過度沉積形成瘢痕增生。然而，其具體的機制還有待進一步研究。

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[收稿日期]2007-05-09[修回日期]2007-08-22

編輯/張惠娟

注：“本文中所涉及到的圖表、注解、公式等內容請以PDF格式閱讀原文。”