婦良膠囊中阿魏酸的含量測(cè)定

摘 要:目的：建立反相高效液相法測(cè)定婦良膠囊中阿魏酸含量的方法。方法：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，流動(dòng)相為乙腈－0.5%冰醋酸溶液（20：68）；檢測(cè)波長(zhǎng)為316nm。結(jié)果：阿魏酸在0.0328～0.328μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（ r＝0.9999）；平均回收率為97.82%，RSD=1.50%。結(jié)論：該方法不僅操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，且重復(fù)性好，可用于婦良膠囊的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：反相高效液相法;婦良膠囊;阿魏酸;含量測(cè)定

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1673-2197（2008）01-035-02

婦良膠囊是由婦良片改劑型而來(lái)，其處方由當(dāng)歸、熟地黃、續(xù)斷、白芍、山藥、白術(shù)、地榆、白芷、牡蠣、海螵蛸 、阿膠、血余炭12味中藥組成，具有補(bǔ)血健脾、固經(jīng)止帶的功效，用于治療血虛脾弱、帶下質(zhì)清、崩漏色淡、經(jīng)后少腹隱痛、頭昏目眩、面色無(wú)華。原劑型標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定，有時(shí)僅對(duì)處方中臣藥白芍所含主成分芍藥苷的含量進(jìn)行了測(cè)定［1］，為了更有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，除測(cè)定芍藥苷外，本文建立反相高效液相色譜法（RP-HPLC）測(cè)定了處方中君藥當(dāng)歸所含有效成分阿魏酸的含量，以確保臨床療效。

1 儀器與試藥

儀器：日本島津LC-10A高效液相色譜儀；SPD-10AV紫外檢測(cè)器；CT-100恒溫箱。LC-2002數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)：上海必能信CQ-250型超聲波清洗器；BP211D AG電子天平(德國(guó)Sartorius)。

試藥：乙腈為色譜醇，甲醇、乙醇、冰醋酸為分析純，水為重蒸水。阿魏酸（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：0773-9910）；婦良膠囊（湖南三金制藥有限公司提供，批號(hào)：041020、041211、041212、041213、041217、041218、041219、041220、041221、041222、041223)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱Diamonsil C18(250×4.6mm，5μm)(迪馬公司)；流動(dòng)相：乙腈－0.5%冰醋酸溶液（20：68）；檢測(cè)波長(zhǎng)：316nm；流速：0.8mL.min-1；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20μL。理論塔板數(shù)以阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥12小時(shí)的阿魏酸對(duì)照品適量，分別加70%乙醇制成每lmL含0.0108mg、0.0164mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取婦良膠囊20粒，傾出內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，取細(xì)粉約1.5g，精密稱定，置于錐形瓶中，精密加入70%乙醇25mL，稱定重量，回流提取30分鐘，放冷，再稱定重量，以70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備

按處方比例稱取除當(dāng)歸外的其它藥材適量，依照婦良膠囊的制備工藝和供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.5 線性關(guān)系的考察

分別精密吸取阿魏酸對(duì)照品溶液(濃度0.0164mg.mL-1)2μL、4μL、10μL、16μL、20μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，以阿魏酸的進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。回歸方程為Y＝1E＋07X-7649（r＝0.9999）。結(jié)果表明，阿魏酸在0.0328～0.328μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取阿魏酸對(duì)照品溶液(0.0108mg.mL-1)20μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，峰面積積分值分別為3174853、3151251、3125366、3134852、3139203、3165733，RSD=0.60％，表明本方法精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批婦良膠囊（批號(hào)：041020)，傾出內(nèi)容物，研細(xì)，取細(xì)粉5份，每份約1.5g，精密稱定，按前述方法制備樣品，進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果分別為0.0349mg/粒、0.0352mg/粒、0.0346mg/粒、0.0338mg/粒、0.0339mg/粒，平均為0.0345mg/粒，RSD為1.78％。表明本方法具有較好的重復(fù)性。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取重復(fù)性試驗(yàn)中試驗(yàn)號(hào)5的供試品溶液，每隔2h進(jìn)樣1次，每次20μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，峰面積積分值分別為2041795、2069995、2102500、2097858、2117981、2121165，RSD為1.46％。結(jié)果表明樣品在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗(yàn)

貯備溶液:精密稱取阿魏酸對(duì)照品4.3mg，置于50ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成每1mL中含阿魏酸0.086mg的溶液。

取已知含量（0.0345mg/粒）的婦良膠囊(批號(hào):041020)，傾出內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.75g(6份)，精密稱定，置于錐形瓶中，分別精密加入貯備溶液0.8mL2份、1mL2份、1.2mL2份，水浴揮干，按前述方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

2.10 樣品測(cè)定

按擬定的含量測(cè)定方法測(cè)定10批婦良膠囊中阿魏酸的含量，按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果見表2。

3 討論

供試品溶液制備：曾對(duì)提取溶媒、提取時(shí)間、提取方法進(jìn)行了考察，結(jié)果以加入70%乙醇、回流提取30分鐘為佳。

干擾試驗(yàn)結(jié)果表明：當(dāng)歸的陰性對(duì)照樣品無(wú)干擾，見圖1～圖3。

說(shuō)明選用RP-HPLC測(cè)定婦良膠囊中阿魏酸的含量，不僅操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，而且重現(xiàn)性好，可用于婦良膠囊的質(zhì)量控制。

根據(jù)測(cè)定的結(jié)果，并考慮到方中當(dāng)歸藥材的產(chǎn)地、采收、加工等因素，暫定為每粒婦良膠囊所含當(dāng)歸以阿魏酸（C10H10O4）計(jì)不得少于0.02mg。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 譚朝陽(yáng)，尤昭玲.HPLC法測(cè)定婦良片中芍藥苷的含量［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2004，10（4）：18.

(責(zé)任編輯：杜 靖)