降血壓保健藥品的研究

摘 要:采用適當的實驗方法對降血壓口服液中的有效成分——大豆皂苷進行提取分離，并對其含量進行測定，提取皂苷之前需經脫脂處理。總皂苷的含量測定最常用的方法是比色法。大豆蛋白活性肽具有多種藥理作用，對其進行科學研究，弄清了其降血壓機理，發現其能抑制血管緊張素轉換酶(ACE)的活性，減少血管緊張素Ⅱ的形成，防止血管末端收縮，達到降血壓的目的。采用正交實驗，優選出最佳配方及生產工藝。

關鍵詞：黑豆；降血壓；口服液；大豆皂苷；大豆蛋白活性肽

中圖分類號：R972+.4文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2008）01-047-03

1 高血壓的國內外現狀調查

目前，高血壓是影響心血管疾病及腎臟疾病患者病死率的主要因素之一，血壓的控制對預防和減少心、腦、腎等并發癥、降低病死率、提高生命質量有極其重要的意義［1］。調查發現，只有1／3的高血壓患者血壓能控制在正常水平，與臨床試驗結果差距較大(臨床試驗中，80%的患者治療后可達目標血壓)。

在我國，心腦血管疾病的發生率高達80%，死亡率接近總死亡率的50%，平均每20分鐘就有1人因心腦血管疾病而死亡。

目前，高血壓治療的新策略是一面降血壓一面調脂［3］，這樣更能有效地控制血壓，降低心肌梗死和腦卒死發生的危險，從而降低病死率，提高生命質量。

2 實驗內容

2.1 材料及制備方法

黑豆、蔗糖、蜂蜜、山楂、茯苓、決明子，SA-高效乳化穩定劑，分離式磨漿機FSM-100，膠體磨DJM-50L，高壓滅菌鍋，電飯鍋。

2.2 工藝流程及操作要點(見圖1)

操作要點：①原料:選擇顆粒飽滿、無霉、無蟲蛀的黑豆，去除皮殼、秸桿、石頭等雜物。②浸泡:在30℃溫水中浸泡8～10h，浸泡水中可加入0.1%碳酸氫鈉溶液，可防止產生豆腥味，縮短浸泡時間，提高均質效果，改善其風味。③磨漿:用80℃～90℃的熱水進行磨漿，保持10min。細磨膠體磨細磨兩遍。④煮漿:95℃～100℃，5～15min。冷卻至30℃～40℃。⑤中藥液制備:選取山楂、茯苓、決明子各15g，室溫下浸泡2h左右，先用大火熬開沸騰，再轉為小火慢熬，熬制1h左右，冷卻至30℃～40℃。中藥加水量600ml，熬好后藥液大約150ml。⑥調配漿液:蔗糖、穩定劑攪拌混合均勻后，加入濃縮藥液、蜂蜜調配。均質：一次均質20～25MPa，二次均質25～40Mpa。溫度75℃～85℃。⑦灌裝:采用殺菌后的玻璃瓶灌裝。殺菌:121℃，15min。冷卻、成品。

2.3 有效成分的研究

2.3.1 紫外分光光度法測定大豆皂苷

儀器:UV-190紫外分光光度儀(日本島律)，齊墩果酸標準品(中國藥品生物制品檢定所)，其它化學試劑均為分析純，試驗所得產品。

方法和結果:精密稱取產品3.60g，裝入索氏提取器中，用環己烷脫脂，回收環己烷。

大豆皂苷的提取:脫脂完的樣品用甲醇連續回流12h，提取大豆總皂苷，回收甲醇，用蒸餾水充分溶解。水溶液用水飽和過的正丁醇溶液萃取，揮去正丁醇，用甲醇充分溶解定容于25ml的容量瓶中，得樣品提取液備用。

測定方法:精密吸取測定溶液于干凈具塞試管中，揮去甲醇，精密加入新鮮配制的5％香草醛-冰乙酸溶液0.2ml，再精密加入高氯酸試液0.8ml，蓋塞，搖勻，置于60℃水浴條件下加熱15min后，取出立即冷卻至室溫。精密加入5ml冰乙醇溶液，搖勻，迅速以顯色試劑為空白對照，在UV-190紫外分光光度計上進行含量測定。

吸收曲線的測定:吸取標準品溶液1ml，按上述測定方法在波長400～800nm之間進行掃描測定，結果表明，在波長547nm處有最大吸收，因此，確定547nm為測定波長。

顯色穩定性的考察:吸取標準品溶液0.5ml，依上述測定方法每隔20min測定1次，吸收度依次為0.369、0.368、0.368、0.367、0.366、0.357、0.350，數據表明，顯色試劑與皂苷反應所生成的有色物質在100min內顯色基本穩定，操作迅速可以用于定量分析，可靠程度較高。

線性關系的考察:

標準品溶液的制備:精密稱取齊墩果酸2.5mg于25ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容，作為標準品溶液。

標準曲線的制備:依次精密吸取上述標準品試液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1ml分別置于具塞試管中。按上述測定方法測定，數據見表1。

由上述數據得回歸方程為:A=0.0466C-0.0192，r=0.9993(N=5)，表明樣品濃度在3.333~16.667ug／ml范圍內測定，線性關系良好。

精密度試驗:精密吸取標準品溶液0.5ml共5份，分別加入到5支具塞試管中，按上述方法測定，數據見表2。

樣品總皂苷含量的測定：精密吸取樣品溶液1ml置于具塞試管中，按上述測定方法操作，并測定吸光度，用回歸方程計算各樣品總皂苷含量。數據:吸光度(A):0.115；樣品總皂苷含量:0.115。

2.3.2 薄層掃描法測定大豆皂苷的含量

材料:日本島津薄層掃描儀，微量注射器，高效薄層層析板系，支持劑厚度0.25mm，粒徑10～40mm，其它試劑為分析醇。

薄層層析條件:展開劑為異丙醇:乙酸乙酯:甲醇:氯仿:水(2:2:1.5:1:1)。顯色劑為10%硫酸乙醇溶液。噴霧顯色時加熱105℃，10min，冷卻后掃描測定。掃描條件為反射鋸齒掃描，最大吸收波長是520nm，把它作為掃描波長，掃描速度20mm／min，線性參數S=3。

標準曲線繪制:精密稱取大豆皂苷對照品1.6mg，加50%乙醇定溶于1ml容量瓶中，制成1.6g／ml溶液。分別取上述溶液0.8ul、1.2ul、1.6ul、2.0ul和2.4ul點于同一薄層板上，展開，顯色，掃描測定大豆皂苷斑點面積積分值。計算得回歸方程：A=1010C-34，r=0.998。標準曲線在1.28～3.84ug范圍內與面積積分值呈線性關系。

穩定性試驗依上法層析操作，每隔20min掃描測定一次斑點面積積分值，測定5次，變異系數為0.233，說明在80min內穩定性良好。

精密度試驗:同一塊板上分別點5個提取樣品，展開，顯色后掃描測定大豆皂苷斑點面積積分值，計算得變異系數為0.84。

2.3.3 大豆皂苷的研究

大豆皂苷是由大豆及其它豆類種子中提取出來的一類化學物質，其分子是由低聚糖及齊墩果稀三萜縮合形成的一類化合物。目前使用化學法研究大豆皂苷，確認大豆皂苷元有5個種類，即大豆皂苷元A、大豆皂苷元B、大豆皂苷元C、大豆皂苷元D、大豆皂苷元E［7］。日本學者北川勛和大久保一良對多種豆類中的大豆皂苷進行了分析，認為在完整的皂苷中，天然存在的大豆皂苷有3種，即大豆皂苷元A、大豆皂苷元B、大豆皂苷元E，其它的為DDMP組，均為水解狀態下的人工產物。大豆皂苷顯酸性，加入甲酸能改善分離度。大豆皂苷溶液加入硫酸銨、醋酸鉛等中性鹽類可產生沉淀。大豆皂苷與苯肼反應生成紅棕色沉淀，與五氯化銻反應顯紫藍色，在冰醋酸-乙酰氯溶液中呈紅色，于氯仿-硫酸中呈現綠色熒光［8］。

國內外學者的研究表明，大豆皂苷可以抑制血清中脂類的氧化，抑制過氧化脂質(LPO)的形成，并能降低血液中膽固醇和甘油三酯含量。Ohminami認為，脂肪細胞中由腎上腺素誘導的脂質化過程可因大豆皂苷的存在而受到抑制，大豆皂苷還可抑制ACTH誘導的脂質過氧化過程。我國中山大學、廣州市醫藥公司的科研人員用自制的復方大豆皂苷膠囊，喂養已形成高血脂模型的雄性大鼠，發現此膠囊對高脂大鼠有明顯的降血脂作用［9］。

2.3.4 大豆蛋白活性肽的研究

大豆蛋白活性肽具有增強免疫功能、抑制癌細胞生成、抗衰老、預防心腦血管疾病、雙向調節腸道環境、預防糖尿病和婦女更年期綜合癥等保健作用，這些功能已被人們廣泛認識和應用。采用微生物發酵技術生產的大豆蛋白活性肽，是通過微生物的生化反應將大豆球蛋白轉化為小分子肽，在對小分子肽進行移接和重排的過程中，對某些苦味肽基團進行了修飾和重組，消除產品苦味，并克服了采用酶解法技術生產的大豆蛋白活性肽成本高、苦味大等缺點。由于這種大豆蛋白活性肽的分子量較小，具有容易吸收、運輸速度快等優勢，因此，既可以用于功能性保健藥品的開發生產，也可作為原料、添加劑或中間體，廣泛應用于發酵、制藥、食品、化妝品、飼料及植物營養劑等行業［10］。

3 結果與討論

3.1 最佳工藝配方的確定

采用正交實驗確定降血壓口服液的最佳工藝參數。為了配合正交實驗的進行，我們還對降血壓口服液的感官品質進行了綜合評分，取平均值。正交實驗結果表明，第一組實驗結果最好，綜合評分為92分，但理論上最佳工藝配方為A1B1C1D1E3。由極差值可以看出，對口服液質量影響最大的因素是濃縮藥液，其次為黑豆與水的比例，所以一定要掌握好這兩者的用量。相對而言，蔗糖、蜂蜜影響不大，影響最小的為穩定劑。因為穩定劑對產品質量影響最小，考慮到成本問題，在實際生產中可以采用較理想的生產工藝，即A1B1C1D1E3，黑豆與水的比例為1∶9，蔗糖5g，蜂蜜6.6g，濃縮藥液28ml，穩定劑0.13%。

3.2 影響因素

磨漿水溫及水量對產品的影響:由于豆類含有大量的脂肪鈍化酶，會使豆子具有豆腥味，因此在磨漿時采用熱磨法，使脂肪氧化酶鈍化，可以防止豆腥味的產生。加水量為豆用量的6～10倍，本實驗的豆水比例為1∶9，豆子可充分吸水膨脹，且水溶性蛋白質含量最高，能形成較穩定的乳濁液。

細磨對產品的影響:漿體用膠體磨細磨兩遍，可使其組織內蛋白質及油脂充分析出，使脂肪球破碎，并且把豆漿帶入的或凝結成的粗顆粒磨細，提高原料的利用率，增強了豆漿的乳化程度，使其口感細膩爽滑。

濃縮藥液量對產品的影響:由正交實驗得出，濃縮藥液含量過高會導致產品狀態不佳，出現不穩定、有沉淀、有絮凝、過于濃厚等問題，這是由于山楂中含有果膠，會使溶液粘稠。同時，山楂中含有的酒石酸、蘋果酸等會影響溶液的pH，在等電點pH時或殺菌不當時，就會出現蛋白質凝聚沉淀。所以，一定要避免這種情況發生。實驗中以28ml為最好效果，既保證了濃縮藥液量、藥效，也保證了口服液狀態的穩定。

3.3 產品質量標準及經濟效益

感官指標:色澤呈天然深黃綠色，具有自然滋味及氣味，無異味，無沉淀、分層現象。

微生物指標:細菌總數≤300個／ml，大腸菌群≤30個／ml，無致病菌［15］。

3.4 結論

（1）降血壓口服液的最佳配方為：黑豆與水之比為1:9、蔗糖5g、蜂蜜6.6g、濃縮藥液28ml、穩定劑0.13%。

（2）黑色食品因其自然性、功能性、營養性、科學性而風靡世界。目前，市場上一些黑色食品，如黑芝麻糊、黑米酒等備受人們喜愛，黑豆的營養與藥用價值也受到了人們的關注，但其功能性保健藥品還很少。

（3）降血壓口服液尤其適用于高血壓人群，它不僅滿足了飲食需求，也起到了很好的降血壓效果，具有良好的市場前景。

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(責任編輯：杜 靖)