蘋果凹果類病毒（ＡＤＦＶｄ）的檢測與序列分析

摘要：采集新疆焉耆地區的老果園的蘋果樹枝條、葉片和韌皮部，利用自行設計的方法提取總RNA，根據GenBank中的X99487序列設計引物，利用RT-PCR技術擴增出蘋果凹果類病毒(ADFVd)特異條帶，通過回收克隆測序，結果表明，獲得的7條序列，有5條同源性很高，均在98％以上，另外2條的同源性只有85％左右，這7條序列均已在GenBank中登錄(登錄號：EU031497_EU031503)。在此基礎上利用插入ADFVd目的DNA的質粒為模板，成功合成了地高辛標記的cDNA探針，該探針能很好地用于ADFVd的檢測。同時利用原位RT-PCR技術，做了進一步檢測，證明蘋果葉片中有蘋果凹果類病毒存在，主要分布在葉肉細胞的細胞核中。

關鍵詞：蘋果凹果類病毒；RT-PCR；地高辛；探針；原位RT-PCR；全序列分析

中圖分類號：S661．1 文獻標識碼：A 文章編號：1009-9980(2008)05-682-04