HPLC法測定壯骨健膝顆粒中士的寧的含量

摘要：目的：建立一種簡便、快速的高效液相色譜法測定壯骨健膝顆粒的指標成分士的寧的含量。方法：采用色譜拄為Kromasil C_{18柱，甲醇—1％冰醋酸溶液一三乙胺(23:77:0.4)為流動相，流速為1.0mL／min，柱溫為室溫，檢測波長為260nm。結果：在濃度為30.5μg～122.0μg／mL范圍內具有良好的線性關系，A=21029C--157590(r=0，9998，n=5)，方法回收率為101.7％，RSD為0.67％。結論：該方法簡單，精確，靈敏度高，重現性好，可用于壯骨健膝顆粒的質量控制。}

關鍵詞：壯骨健膝顆粒；士的寧；高效液相色譜；含量測定

中圖分類號：R927.2 文獻標識碼：A

文章編號：1007--2349(2009)09--0063--02

壯骨健膝顆粒由桑寄生、川牛膝、白芍、馬錢子粉等藥材配伍組成。主要作用為補肝腎，強筋骨，祛風濕，活血。馬錢子中的士的寧為其有效成分，但毒性劇烈，其含量高低是引起馬錢子中毒的主要原因，所以選擇士的寧作為含量控制的指標，采用高效液相色譜法測定壯骨健膝顆粒中士的寧的含量，該方法可靠、靈敏、快速。

1 儀器與試藥

1，1儀器LC—10ATvp液相色譜儀，SPD一10AvpUV—VIS檢測器(日本島津)；ODSClg柱(5μm，200mm×4.6mm，北京迪馬公司)，微量進樣器(50μL，上海高鴿工貿有限公司)，ANASTAR色譜數據處理系統(suntex)；電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司)，微孔濾膜(0.45μm，有機相)。

1，2試藥 士的寧化學對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110705--200306)；甲醇(禹王集團，批號20070206072，色譜純)；氨水(上海久億化學試劑有限公司，批號：20070101，分析純)；氯仿(上海試劑總廠，批號20050217，分析純)；冰醋酸(中國上海試劑總廠，批號2004022，分析純)；甲醇(中國上海試劑總廠，批號20050217，分析純)；壯骨健膝顆粒(批號20061201，20061203，20061204)。

2 方法與結果

2，1色譜條件用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇一1％冰醋酸溶液一三乙胺(23:77:O.4)為流動相；流速1.0mL／min；溫度為室溫；檢測波長為260nm。

2，2對照品溶液的制備

精密稱取士的寧化學對照品約6mg，置10mL容量瓶中，加氯仿適量使溶解并稀釋到刻度，搖勻搖勻作為儲備液。精密移取0.5mL于10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2，3供試品溶液的制備精密稱定本品粉末約5g，放入具塞錐形瓶內，加氫氧化鈉2mL，放置30min，精密加入氯仿18mL，密塞稱重，水浴回流2h，放冷，稱重，用氯仿補足重量，提取液過少量無水硫酸鈉的濾紙，取續濾液，精密移取續濾液5mL于10mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，取續濾液，即得。

2，4陰性對照溶液的制備按壯骨健膝顆粒處方及工藝，制備不含馬錢子的陰性樣品。取陰性樣品，照供試品溶液制備方法操作，制備陰性對照溶液。

分別吸取士的寧對照品溶液供試品溶液與陰性對照溶液各20uL注入液相色譜儀。結果表明，在上述色譜條件下黃士的寧與其他成分分離良好，陰性對照溶液與供試品溶液比較，相應位置未出峰，認為無干擾，見圖1～3。

2，5線性關系考察分別精密量取2，2項中對照品溶液儲備液0.5mL、1.0mL、1.2mL、1.5mL、1.8mL、2.0mL于10mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制備成濃度依次為30.5μg／mL，61，0μg／mL，73的寧2μg／mL，91，Sμg／mL，109，8μg／mL，122.0μg／mL的對照品溶液。按2.1項下的色譜條件，分別進樣20μL，記錄色譜圖，以峰面積(A)對濃度(C)線性回歸，求得回歸方程為A=21029C—157590，(r=0.9998，n＝5)，士的寧在30.5～122.Oμg／mL濃度范圍內與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2，6精密度試驗精密吸取士的寧對照品溶液20μL連續進樣6次，以峰面積計算，結果其RSD為2.7％。

2，7重復性試驗按上述供試品溶液制備方法，稱取同批號樣品(批號20061201)6份，分別測定士的寧的峰面積，并計算其含量。結果平均含量為91.24μg／g，RSD為0.7％。

2，8供試品穩定性試驗取2.3項下供試品溶液，分別于0、1、2、4、8和24h進樣，測定士的寧的峰面積，結果計算RSD一3.3％，表明供試品溶液在24h內穩定。

2.9回收率試驗采用加樣回收法，分別精密稱取已知含量的樣品(批號20061201)適量(共7份)，約5g，往第一份中加2mL氨水，18mL氯仿，余下的6份分別精密加入1mL濃度為109.8μg／mL的士的寧標準品，2mL氨水，17mL氯仿。取濃度為30.5μg／mL的標準品做對照。分別進樣20μL，記錄峰面積，并計算回收率，結果士的寧的平均回收率為101.7％，RSD為0.67％，結果見表1。

2，10樣品含量測定分別取不同批號的壯骨健膝顆粒，精密稱定，按上述樣品溶液制備方法和色譜條件測定峰面積積分值，結果見表2。

3 討論

士的寧為馬錢子的主要成分，約占總生物堿的45％，馬錢子堿的藥效只有士的寧的14％。但士的寧毒性劇烈，其含量高低是引起馬錢子中毒的主要原因故對士的寧進行含量測定。

用HPLC法測定士的寧含量時，流動相甲醇：1％醋酸：三乙胺以23:77:0.4的比例時，士的寧的出峰時間不至于過長或過短，且分離效果較好。

HPLC法操作簡便，分離度好，準確度高，重現性好，回收率高，可作為壯骨健膝顆粒中士的寧的含量的測定方法，為壯骨健膝顆粒的質量控制提供了可靠的依據。