Ｅｚｒｉｎ在乳腺癌中的表達及其臨床意義

[摘要] 目的 探討膜細胞骨架連接蛋白Ezrin在乳腺癌中的表達及其與臨床病理參數之間的關系。方法采用免疫組化方法檢測54例乳腺浸潤性導管癌組織中Ezrin蛋白的表達，選擇非典型增生5例，纖維囊性乳腺病9例和男性乳腺發育癥2例作為對照。結果在乳腺浸潤性導管癌中，有淋巴結轉移組Ezrin的表達高于無淋巴結轉移組。結論Ezrin與乳腺浸潤性導管癌的浸潤和轉移密切相關，可以作為預測乳腺浸潤性導管癌淋巴結轉移的重要腫瘤標志物。

[關鍵詞] Ezrin;乳腺腫瘤;淋巴結轉移;腫瘤標志物

[中圖分類號] R737.9[中圖分類號] A[文章編號] 1673-9701(2009)24-168-02

乳腺癌是最常見的惡性腫瘤之一，約占婦女全部癌癥的1/4，多年以來，乳腺癌發病率以經濟發達國家最高。但近年來，我國婦女乳腺癌的發病率逐年升高，并有發病年齡降低的趨勢。膜細胞骨架蛋白Ezrin是ERM(Ezrin-radixin-moesin)家族成員之一，通過連接細胞骨架和細胞膜，對細胞黏附、形態、分化、運動等起重要調節作用。近來研究表明，Ezrin促進腫瘤轉移[1，2]。Andrea 等[3]運用消減雜交技術發現，在鼠乳腺癌細胞株中Ezrin 是一個腫瘤轉移基因。Ezrin 蛋白的C末端與細胞骨架的肌動蛋白相連，N 末端則可通過與細胞表面黏附分子cadherin、CD44 等連接，調節細胞-細胞及細胞-細胞外基質之間的黏附，從而影響腫瘤細胞侵襲性等生物學行為[4，5]。本研究通過免疫組化方法觀察Ezrtin在乳腺浸潤性導管癌組織中的表達情況，來探討Ezrin與乳腺浸潤性導管癌侵襲轉移的關系。

1材料與方法

1.1材料來源

收集本院2005～2007年乳腺切除或單純性乳腺包塊的組織標本70例，其中，非典型增生5例，纖維囊性乳腺病9例和男性乳腺發育癥2例作為對照，浸潤性導管癌54例，其中22例伴淋巴結轉移;全部病理均經組織病理學證實。

1.2方法

采用免疫組織化學(IHC)S-P法，4μm厚的連續切片，抗原修復采用高溫高壓法，S-P試劑及Ezrin單克隆濃縮型抗體均購置福州邁新生物技術有限公司(1∶300)稀釋，每次實驗均用已知陽性切片做陽性對照，用PBS代替一抗做陰性對照，DAB顯色，蘇木素復染，中性樹膠封片，顯微鏡隨機選取5個視野，每個視野計數1000個細胞。

1.3結果判定

Ezrin陽性反應為細胞膜及細胞漿的棕黃染色，呈均一彌漫性分布，按染色強度和陽性表達細胞數，參考Mathew等分級標準:-，無表達;+，<50%細胞陽性表達或染色較淺;++，≥50%陽性表達且深染。(++)稱為強陽性。

1.4統計學方法

采用統計軟件SPSS10.0進行統計學分析，采用卡方檢驗及Speaman等級相關分析，P<0.05表明差異有顯著性。

2結果

2.1Ezrin 在良性乳腺增生組織中的表達

在良性乳腺增生組織中，Ezrin主要分布在腺導管上皮和腺泡上皮細胞胞膜，呈陽性棕黃色顆粒著色(圖1)。

2.2Ezrin 在乳腺浸潤性導管癌組織中的表達

Ezrin在部分乳腺癌組織中胞膜呈強陽性表達，也有部分在胞漿內呈彌漫性強染色(圖2)。Ezrin 在乳腺浸潤性導管癌中有33例強陽性表達(33/54，61.11%)。

2.3Ezrin表達與乳腺癌臨床病理參數的關系

Ezrin在乳腺浸潤性導管癌中有33例異常表達(33/54， 61.11%)，其中在32例無轉移的癌組織中有15例異常表達(15/32，53.12%)，而在22例有淋巴結轉移的癌組織中16例異常表達(16/22，72.73%)。x²檢驗表明，Ezrin 在無轉移的癌組織中的異常表達率較有轉移的癌組織明顯減低，二者之間差異有顯著性(x²=4.261，P=0.039)。Ezrin的異常表達與乳腺癌轉移淋巴結數量的多少密切相關，轉移淋巴結數量越多，Ezrin 的陽性表達率越高(x²=4.234，P=0.040)。見表1。

3討論

侵襲和轉移是惡性腫瘤的主要生物學特征，是導致手術、放療及化療等治療失敗和患者死亡的最主要原因，也是一個極其復雜、多步驟的過程，包括癌細胞從原發部位脫落，結合并降解基底膜;癌細胞侵入血管、淋巴管;癌細胞在循環中運行和滯留;最后穿出血管、淋巴管并增殖形成轉移灶。研究表明，Ezrin在腫瘤的侵襲和轉移中扮演重要角色[8，9]。Ezrin是ERM蛋白家族(Ezrin，Radixin和Moesin)中研究較深入的細胞內骨架蛋白，通過其C-，N-末端分別與細胞骨架和細胞膜蛋白的結合，形成專門的膜區域結構，調節細胞活動如生存、黏附、遷移、侵襲，這些活動在腫瘤發展和進程中都是非常重要的[10]。Ezrin 可作為酪氨酸-磷酸激酶的作用底物，在跨膜信號中發揮調節信號轉導和細胞對信號的反應功能。Khanna等[2]研究發現，促進細胞的生存的MAPK和Akt的活性隨著Ezrin的表達減少而降低。在腫瘤進程的晚期轉移中，不是Akt而是MAPK途徑增加了Ezrin低表達細胞的轉移優勢，這說明Ezrin可能調控多條信號通路來促進腫瘤轉移。另外，Yu等[1]研究發現小GTP酶Rho和Ezrin相關的轉移潛能有密切聯系，通過影響細胞骨架肌動蛋白和細胞形態，調控細胞的黏附和活動[9]。由此看出，Ezrin可能是多條信號通路的交叉點。

Ezrin在不同組織中表達情況不一樣。研究表明，Ezrin 在前列腺癌和子宮內膜腺癌中表達高于其對應的良性病變，而在結腸癌中其表達低于正常組織[8]。本研究數據表明Ezrin在乳腺浸潤性導管癌中的表達明顯高于良性病變，且有淋巴結轉移者比無轉移者更明顯，兩者差異有統計學意義，這說明，Ezrin 在乳腺癌中對腫瘤發生淋巴轉移有著重要的促進作用。

纖維囊性乳腺病是乳腺癌的癌前病變，而合并導管上皮非典型增生的纖維囊性乳腺病更是乳腺癌的前驅病變，本研究數據表明Ezrin在乳腺癌中的表達明顯高于良性病變，這就提示Ezrin在乳腺癌發生的前期可能發揮了一定的作用。通過進一步的分析乳腺癌組織Ezrin高表達的臨床意義發現Ezrin的表達與患者的年齡、腫瘤組織學類型等無關，而與淋巴結轉移與否有關，在有淋巴結轉移者Ezrin表達最高，這進一步說明Ezrin對腫瘤的發生淋巴結轉移有著重要的促進作用。這與Yu等和Khanna等的研究Ezrin蛋白與腫瘤的轉移能力高度相關的結果相一致。

很多實驗證明腫瘤的轉移與細胞表面分子(CD44、Met)關系密切，而Ezrin蛋白可以和他們發生作用，可能參與到腫瘤轉移的過程中，在對神經系統腫瘤、結腸癌等研究中發現Ezrin蛋白可直接或間接與細胞表面黏附分子E-cadherin和CD44等結合而調節瘤細胞的黏附性，影響腫瘤的侵襲性和轉移。近年來，在對前列腺癌、食管癌、胰腺癌、卵巢癌和橫紋肌肉瘤等的研究發現，在幾種癌癥類型中的高表達，都提示Ezrin與這些惡性腫瘤的發生、發展以及轉移有關。我們觀察到，Ezrin在浸潤性乳腺導管癌組織中高表達，在有淋巴結轉移的原發癌灶中這種異常表達更明顯，有局部淋巴結轉移者的異常表達率明顯高于無局部淋巴結轉移者，兩者之間差異呈顯著的正相關。一方面，在機體正常情況下，Ezrin發揮正常作用維持細胞形態;另一方面，隨著腫瘤發生發展，Ezrin表達增強，致使腫瘤細胞運動能力增強，說明Ezrin與乳腺導管癌的浸潤和轉移密切相關，可以作為預測浸潤性乳腺導管癌淋巴結轉移的腫瘤標志物。

[參考文獻]

[1] Yu Y，Khan J，Khanna C，et al. Expression profiling identifies the cytoskeletal organizer ezrin and the developmental homeoprotein Six-1 as key metastatic regulators[J]. Nat Med，2004，10(2):175-256.

[2] Khanna C，Wan X，Bose S，et al. The membrane-cytoskeleton linker ezrin is necessary for osteosarcoma metastasis[J]. Nat Med， 2004， 10(2):182-188.

[3] Nestl A，Von Stein OD，Zatloukal K，et al. Gene expression patterns associated with the metastatic phenotype in rodent and human tumors[J]. Cancer Res，2001，61(4):1569-1577.

[4] Hunt KW， Ezrin. A key component in tumor metastasis[J]. Trends Mol Med，2004，10(5):201-205.

[5] Curto M，Mc Clatchey AI. Ezrin. a metastatic detERMinant?[J]. Cancer Cell，2004，5(2):113-117.

[6] Mathew J， Hines JE， Obafunwa JO， et al. CD44 is expressed in hepatocellular carcinomas showing vascular invasion[J]. J Pathol，1996， 179(1):74-83.

[7] Gonzalea MA，Pinder SE，Wencyk PM，et al. An immunohistochemical examination of the expression of E-cadherin，αand β/γ-catenins，and α2 and β1 integrins in invasive breast cancer[J]. J Pathol，1999， 187(5):523-529.

[8] Martin TA，Harrison G，Mansel RE，et al. The role of the CD44 /ezrin complex in cancer metastasis[J]. Crit Rev Oncol Hematol，2003，46(2):165-186.

[9] McClatchey AI. Merlin and ERM proteins:unappreciated roles in cancer development?[J]. Cancer，2003，3(11):877-884.

[10] Bretscher A，Edwards K，Fehon RG，et al. ERM proteins and merlin:integrators at the cell cortex[J]. Nature Rev Mol Cell Biol，2002， 3(8):586-599.

(收稿日期:2009-02-25)